Keskustelu
aikuiset C. liemiväliaineessa haudotut sinensis-madot tuottivat alussa yli 4 000 munaa/mato/päivä. Sen jälkeen munasolujen määrä laski hieman yli tuhanteen 7.päivänä ja 300-400: aan 14. päivänä. Lukemat jäivät liemimediassa 28 päivän kohdalla alle satasen. Laskelmat olivat keskenään samanlaiset kolmen liemivälittäjän kesken. Tästä poiketen Locken soultion luvut olivat 220±44 ja 1023±64 päivänä 1 ja 3. Määrät olivat alussa alhaisempia kuin liemivälineissä, mutta madot tuottivat enemmän munia 21.päivänä ja myöhemmin. Liemivälineessä olevat madot tuottivat munansa voimakkaammin haudonnan varhaisessa vaiheessa, kun taas Locken liuoksessa olevat tuottivat vähemmän munia päivittäin, mutta pidemmän ajan. Yhden aikuisen madon päivittäinen 4000 munan määrä oli sopusoinnussa tartunnan saaneen ihmisen arviolta 3770 munan määrän kanssa .
munamäärien perusteella arvioitiin, että kaneista 8 viikon tartunnan jälkeen talteen otetun aikuisen madon tuottamien munien kokonaismäärä oli keskimäärin 37 274±2 988. Kokonaismunamäärä oli sama riippumatta viljelyliuoksesta tai-väliaineesta. Päivittäinen kananmunamäärä väheni nopeasti ja kohtu tyhjeni viljelyn aikana. Sen vuoksi nykyiset päivittäiset munasolumäärät merkitsivät sitä, että in vitro-viljellyt madot tuottivat vain kohdunsisäisiä munia, jotka muotoiltiin niiden kohtuun niiden eläessä kaneilla ennen viljelyä. Aineiston perusteella on arvioitu, että yksi gravid C. sinensis sisältää kohdussaan noin 37 000 munaa ja tuottaa noin 4 000 munaa joka päivä. Näin ollen munat voivat pysyä kohdussa noin 10 päivää kohdunsisäistä kypsymistä varten. Suurin osa kohdun munasoluista todettiin kypsiksi ja miracidium kehittyi jo, mutta osa niistä oli epäkypsiä lähinnä proksimaalisessa kohdussa. Nämä kypsymättömät munat eivät enää kehittyneet viljelyn aikana. Nämä havainnot viittaavat siihen, että viljellyt madot eivät kykene muodostamaan uusia elinkelpoisia munia ja esimuotoutuneiden keskenkasvuisten munien kypsyminen on myös mahdotonta in vitro-viljelyllä.
C. sinensiksen munat ovat kooltaan 28-31×13-16 µm, ja niiden kartiomainen pää on operculum ja nuppi on pieni . Tässä tutkimuksessa karkotetuissa munissa oli epänormaalia muotoa, kun mato selvisi pidempään. Munan keskipituus lyheni vähitellen ja merkittävästi Locken liuoksessa (27,49±0,48 µm) ja kaikissa liemiväliaineissa. Pituuden lyhentäminen johti FMI: n arvon pienenemiseen. FMI: tä ehdotettiin parametriksi biometriselle analyysille, jolla voitaisiin likimääritellä heterofyidi-ja opisthorchiidihiutaleiden munien määrää . Tässä tutkimuksessa FMI-arvot laskivat päivänä 60 Locken liuoksessa ja päivänä 90 liemimediassa. Pienentyneet FMI-arvot viittaavat siihen, että kananmunan tilavuus pienenee pituuden kutistumisen ja sisällön rappeutumisen myötä. Suurin osa 60 päivän in vitro-viljelyn jälkeen tuotetuista munista oli epämuodostuneita, ja niiden pituuden ja leveyden suhde oli alle 1,7 ja FMI-arvo alle 7 000. Suurin osa munista todettiin elinkelvottomiksi, kun ne värjättiin trypansinisellä. 60 päivän viljely voi olla munien elinkyvyn enimmäisaika.
Kevyt mikroskooppihavainto paljasti vakuolien ja tummien massojen kertyneen munankuoren sisälle, kun viljely kesti yli 60 päivää. Vakuolit ja tummat massat näyttivät epämuodostuneilta vitelliinisoluilta, kuten O. viverrini osoitti . Munien sisältämät aineet viittasivat siihen, että vitelliinisolut tai muut munanmuodostusaineet olivat rappeutuneet ja munat olivat abortoituneet. Kypsät munat, joista miracidium muodostuu, voivat säilyä hengissä pitkään, mutta abortoidut eivät. Sisäosien rappeutuminen on saattanut aiheuttaa epämuodostumia ja munan tilavuuden pienenemistä. Tutkimuksessa havaittiin epämuodostuneita munia, kun täysikasvuiset Echinostoma caproni gravid-aikuiset varastoitiin Locken liuokseen jopa 4 kuukautta 4°C: ssa . Yksi mahdollinen selitys edellä mainittuihin muutoksiin voi olla väärä kinonirusketus, joka liittyy munan kuoren muodostumiseen . Pitkäaikainen in vitro-viljely on saattanut vaikuttaa fenoli-oksidaasivälitteiseen entsymaattiseen prosessiin, joka on johtanut munan kuoren epämuodostumiseen . C. sinensis-bakteerin pitkäaikainen in vitro-viljely voi siten turmella munat ja niiden elinkelpoisuuden.
C. sinensis-lajin Täysikasvuisissa munissa on hyvin huomaamaton abopercular-nuppi. O. viverrini, läheistä sukua oleva maksapyrstö, osoittaa myös hyvin pientä tai hieman kehittynyttä munasolujen abopercular nuppia . Tässä tutkimuksessa munan kuoren abopercular nuppi tuli näkyvämmäksi useimmissa munissa 60 päivän haudonnan jälkeen. Tällaisen huomattavan abopercular nuppi ulkonäkö oli ilmeinen useimmissa rappeutunut munia. Krejci ja Fried osoittivat, että abopercular nuppi voi olla matala tai syvästi infolded munan kuori tapauksessa Echinostoma caproni ja E. trivolvis vastaavasti. Tässä tutkimuksessa ei havaittu abopercular nuppi ympärillä kuori. Näkyvä abopercular nuppi voi olla jatke olemassa normaali huomaamaton nuppi vastauksena muuttuvassa fysiologia kuolevia matoja. Yhdessä flukesien on vaikea tuottaa normaaleja elinkelpoisia munia in vitro-viljelyllä.
sem: n havaitsema munien pintarakenne näytti sopivan morfologiseksi piirteeksi munan kuoren tilan ymmärtämiseksi. Among opisthorchiids, C. sinensis muna pinta on erittäin veistetty tehdä lomitettu ryppyjä eri korkeus, joka auttaa kyky kerääntyä luonnon vedessä kuituja ja lisätä mahdollisuutta kosketuksiin nilviäisten isäntiä , . Tässä tutkimuksessa abortoiduista munasoluista sem havaitsi pienenevää pintarypistystä. Tämä vähentynyt rypistyminen näkyvän abopercular nuppi voi olla seurausta rappeutuminen prosessi munan kuori.
tässä tutkimuksessa oli muutamia rajoituksia. Munan elinkelpoisuudesta ei ollut suoria tietoja, joita voitaisiin verrata morfologisiin muutoksiin. Munien in vitro-hautominen voi antaa tarkkaa tietoa munan elinkelpoisuudesta, mutta C. sinensis-munien elinkelpoisuudesta ei ole vielä tietoa. Myös inkuboitujen matojen morfologiasta ja fysiologiasta oli niukasti tietoa.
lopuksi viljelty C. sinensis-madot lihaliemessä siirtävät elinkelpoisia munia 60 päivän ajan, jotka ovat esimuotoutuneet niiden kohtuun niiden selviytyessä kaneilla. Esimuotoillut keskenkasvuiset munat eivät kykene kehittämään miracidiumia in vitro-viljelyn avulla. Yksi täysikasvuinen C. sinensis-AIKUINEN sisältää noin 37 000 munasolua kohdussa ja tuottaa noin 4 000 munaa päivittäin. Epämuodostuneet munat, joiden FMI-arvo on alle 7 000 ja pituus / leveys-suhde alle 1,7, ovat elinkelvottomia.