VETERINARY 미생물학
의 식별 Clostridium chauvoei 임상 샘플에서 문화의 사기꾼 경우에 의하여 PCR
의 식별 Clostridium chauvoei 분야에서의 자료 그리고 임상의 경우 청록색,그것은 징후를 사용하 PCR
세인트 MiyashiroI,*A.F.C.NassarI; M.C.A.,M.SouzaI,J.B.CarvalhoI;J.B.E. 160>
블랙 레그 증상. 하나의 근육 샘플의 혐기성 조건 하에서의 분리는 순수한 배양에서 클로스 트리 디움 퍼프린 겐스를 나타냈다.
주요 단어:클로스 트리 디움 차우 보에이;블랙 레그;소;회로판.
요약
클로스 트리 디움 차우 보에이의 존재는 증상 옹에 의해 영향을받는 7 마리의 송아지에서 간,근육 및 중족골 골수 샘플의 조리 된 고기 배지 배양으로부터의 회로 기판 반응에 의해 검출되었다. 혐기성 조건 하에서 근육 샘플을 분리하면 순수한 배양에서 클로스 트리 디움 퍼프린젠이 밝혀졌습니다. 160>
키워드:클로스 트리 디움 차우 보 에이,증상이있는 옹,소,회피.
클로스 트리 디움 종 은 상당한 의학적 및 경제적 중요성을 지닌 혐기성 박테리아 군을 구성하는 속 중 하나입니다. 클로스트리디움증은 곱셈(1)도중 필연적인 독소 생산을 가진 그들의 발달을 위한 조건을 제안하는 어떤 신체 부위든지에서 생길 수 있는 이 속의 박테리아에 기인한 다양한 질병에 주어진 일반적인 이름입니다.
클로스 트리 디움 쇼보 에이 소,양 및 기타 반추 동물의 검은 다리 및 악성 부종의 원인균입니다(4). 소의 검은 다리는 비 외상성 내인성 감염이며,상당한 비율의 소는 간에서 차우 보에이를 보유 할 수 있습니다. 영향을받는 동물은 식욕 부진,우울,발열 및 절름발이(한쪽 사지)로 뜨겁고 고통스러운 부종을 나타내며 춥고 부종이 있습니다. 사망은 12~48 시간 내에 나타납니다. 이 약제는 큰 근육(허벅지,횡격막 및 심장)을 선호하는 것으로 보이며,부검시 어둡고 붉고 건조하며 해면질입니다(11). 또한,이 경우,환자는 종종 다른 증상이 나타날 수 있습니다. 2013 년 12 월 1 일,2013 년 12 월 1 일,2013 년 12 월 1 일,2013 년 12 월 1 일,2013 년 12 월 1 일,2013 년 12 월 1 일,2013 년 12 월 1 일,2013 년 12 월 1 일,2013 년 12 월 1 일,2013 년 12 월 1 일,2013 년 12 월 1 일,2013 년 12 월 1 일,2013 년 12 월 1 일,2013 년 12 월 1 일,2013 년
블랙 레그 및 악성 부종의 사전 진단은 임상 적 및 병리학 적 소견에 달려 있지만,질병의 확인은 일반적으로 독소 생성 및 면역 학적 방법과 같은 유기체를 분리하고 확인함으로써 발견됩니다(9,13). 그러나 이러한 진단 방법은 시간이 많이 걸리고 힘들다. 또한,면역 학적 방법은 공통적으로 다양한 항원을 가지고 있기 때문에 모호한 결과를 얻을 수 있습니다(4).
중합 효소 연쇄 반응에 의한 박테리아 게놈의 특정 표적 영역의 핵산 증폭은 검출 및 진단 목적으로 널리 사용되어왔다(15). 또한,많은 클로스트리디움 종을 식별하는데 실제로 사용되어왔다. 따라서 블랙 레그의 정확한 진단은 종종 어렵습니다. 표준 진단은 면역 형광 분석 및 형태 학적 기준을 기반으로합니다.
이 논문에서 우리는 식별 하기 위해 블랙 레그와 송아지에서 샘플의 조리 된 고기 배지에서 사전 농축에서 회로 기판 기반 방법을 설명 합니다. 브라질 가을 동안 검은 다리 증상을 보인 송아지의 간,근육 및 중족 골수 샘플을 분석했습니다. 수집 된 샘플은 마투 그로 수 두 술 상태(표 1)에서 에스 파울로 상태에서 무리의 여섯 송아지와 한 종아리에서했다. 이 모든 소는 갑자기 죽었고 뒤쪽 사지에 근육 괴사를 나타 냈습니다.
자연의 간과 근육 샘플 및 골수봉했 접종으로 튜브와 고기 요리 중간(Difco®)는 바로 전에 실시하였 열충격(100ºC for10 분 즉시 냉각에 현재 물)을 배양되었에 37ºC48 시간입니다. 10 마이크로리터의 조리된 고기 배지를 5%양의 혈액 한천에서 배양하고 혐기성 조건 하에서 37 시간 동안 48 시간 동안 배양하였다. 특징적인 형태,측면,색상 및 용혈을 가진 콜로니는 형태 학적 및 세포 성 벽 결정을 위해 그람 염색을 받았다. 의심되는 분리 물은 박테리아 성별 및 종의 식별을 위해 카탈라아제,레시 티나 제,젤라틴 제,포도당,유당 및 떠들썩한 우유 응고 시험에 제출되었습니다.
구아니딘 티오시아네이트 기반 기술(2)은 조리된 고기 배지를 갖는 튜브의 상등액으로부터 추출하기 위해 달성되었다. 펠렛을 추출 프로토콜 전에 트리스-에타 완충액 200 개에 재수입하였다. 사사키 등에 의해 기술된 플래 겔린 유전자(플릭)를 위해 설계된 프라이머로 멀티플렉스 피시피실험기를 수행하였다. (10),클로 스트 리듐 차우 보에이 및 클로 스트 리듐 셉티 쿰에 대해 특이 적으로,각각 535 개의 염기쌍(혈압)및 294 개의 혈압을 증폭시킨다. 전방 프라이머 플라프는 종 모두에 공통적이며 플라크 및 플래저는 각각 씨.차우 보에이 및 씨.셉티쿰에 대한 역 프라이머입니다. 의 증폭 DNA 에서 수행하는 총량의 50µL,200μm 의 각 dNTP,5μl10X 반응 버퍼,2,5mM 는 mgcl2,30pmol 의 각 프라이머(FlaF-5’AGAATAAACAGAA GCTGGAGATG3′,FlachR-5’TACTAGCAGCATCAAAT GTACC3′,그리고 Flase R-5’TTTATTGAATTGTGTTTGTGAAG3′),1,25U Taq polymerase and10µL of DNA. 증폭을 위해,우리는 다음과 같이 3 단계로 나누어 진 30 개의 사이클을 사용했습니다:94 초 동안 변성 60 초 동안,56 초 동안 하이브리드 화 60 초 동안,72 초 동안 확장 70 초 동안. 10518(연구소 바이오올 지코 균주)는 양성 대조군으로 사용되었고,정상적인 젖소로부터의 근육 샘플은 음성 대조군으로 사용되었다. 또한,상기 인용된 것과 동일한 유전자 추출 및 증폭 프로토콜을 사용하여 임상 샘플(간,근육 및 골수)에서 직접 적용하였다. 증폭은 펠티에 열 사이클러-100(엠제이 연구)에서 수행되었고,증폭 된 생성물의 분석은 에티 디움 브로마이드로 염색 된 아가로 오스 겔 1.3%에서 전기 영동에 의해 수행되었다.
용의자 샘플을 접종 한 조리 된 고기 배지의 그람 염색은 대부분의 샘플(간 1,근육 1,2 및 7 및 뼈 골수 3,4 및 5)에서 영하 포자가있는 작은 그람 양성 막대를 보였다. 그러나,근육 7 샘플만 순수 문화에서 클로 스트 리 디움 퍼프링겐을 격리 하 고,무산 소 조건 하에서 배양 하는 다른 샘플 플레이트에서 성장 관찰 되었다. 임상 샘플에서 나온 멀티 플렉스 회로망은 씨.차우 보 에이 또는 씨.패혈증. 그러나,동일한 샘플을 접종 한 조리 된 고기 배지의 상등액으로부터의 반응에서,그 중 7 개는 표 1 에서 볼 수 있듯이 차우 보에이(간 1,근육 1,2 및 7,뼈 골수 3,4 및 5)에 양성이고,그 중 7 개는 차우 보에이(간 1,근육 1,2 및 7,뼈 골 3,4 및 5)에 음성이었다.
이 생물체의 표현형 유사성을 분자 적으로 반영한 것입니다. 다.차우보에이는 다.패혈증과 구별하기가 비교적 어렵고,게다가 다.패혈증은 검은 다리 증상과 매우 유사한 증상을 유발할 수 있습니다(6,9).
그레고리 외. (3)고용량의 페니실린을 가진 검은 다리를 가진 소의 발생 및 치료를보고했다. 진단은 근괴사 부위의 면봉으로부터 차우보에이를 분리하고,그 식별을 위한 기니피그 접종을 통해 이루어졌다.
쿠너트 외. (7)는 두 박테리아의 유전자 16 의 작은 차이 때문에 유기 체의 확실 한 식별에 대 한 효소 소화 제한 필요 합니다. 2013 년 12 월 1 일,2013 년 12 월 1 일,2013 년 12 월 1 일,2013 년 12 월 1 일,2013 년 12 월 1 일,2013 년 12 월 1 일,2013 년 12 월 1 일,2013 년 12 월 1 일,2013 년 12 월 1 일,2013 년 12 월 1 일,2013 년 12 월 1 일,2013 년 12 월 1 일,2013 년 12 월 1 일,2013 년 그러나,조직 샘플에서 직접 결과 부정적인,아마도 낮은 수의 클로 스트 리듐 마이크로 또는 비효율적인 유전자 추출 프로토콜 때문 이었다.
차우보에이의 분리는 매우 어려우며,이는 단단한 혐기성 조건이 필요하기 때문이며,임상 표본은 종종 토양의 클로스 트리 디아를 포함한 다른 혐기성 박테리아에 오염되어 배양 배지에서 차우보에이보다 빠르게 자랍니다(9). 근육 7 의 미생물 학적 배양은 혐기성 조건 하에서 순수한 배양에서 분리 된 클로스 트리 디움 퍼프링겐을 나타냈다. 이 종은 또한 블랙 레그 사례에 관여 할 수 있으며,현재 연구에서는 차우 보 에이와 관련 될 수 있습니다. 어쨌든,이 경우 미생물 학적 방법 만 적용 되었다면,블랙 레그 진단은 잘못되었거나 불완전 할 것입니다. 클로스 트리 디움 백신은 클로스 트리 디움 질환에 대한 높은 수준의 면역력을 제공하며 진단이 정확하면 질병을 쉽게 제어 할 수 있습니다. 이를 위해 임상 샘플을 적절하게 수집하고 실험실 검사를 받아야합니다. 클로스 트리 디아로 인한 모든 질병이 예방 접종으로 예방 될 수 있다면 예방 접종에도 불구하고 문제가 계속되면 진단이 잘못되어야합니다. 또한 사례 설명은 실험실 분석을 수행하는 데 근본적으로 중요합니다(1).
클로스 트리 디아 미세 유기체로 인한 감염은 일반적으로 치료가 불가능하면 생산에 상당한 손실을 초래합니다. 통제 및 예방은 동물이 질병을 풀 수있는 요인과 요인과 영구적으로 접촉하기 때문에 무리의 적절한 취급 및 체계적인 예방 접종을 구성해야합니다.
요리 고기 배지에서 자연스럽 게 감염 된 샘플의 사전 농축에서 차 우 보에이 핵 산의 검출이 두 브라질 블랙 레그의 발생에서 진단을 해명,그 일반적으로 미생물 문화 제한 때문에 결정적 남아 있다. 게다가,높은 특이성 때문에,에이전트 식별을위한 기니아 피그의 고용은 피했다.
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