tutkimus
arvioidaksemme ivermektiinin ja albendatsolin massahoidon vaikutusta lymfaattisen filariaasin esiintyvyyteen ja voimakkuuteen keräsimme ulostenäytteitä 3 vuoden aikana kahdella eri alueella Foyan piirikunnassa (Lofa County) Luoteis-Liberiassa ja Harperin piirikunnassa (Marylandin piirikunta) Kaakkois-Liberiassa (10. Tutkimme yhden ulostenäytteen tutkittavaa kohti mikroskopialla (suurennos ×100) kahdennetuilla Kato-Katz-smeaareilla (41 mg malli). Säilytimme satunnaisesti valittujen näytteiden aliquotit FTA-korteilla (GE Healthcare, Little Chalfont, UK) tai rnalaterissa (ThermoFisher, Waltham, MA, USA) ja lähetimme ne Washington University School of Medicinelle (St. Louis, MO, USA) qPCR: n analysoitavaksi. Kaksi kokenutta mikroskopistia (L. G., A. T. Momolu) tutki näytteet Kato-Katz smear-menetelmällä kummaltakin tutkimusalueelta. Osoittaaksemme STH: n qPCR: llä, otimme DNA: ta ≈100 mg ulosteesta ja testasimme sen Pilotten et al: n kuvaamalla tavalla. (5) quantstudio 6 Flex Thermocycler (Applied Biosystems, Carlsbad, CA, USA) ja TaqMan Fast Advanced Mastermix (Applied Biosystems). Schistosoma mansoni-DNA: n havaitsemiseen käytimme seuraavia alukkeita ja koettimia: forward primer 5′-TGTGGGAGTGGAACAGGA-3′, reverse primer 5′-CAACATGACTGGGAACAGGA-3′, probe 5′-AGGTTCAGGGG/ZEN/GTGTGTTACGAA-31abkfq-3′.
Kato-Katz smear testasi Foyan alueelta 353 ulostenäytettä; 31 (8,8%) oli positiivinen A: lle. lumbricoides-munia, 231 (65,4%) hakamatojen munia, 27 (7,6%) T. trichiuran kaltaisia munia ja 276 (78,2%) S. Mansonin munia. Kato-Katz smear testasi Harper districtistä 225 näytettä, joista 163 (72,4%) oli positiivisia A. lumbricoides-munille, 65 (28,9%) hakamatojen munille ja 51 (22,7%) T. trichiura-munille (Taulukko 1). Kato-Katz-ja qPCR-testien tulokset Harperin näytteille (80,5% -91,6%) olivat hyvin yksimielisiä, mutta yleensä qPCR: llä oli suurempi herkkyys. Tuloksemme olivat yhdenmukaiset aiemmin raportoitujen muiden alueiden näytteiden kanssa (3,11). Foyan näytteille tehtyjen kahden diagnostisen testin välinen sopu vaihteli 77, 3%: sta 92, 9%: iin, mutta qPCR: n herkkyys oli odottamattoman alhainen, mikä pätee erityisesti Ascaris-ja Trichuris-infektioihin (Taulukko 1). Siinä missä Kato-Katzin Ascaris-positiivisilla mutta qPCR: n negatiivisilla näytteillä oli alhaiset munasolumäärät, Kato-Katzin Trichuris-positiivisilla ja qPCR: n negatiivisilla näytteillä oli suuremmat määrät; 7 näytettä sisälsi >1000 tynnyrinmuotoista munaa/g ulostetta (Taulukko 2). Toistimme DNA-eristyksen ja qPCR: n ja käytimme myös vaihtoehtoista qPCR: ää T: lle. trichiura (3), mutta nämä testit eivät parantaneet mikroskopian ja qPCR-tulosten välistä yhteyttä.
Taulukko 1
| kasvupaikka ja laji | Ei. positiivinen * | Kato-Katz smear-herkkyys, % | qPCR-herkkyys, % | McNemar p-arvo |
| Foyan piiri, n = 353 | ||||
| Ascaris lumbricoides | 34 | 91.2 | 17.6 | <0.0001 |
| Hakamato† | 247 | 93.5 | 83.4 | <0.0001 |
| Trichuris trichiura | 27 | 100 | 7.4 | <0.0001 |
| Schistosoma mansoni | 307 | 89.9 | 84.0 | 0.0573 |
| Harperin piiri, n = 225 | ||||
| A. lumbricoides | 180 | 90.6 | 98.9 | 0.0013 |
| Hakamato† | 99 | 65.7 | 89.9 | 0.0005 |
| T. trichiura | 86 | 59.3 | 94.2 | 0.0001 |
*näytteet, jotka olivat positiivisia jommallakummalla menetelmällä.
†Koukkumato oli Necator americanus. Ancylostoma duodenalea ei havaittu.
Taulukko 2
| väestötiedot | mikroskopia, epg | qPCR, syklin kynnys | |||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| vuosi | potilas nro. | Ikä, y/sukupuoli | kylä | Tt | Al | HK | Sm | Al | Na 9879> | SM | |||
| 2014 | P320529 | 45 / F | Jallahun | 576 | 0 | 360 | 24 | 31.7 | 30.5 | ||||
| P320683 | 35 / F | Kpombu | 12 | 0 | 0 | 0 | Neg | Neg | Neg | 28.4 | |||
| P320695 | 16 / M | Kpombu | 24 | 0 | 0 | 72 | Neg | Neg | Neg | 23.8 | |||
| P320620 | 15 / M | Foya-Dundu | 12 | 120 | 0 | 288 | 32.2 | 23.5 | |||||
| P320746 | 9 / F | Bandenin | 24 | 0 | 0 | 0 | Neg | Neg | Neg | 26.51 | |||
| P320452 | 7 / F | Felaloe | 12 | 0 | 0 | 120 | Neg | Neg | Neg | 23.9 | |||
| P320596 | 6 / F | Foya-Dundu | 12 | 0 | 0 | 90 | Neg | Neg | Neg | 27.6 | |||
| P320656 | 6 / F | Kpombu | 120 | 0 | 0 | 504 | Neg | Neg | Neg | 21.3 | |||
| 2016 | P331772 | 36 / M | Kpormbu | 3,048 | 0 | 12 | 24 | Neg | Neg | Neg | Neg | ||
| P331921 | 35 / M | Felaloe | 60 | 0 | 0 | 12 | Neg | Neg | Neg | Neg | |||
| P331783 | 34 / F | Kpormbu | 420 | 0 | 0 | 0 | Neg | Neg | Neg | Neg | |||
| P330724 | 26 / M | Keyabendu | 4,224 | 0 | 0 | 456 | Neg | Neg | Neg | 30.4 | |||
| P331791 | 6 / F | Kpormbu | 12 | 0 | 156 | 12 | 33.1 | 33.4 | |||||
| P331962 | 6 / F | Bandenin | 12 | 0 | 0 | 168 | Neg | Neg | Neg | 29.6 | |||
| P331983 | 6 / F | Bandenin | 36 | 0 | 0 | 5,304 | Neg | Neg | Neg | 28.1 | |||
| 2017 | P341287 | 61 / M | Mendikorma | 1,464 | 0 | 0 | 0 | Neg | Neg | Neg | 33.1 | ||
| P341282 | 56 / M | Mendikorma | 540 | 0 | 216 | 0 | Neg | Neg | 28.3 | Ei | |||
| P341284 | 50 / M | Mendikorma | 60 | 0 | 0 | 132 | Neg | Neg | Neg | Neg | |||
| P342148 | 45 / M | Keyabendu | 1,368 | 0 | 0 | 192 | Neg | Neg | 34.5 | Ei | |||
| P340246 | 39 / M | Kamatahun | 120 | 0 | 0 | 216 | Neg | Neg | Neg | 30.0 | |||
| P340307 | 19 / F | Bambuloe | 2,028 | 0 | 0 | 1,188 | Neg | Neg | Neg | 24.1 | |||
| P340133 | 12 / M | Fokolahun | 1,020 | 16,392 | 0 | 0 | 25.3 | 16.7 | |||||
| P340183 | 9 / F | Kpelloe Ndama | 72 | 0 | 0 | 0 | Neg | Neg | Neg | 36.0 | |||
| P341308 | 9 / F | Mendikorma | 36 | 0 | 108 | 0 | Neg | Neg | Neg | 28.5 | |||
| P341326 | 9 / M | Mendikorma | 456 | 0 | 0 | 0 | 26.5 | 30.4 | |||||
| P341327 | 6 / M | Lie | 2,076 | 0 | 0 | 0 | Neg | Neg | Neg | Neg | |||
| P340147 | 5 / M | Fokolahun | 48 | 0 | 0 | 0 | 30.94 | 26.93 | |||||
* T. qPCR vahvisti trichiura-infektion vain kahdella potilaalla, mutta 25 potilaalla oli Capillaria-munia ulosteessaan. Al, Ascaris lumbricoides; epg, munia grammassa ulostetta; Hk, hakamato; Na, Necator americanus; Neg, negatiivinen; Sm, Schistosoma mansoni; Tt, T. trichiura.
tarkastaaksemme edelleen, sisältivätkö Kato–Katz-positiiviset, qPCR-negatiiviset ulostenäytteet T. trichiura-munia, tutkimme rnalateriin mikroskopian avulla säilötyt ulostenäytteet (suurennos ×100 ja ×400) (Kuva). QPCR: n positiiviset näytteet sisälsivät munia (6 mitattua), joilla on tyypillinen T. trichiuran morfologia; näiden munien keskimääräinen pituus (±SD) oli 52 µm (±2,4 µm) ja leveys 25,5 µm (±1,3 µm). Sen sijaan qPCR-negatiivisissa näytteissä oli munia (mitattu 31), joiden keskimääräinen pituus (±SD) oli 51,8 µm (±1,5 µm) ja leveys 32,7 µm (±2,1 µm). QPCR-negatiivisissa näytteissä oli myös heikompia tulppia ja paksu, juovikas kuori, joka muistuttaa Capillaria hepatican (Syn. Calodium hepaticum) ja joitakin muita Capillaria-lajeja (Trichuridae). Lajin C. philippinensis tai C. munat ihmisen ulostenäytteissä aiemmin havaitut aerophilat olivat joko pienempiä tai suurempia kuin Lofasta (12,13) löydetyt Capillaria-munat. Koska näiden munien napatulpat ovat vähemmän näkyviä kuin T. trichiuran munilla ja koska niiden muodot ovat joskus soikeampia tai pyöreämpiä, ne voidaan myös sekoittaa A. lumbricoidesin muniin pienitehoisella mikroskopialla, varsinkin jos munia havaittiin vain muutama (kuva).
Lofan piirikunnassa Liberiassa asuvien henkilöiden ulostenäytteistä löytyi Helmintimunia. A, B) Trichuris trichiuran munat Kato-Katz smear-ja qPCR-bakteerin T. trichiura-positiivisissa näytteissä. C-F) Capillaria spp.: n munat näytteissä, jotka ovat positiivisia Kato-Katz smear: n T. trichiuran osalta, mutta negatiivisia qPCR: n T. trichiuran osalta. G) Capillaria spp.: n muna Kato-Katz smear Ascari lumbricoides-näytteessä positiivinen mutta qPCR: N A. lumbricoides-näytteessä negatiivinen. H) A. lumbricoidesin muna Kato-Katz smear: n ja qPCR: N A. lumbricoides-bakteerin positiivisessa näytteessä. Mittakaavojen mukaan 20 µm. qPCR, kvantitatiivinen PCR.
Capillaridae-alaheimon jäsenet ovat eläinten loisia, joiden elinkaaret poikkeavat jonkin verran toisistaan, eivätkä useimmat tartuta ihmisiä. Pseudoinfektiot kanssa C. hepatica esiintyy; munat löytyy ulosteesta ovat läsnä, koska ne kulutettiin infektoituneen eläimen maksassa. Varsinaiset C. hepatica-infektiot eivät kuitenkaan johda munien kulkeutumiseen ulosteessa (9). Muut lajit, kuten C. philippinensis aiheuttavat todellisia infektioita (ja autoinfektion) ulosteesta löytyvillä munilla; tartunta liittyy raa ’ an kalan syömiseen. Ihmisen capillariaasia ei ole raportoitu Liberiasta, ja Saharan eteläpuolisesta Afrikasta on julkaistu vain yksittäisiä tapausraportteja (7-9). Teimme DNA-sekvensoinnin, jotta Foyasta löydetyt Capillaria-lajit olisivat paremmin tunnistettavissa. Käyttämällä alukkeita Kt875351.1 (5′-CCCTAGTTGCGACTTAACGA-3′) ja Capillaria 18s1r (5′- Tccacacctaagaacggcc-3’) pystyimme vahvistamaan ja sekvensoimaan 288 bp: n osuuden 18S rDNA: sta T. trichiura qPCR-negatiivisista näytteistä, jotka sisälsivät ainoastaan Capillaria spp: ksi morfologisesti tunnistettuja munia. (GenBank liittyminen nro. MG859285). DNA-fragmentti oli 100% identtinen C. hepatican ortologien kanssa(liittymisnumero. MF287972. 1), Aonchotheca putorii (C. putorii) (liittymisnumero LC052356.2) ja Pearsonema plica (C. plica) (liittymisnumero MF621034.1), Capillaria-matolajit, joiden elinkaaret ja isäntälajit vaihtelevat, mutta jotka ovat vain 95-prosenttisesti identtisiä T. trichiuran ortologien kanssa.
Luoteis-Liberiassa ihmisillä tavattavien Capillaria-lajien elinkaarta ja lääketieteellistä merkitystä ei ole vielä selvitetty. Tutkimuksessamme joillakin koehenkilöillä havaittiin suuria Capillaria-munakuormia, jotka voivat viitata todelliseen infektioon pseudoinfektion sijaan. Pseudoinfektion saaneilla henkilöillä on kuitenkin raportoitu ohimeneviä korkeita munasolumääriä (7). Siinä missä pensaslihan kulutus Foyassa on yleistä, C. philippineesin tarttumiseen tarvittavan raa ’ an tai alikypsennetyn kalan kulutus on harvinaista.