Klazakitsumabi myöhäisessä vasta-ainevälitteisessä hylkimisessä: tutkimusprotokolla satunnaistetussa kontrolloidussa pilottitutkimuksessa

tutkimuksen suunnittelu ja tutkimusvirtaus

tämä prospektiivinen kaksikeskustutkimus (Medical University Vienna ja Charité University Medicine Berlin) on tutkijan aloittama vaiheen 2 pilottitutkimus, jonka tarkoituksena on arvioida humanisoitu Anti-IL-6 monoklonaalinen vasta-aine klatsakitsumabi myöhäisessä abmr-tutkimuksessa. Tämän ei-kaupallisen oikeudenkäynnin rahoittaja on Wienin lääketieteellinen yliopisto. Tutkimuksen suunnittelun lisäksi sponsori suorittaa tutkimuksen (yhteistyössä tutkimuskumppaneiden kanssa) ja on vastuussa kaikista sen tieteellisistä, eettisistä, sääntelyyn liittyvistä ja oikeudellisista näkökohdista. Rahoittaja (Vitaeris Inc., Vancouver, Kanada) on asettanut rahoitusehdot ja antaa ulkopuolista rahoitusta.

oletamme, että klatsakitsumabin antaminen munuaisensiirtopotilaille lähtötilanteen immunosuppression lisäksi on hyväksyttävä turvallisuusprofiili, kuten aiemmin on raportoitu autoimmuunisairauksia sairastavilla potilailla. Lisäksi oletamme, että klazakitsumabin toistuva anto ehkäisee kudostulehdusta ja-vammaa meneillään olevassa ABMR: ssä, erityisesti mikroverenkierron tulehdusta, ihmisen leukosyytti-antigeenin (HLA) spesifistä B-soluvastetta ja alloantibody-aktivoitunutta kroonista siirteen aiheuttamaa vammaa.

vuokaavio kokeilusta on esitetty kuvassa. 1. Aikataulu tapahtumista on esitetty Fig. 2, ja allekirjoitettu SPIRIT 2013 tarkistuslista liitetään täydentävänä tiedostona (Lisätiedosto 1). Tutkimus koostuu kahdesta seuraavasta osa-alueesta. Ensimmäisessä osassa (A osa) osallistujat satunnaistetaan saamaan joko klazakitsumabia (25 mg ihonalaista injektiota) tai lumelääkettä 12 viikon ajan (klazakitsumabia/lumelääkettä päivänä 0 sekä neljän ja kahdeksan viikon kuluttua). 11 viikon kuluttua potilaalle tehdään ensimmäinen jatkosiirtobiopsia. Viikolla 12 A-osa valmistuu ja satunnaistamisjärjestys avataan tietojen ensimmäistä analyysiä varten. Tutkimuksen tämän osan ensisijaisena tavoitteena on arvioida lyhyen hoitojakson turvallisuutta ja siedettävyyttä. Lisäksi A-osassa voidaan arvioida ensimmäistä kertaa klatsakitsumabin vaikutusta abmr: ään liittyvään tulehdukseen, joka on havaittu ääreisveressä ja hylkivässä elinsiirrännäisessä. Viikon 12 jälkeen kaikki tutkimuspotilaat siirtyvät tutkimuksen avoimeen osaan (B-osaan) ja saavat 25 mg klatsakitsumabia neljän viikon välein 52 viikon jälkeiseen tutkimuskäyntiin saakka. 51 viikon kuluttua potilaille tehdään toinen protokolla biopsia. B-osan päätavoitteita on arvioida pitkäaikaisen klazakitsumabihoidon turvallisuutta ja siedettävyyttä sekä tämän vasta-aineen pitkäaikaista vaikutusta ABMR: n kehittymiseen, hylkimiseen liittyviin biomarkkereihin ja munuaisen allograftin toimintaan sekä eloonjäämiseen 12 kuukauden ajalta.

vaikka tutkimuksen tarkoituksena ei ollut tutkia klatsakitsumabihoidon lopettamisen jälkeistä rebound-vaikutusta, viimeisen tutkimuskäynnin jälkeen kaikkia tutkimukseen osallistuneita seurataan munuaisensiirtotoiminnan heikkenemisen varalta säännöllisillä seurantakäynneillä neljän viikon välein viiden kuukauden ajan viimeisen annoksen jälkeen (5 × puoliintumisaika) poliklinikoilla.

odotamme potilasrekrytoinnin päättyvän 18 kuukauden kuluttua ja tutkimuksen päättyvän 30 kuukauden kuluttua.

osallistujat

otamme mukaan munuaisensiirtopotilaat, joilla on verenkierrossa oleva anti-HLA DSA ja abmr: n biopsiaominaisuudet, käyttöaiheiseen biopsiaan, joka tehdään positiivisen DSA-tuloksen ja/tai allograftin toiminnan hitaan heikkenemisen ja/tai proteinurian toteamiseksi. Muita keskeisiä liittymiskriteerejä ovat toimiva siirteen määrä ≥ 365 päivää elinsiirron jälkeen ja glomerulusten arvioitu suodatusnopeus (eGFR) > 30 mL/min/1.73 m2. EGFR-raja-arvo on valittu, jotta vältettäisiin sellaisten elinsiirtojen sisällyttäminen, joilla on suuri peruuttamaton krooninen vaurio (potilailla, joilla on hyvin pitkälle edennyt siirteen vaurio, ei voida enää odottaa kestävää hoidosta saatavaa hyötyä). Sisällyttämis-ja poissulkemisperusteet on lueteltu taulukossa 1.

Satunnaistamismenettely

A-osassa potilaat satunnaistetaan 1: 1 jompaankumpaan tutkimushaaraan (klazakitsumabi vs. lumelääke) käyttäen web-pohjaista satunnaistamisalustaa (https://www.meduniwien.ac.at/randomizer). Satunnaistaminen stratifioidaan tutkimuskohtaisesti ja ABMR-kategorioiden mukaan (aktiivinen ABMR vs. krooninen/aktiivinen ABMR), jotta varmistetaan näiden kahden tutkimushaaran välinen tasapaino potilailla, joilla on nämä kaksi histologista tyyppiä.

otoskoon laskeminen

tässä pilottitutkimuksessa ei ole tehty tarkkaa otoskoon estimointia, koska vaikutuksen kokoa ei tunneta (ei ole olemassa ennakkotietoja, joiden perusteella otoskoko voitaisiin määrittää). Ensisijainen päätetapahtuma on turvallisuus ja siedettävyys. Alustava arvio 20 munuaisensiirtopotilaan tehokkuustuloksista, joilla ABMR on myöhässä, antaa ensimmäiset tiedot klatsakitsumabin vaikutuksesta kliinisiin, morfologisiin, immunologisiin ja molekulaarisiin päätetapahtumiin. Vastaavien tulosten (esim.klatsakitsumabin ja lumelääkkeen vertailu mikroverenkiertotulehduksen ja molekulaaristen hylkimisreaktioiden suhteen), mukaan lukien vaihtelevuuden arviointi, voidaan odottaa antavan arvokkaan perustan tulevien tutkimusten suunnittelulle.

interventiot

Klazakitsumabi tai lumelääke annetaan kerta-annoksena ihon alle sokkoutuneen pätevän tutkimushenkilöstön toimesta. Klatsakitsumabi toimitetaan kerta-annosinjektiopulloissa (25 mg/mL), ja sen toimittaa Vitaeris Inc. Lumelääke annetaan normaalin suolaliuoksen kanssa injektiota varten, ja sen antaa tutkija. Tutkimuksen A osassa klatsakitsumabia tai lumelääkettä annetaan neljän viikon välein ihonalaisena kerta-annoksena päivänä 0 sekä viikoilla 4 ja 8. B-osan aikana kaikki potilaat saavat klazakitsumabia neljä kertaa viikossa alkaen viikolta 12 ja sen jälkeen viikoilla 16, 20, 24, 28, 32, 36, 40, 44, ja 48 (opintokäynti viikolla 52).

seuraavat lääkkeet ovat kiellettyjä tutkimuksen aikana: rituksimabi, ekulitsumabi, proteasomin estäjät, laskimoon annettava immunoglobuliini, plasmanvaihto tai immunoadsorptio ja muut tutkimuslääkkeet/-hoidot, mukaan lukien kaupallisesti saatavilla olevat anti-IL-6/IL-6R monoklonaaliset vasta-aineet, kuten tosilitsumabi. Seuraavat samanaikaiset lääkkeet ovat sallittuja tutkimuksen aikana: kalsineuriinin estäjät (takrolimuusi tai siklosporiini A); rapamysiinin (mTOR) estäjien nisäkäskohde (everolimuusi tai rapamysiini); mykofenolaattimofetiili (MMF)/mykofenolaattinatrium; ja pieniannoksiset kortikosteroidit (prednisoloni ≤ 5 mg/vrk).

lähtötason immunosuppressio

ABMR: n myöhäisen toteamisen jälkeen kaikki potilaat (molemmat a-haarat), jotka saavat kalsineuriinin estäjää tai mTOR-estäjää ilman atsatiopriinia tai MMF/mykofenolihappoa, saavat MMF: ää (aluksi 2 × 500 mg / vrk).; annosta suurennetaan asteittain 2 × 1000 mg: aan vuorokaudessa, jos potilas sietää sitä) immunosuppression alenemisen välttämiseksi. Protokollamme ei salli MMF-annoksia > 2000 mg vuorokaudessa. Varmaa tietoa MMF: n optimaalisesta annostuksesta ABMR: ssä ei ole; huolestuttavaa tässä suhteessa voi olla, että suuremmat MMF-annokset saattavat lisätä merkittävästi IL-6: n salpauksen hematologista toksisuutta (esim.leukopenia). Takrolimuusin minimipitoisuuksien tavoitetaso on 5-10 ng/mL, CyA 80-120 ng / mL. Vastaanottajat, jotka oli aiemmin vieroitettu steroideista, saavat pienen annoksen prednisolonia (5 mg / vrk). Jokaisen osallistujan osalta dokumentoidaan immunosuppression tyyppi ja sen muutokset tutkimusjakson aikana.

sokaiseva ja sokaiseva

Satunnaistaminen (osa A) tehdään näissä kahdessa tutkimuskohdassa sokkouttamattomilla farmaseuteilla, jotka vastaavat myös klatsakitsumabin ja lumelääkkeen (0, 9% keittosuolaliuosta) valmistamisesta. Jotta voidaan ylläpitää ja taata sokaisu ja välttää mahdollinen ryhmäjaon sokaiseminen, todellisen lääkkeen ja lumelääkkeen valmisteet ovat identtisiä väriltään, ulkonäöltään ja hajultaan. Tutkimukseen osallistuvat tutkijat, lääkintähenkilökunta ja tutkimukseen osallistuneet sokaistetaan ryhmäjaolta; kliininen tiimi ei pääse suojattuun kohdentamisluetteloon (rajoitettu salasanasuojattu pääsy) ennen kuin viimeinen potilas on suorittanut osan A. ennenaikainen sokaistuminen voi olla tarpeen hätätilanteissa, vakavissa sairauksissa, joissa osallistujia ei voida hoitaa asianmukaisesti, ellei hoitohenkilökunta tunne annettuja hoitotilanteita tai raportoi epäillyistä odottamattomista vakavista haittatapahtumista (Saes). Tietojen ja turvallisuuden valvontalautakunta (data and safety monitoring board, dsmb) voi tarvittaessa pyytää sokkoutuksen purkamista.

tulosparametrit

primaariset ja sekundaariset lopputuloksen mittarit on esitetty taulukossa 2. Aikataulu tapahtumista on esitetty Fig. 2. Ensisijaisia tuloksia mittaavat klatsakitsumabin turvallisuus ja siedettävyys, joita arvioitiin koko tutkimusjakson ajan (19 käyntiä EOS-käyntiä 52 viikon kohdalla, päivä 0, viikko 1, 2, 3, 4, 8, 11, 12, 16, 20, 24, 28, 32, 36, 40, 44, 48, 51, ja 52). Kansainvälisen Yhdenmukaistamiskonferenssin (ich) tilastollisten periaatteiden mukaan turvallisuus koskee osallistujille aiheutuvaa lääketieteellistä riskiä, jota arvioidaan laboratoriokokeilla, elintoiminnoilla ja haittavaikutuksilla, kun taas siedettävyys kuvaa sitä, missä määrin potilas voi sietää avoimia sairauksia (mikä näkyy siedettävyyden puutteesta johtuvien keskeyttämisten määrässä). Toissijaiset päätetapahtumat ovat klazakitsumabin farmakokinetiikka (PK; klazakitsumabipitoisuus) ja farmakodynamiikka (PD), jotka on arvioitu C-reaktiivisen proteiinin (CRP) sarjamittauksilla. Tämän maksasoluista johdetun akuutin vaiheen proteiinin suppressio osoitettiin aiemmin arvokkaaksi anti-IL-6-tehon korvikkeeksi . Alustavaa tehokkuuden arviointia varten abmr: n verestä johdetut biomarkkerit (DSA-ominaisuudet, sytokiinit ja endoteelin aktivaation/vamman merkkiaineet, perifeerisen veren leukosyyttien alapopulaatioiden mallit) arvioidaan päivänä 0 sekä 12 ja 52 viikon kuluttua. Lisäksi tutkimme IL-6 / IL-6R-transkriptejä (ennen tutkimuksen aloittamista ja viikoilla 12 ja 52) selvittääksemme, moduloiko IL-6: n neutralisaatio geeniekspressiota ja missä määrin. Klatsakitsumabin immunosuppressiivista kokonaisvaikutusta arvioidaan seuraamalla plasman TTV-kuormitusta.

tutkimukseen sisältyy kaksi tutkimussuunnitelman mukaista koepalaa, varhainen koepala 11 viikon kuluttua (ennen A-osan loppua) IL-6: n salpauksen mikroverenkiertotulehdukseen kohdistuvan vaikutuksen analysoimiseksi ensisijaisesti suoraan lumelääkkeeseen verrattuna ja myöhäinen koepala 51 viikon kuluttua (ennen B-osan loppua) klatsakitsumabin vaikutuksen arvioimiseksi kroonisen vamman etenemiseen (siirrännäisen glomerulopatian laajuus, interstitiaalinen fibroosi ja tubulaarinen atrofia). Molemmat koepalat otetaan vähän (viikkoa) ennen tutkimusosien päättymistä, jotta vältettäisiin sekaantuminen viikoille 12 ja 52 suunniteltuihin yksityiskohtaisiin farmakokineettisiin analyyseihin. Kaikki biopsiat arvioidaan abmr-tyypillisille geeniekspression kuvioille (Atagc, Alberta University, Edmonton; major read-out: molecular ABMR score). Lisäksi arvioidaan munuaisten toimintaa, proteiinin eritystä, siirteen vajaatoimintaa ja kuolemaa koko tutkimusjakson ajan. Lopuksi arvioimme IL-6-salpauksen vaikutusta (verrattuna lumelääkkeeseen) pantopratsolin PK-farmakokinetiikkaan sytokromi (CYP) – riippuvaisen maksan metabolian koelääkkeenä. Pantopratsoli valittiin, koska kerta-annokset ovat hyvin siedettyjä ja CYP2C19-aktiivisuus on herkkä fenokonversiolle tulehduksen aikana . Päivänä 0 sekä viikoilla 12 ja 52 pantopratsolia annetaan 20 mg laskimoon ja lääkepitoisuudet määritetään tunnin välein 6 tunnin ajan. Potilailla, jotka saavat jatkuvaa protonipumpun estäjähoitoa, suun kautta annettava hoito keskeytetään kolmeksi päiväksi ennen farmakokinetiikan testausta ja aloitetaan uudelleen yhtenä päivänä sen jälkeen.

turvallisuusarviointi ja haittatapahtumien raportointi

kaikissa kliinisissä tilanteissa, hätätilanteet mukaan lukien, annetaan asianmukaista lääketieteellistä hoitoa. Turvallisuuden arviointiin kuuluu kaikkien haittatapahtumien, myös haittatapahtumien, huolellinen seuranta. Klatsakitsumabin turvallisuudesta ja siedettävyydestä elinsiirtopopulaatioissa ei ole tietoa. Aiemmista tutkimuksista saadut tulokset > 1000 klazakitsumabihoitoa saaneesta potilaasta/osallistujasta ovat kuitenkin käytettävissä turvallisuuskaavojen arvioimiseksi. Taulukossa 3 on yhteenveto haittavaikutuksista, joita raportoitiin klatsakitsumabiannoksella 25 mg/kk kahdessa faasin 2 tutkimuksessa, jotka tehtiin niveltulehduspotilailla.

Välianalyysit

riippumaton DSMB seuraa tutkimusta turvallisuuden ja tietojen laadun arvioimiseksi. Jotta huomattavat turvallisuusnäkökohtien erot ryhmien välillä voidaan havaita ajoissa, hallituksen jäseniä ohjeistetaan tekemään välianalyysit, kun 10 ja 20 potilasta on saanut tutkimuksen A-osan valmiiksi. Dsmb analysoi tallennetut AEs-ja turvallisuuslaboratoriotulokset suhteessa satunnaistamisjärjestykseen.

DSMB voi harkita tutkimuksen lopettamista, jos siihen liittyvien SAE-arvojen yleinen rakenne tai turvallisuuslaboratorion tulosten muutokset tukevat voimakkaasti merkittävää turvallisuussignaalia. A Osa: jos kuudella osallistujalla esiintyy (varmasti ja mahdollisesti) haittavaikutuksia (common toxicity criteria > Grade 3 tai vaikea/lääketieteellisesti merkittävä ) ja/tai merkittävästi kohonneita maksaparametrien (alaniiniaminotransferaasi , aspartaattiaminotransferaasi ja/tai bilirubiini > 3× normaalin yläraja) tai neutropeniaa (< 0 , 5 G/L), DSMB poistaa turvallisuustulokset. Jos klazakitsumabiryhmässä on viisi tai kaikki osallistujat, tutkimus lopetetaan. Samoin, jos kuusi samankaltaista haittavaikutusta ja/tai merkittävää poikkeamaa maksaentsyymien tai neutrofiilien määrässä esiintyy samassa elinjärjestelmässä, DSMB poistaa nämä haittatapahtumat ja jos viisi tai kaikki haittatapahtumat kuuluvat klazakitsumabiryhmään, tutkimus lopetetaan. B-osa (kaikki klazakitsumabihoitoon osallistuneet): jos ≥ 10 potilaalla esiintyy lääkkeeseen liittyviä haittatapahtumia tai ≥ 10 haittavaikutusta samassa elinjärjestelmässä, tutkimus lopetetaan (näiden haittatapahtumien kokonaismäärään tulee sisällyttää myös klazakitsumabihoitoa saaneilla potilailla A-osan aikana esiintyneet haittatapahtumat).

tässä pilottitutkimuksessa ei ole määritelty tarkkoja tilastollisia määritelmiä tutkimuksen ennenaikaisen päättämisen kriteereille.

laadunvalvonta ja laadunvarmistus

Seurantamenettelyihin sisältyy ennalta määritettyjä säännöllisiä käyntejä molemmissa tutkimuspaikoissa. Tutkijat antavat pääsyn kaikkiin lähdeasiakirjoihin, mukaan lukien tapausraporttilomakkeet ja muut protokollaan liittyvät asiakirjat. Osallistujien luottamuksellisuus säilytetään paikallisten määräysten mukaisesti. Nimetty tarkkailija ottaa säännöllisesti yhteyttä tutkijaan ja vierailee hänen luonaan, ja hänellä on oikeus tutustua kaikkiin lähdeasiakirjoihin, joita tarvitaan tapauskertomuslomakkeiden ja muiden pöytäkirjaan liittyvien asiakirjojen merkintöjen tarkistamiseksi, edellyttäen, että osallistujien luottamuksellisuus säilytetään paikallisten määräysten mukaisesti. Tarkkailijan vastuulla on tarkastaa tapausraporttilomake säännöllisin väliajoin seurantasuunnitelman mukaisesti koko tutkimuksen ajan, varmistaa protokollan noudattaminen sekä syötettyjen tietojen täydellisyys, johdonmukaisuus ja tarkkuus. Seurantastandardit edellyttävät täydellistä varmennusta tietoon perustuvan suostumuksen olemassaolosta, sisällyttämis – /poissulkemisperusteiden noudattamisesta, AE: n dokumentoinnista sekä tehokkuuden, turvallisuuden ja siedettävyyden päätetapahtumien kirjaamisesta.

metodologia

munuaisten toiminta

eGFR arvioidaan käyttämällä Chronic Kidney Disease Epidemiology Collaboration (CKD-EPI) – yhtälöä (mL/min/1.73m2). Proteiinin erittyminen dokumentoidaan proteiini / kreatiniini-suhteena spottivirtsassa (mg / g).

Siirtobiopsiat

indeksi ja seurantabiopsiat tehdään ultraääniohjatulla perkutaanisella tekniikalla (1-2 ydintä koepalaa kohti, 16 gaugen neula). Jälkeen biopsia, potilaita seurataan tarkasti 5-8 h komplikaatioita (sarja verenpaineen mittaukset, seuranta hematuria, hemoglobiini tarkistaa 4 h jälkeen biopsia). Histomorfologiaa arvioidaan parafiiniin upotetuilla jaksoilla standardimenetelmää soveltaen. Immunohistokemialliseen C4d-värjäykseen käytämme polyklonaalista anti-c4d-vasta-ainetta (BI-RC4D, Biomedica, Wien, Itävalta) ja minimaalista immunohistokemiallista värjäystä (c4d Banff-pistemäärä ≥ 1) peritubulaarisia hiussuonia pitkin pidetään positiivisena. Koepaloja arvioidaan myös elektronimikroskopialla mikroverenkiertovaurion toteamiseksi. Morfologiset tulokset arvioidaan kokeneilla munuaisensiirtopatologeilla, jotka on sokkoutettu hoidon jakamista varten. Lisäksi biopsiat analysoidaan Banff-ohjelman mukaisesti perusteellisesti validoidulla molekyylimenetelmällä (MMDx™). Jokaista biopsiaa varten 3 mm: n osa yhdestä ytimestä sijoitetaan välittömästi Rnalateriin, varastoidaan – 20 °C: ssa ja toimitetaan ympäristön lämpötilassa tai kuivajäässä Albertan siirteen soveltamaan genomiikan keskukseen (Atagc, Albertan yliopisto, Edmonton, AB, Kanada) geenien ryhmäanalyysiä varten. Hyljintään liittyvien koneoppimiseen perustuvien leesiopohjaisten luokittelijoiden (ABMRpm, TCMRt, All Rejection) molekyylipisteet tuotetaan Edmontonin referenssikokoelmalla > 1200 koepalaa. Lisäksi geenien ilmentymismalleja arvioidaan puolueettoman arkkityyppianalyysin avulla . Abmr: n luokittelua varten kaikki biopsiatulokset analysoidaan molekyylitulosten yhteydessä. ABMR-luokat ja morfologiset yksittäiset vauriot määritellään ja pisteytetään Banff-luokituksen viimeaikaisten päivitysten perusteella .

HLA-vasta-aineiden osoittaminen

Seerumit inaktivoidaan, jotta komplementista riippuvaiset in vitro-artefaktit (prozone-ilmiö) voidaan sulkea pois, ja seerumeille tehdään yhden antigeenin virtaushelmitestaus (LABscreen Single Antigen assays; One Lambda, Canoga Park, CA, USA). Testitulokset dokumentoidaan keskimääräisinä fluoresenssin intensiteetteinä; positiivisena pidetään keskimääräistä fluoresenssin intensiteettiä (MFI) > 1000. Luovuttajien spesifisyys määritellään luovuttajan ja vastaanottajan HLA – määritystulosten perusteella, jotka ovat matalaresoluutioisia tai korkearesoluutioisia. Virtuaalipaneelin reaktiiviset vasta-ainetasot lasketaan erityisten ohjelmistotyökalujen avulla (http://www.eurotransplant.org/cms/).

sytokiinit ja endoteeliaktivaation/vamman merkkiaineet

seerumit, jotka on kerätty viikoilla 0, 12 ja 52, analysoidaan IL-6: n, liukoisen IL-6R: n ja tulehdusta tai endoteeliaktivaatiota ja vammaa ilmentävien merkkiaineiden varalta luminex-alustalla tai entsyymi-immunosorbenttimääritystekniikalla. Samalla testataan virtsanäytteitä samalla menetelmällä. Seerumin ja virtsan biomarkkereiden Luminex – pohjaiseen analyysiin käytämme ihmisen ProcartaPlex Simplex-immunomäärityksiä valmistajan protokollan mukaisesti (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA). Testit tehdään Luminex 200-laitteella. Helmipaneelit sisältävät eri merkkiaineiden yhdistelmiä, jotka mahdollisesti heijastavat tulehduksen ja vamman laajuutta, mukaan lukien kemokiinit (esim.CXCL9 ja CXCL10) ja endoteeliset markkerit (esim. VCAM-1 ja E-selektiini). Virtsatietulokset normalisoidaan virtsan kreatiniinipitoisuuksiksi.

leukosyyttien alapopulaatiot

ABMR: n taustalla olevat mekanismit, erityisesti perifeeristen T – ja B-solujen alaryhmien rooli, eivät ole täysin selvillä. Siten prospektiivinen immuunifenotyypin määritys on lupaava lähestymistapa IL-6-salpauksen vaikutusten selvittämiseen immuunisäätelyreitteihin. Valkosolujen (sub-)populaatioiden seurantaan käytämme lisääntymiskykyisiä immuuniseurantapaneeleita fenotyypitykseen. Kansainvälinen ”the ONE study” -konsortio on äskettäin suunnitellut standardoidun paneelin (DuraClone®, Beckman Coulter, Marseille, Ranska) virtaussytometriaan perustuvaan immuunifenotyypitykseen, joka osoitti vankkoja tuloksia . DuraClone-immuuniseurantapakkauksissa ennalta määritetyissä määritysputkissa on kerros, jossa on kuivattu vasta-ainepaneeli käyttövalmiina. Jopa 10 erilaista monoklonaalista vasta-ainetta putkea kohti mahdollistaa leukosyyttien (esim.T-solu, B-solu, luonnolliset tappajasolut) alapopulaatioiden tunnistamisen kokoverinäytteissä.

geenin ekspressioanalyysi

geenin ekspressioanalyysiä varten kerätään 5 mL verta Paxgeenin veri – RNA-putkiin ja säilytetään-80 °C: ssa analyysiin asti. Sulamisen jälkeen RNA eristetään ja transkriboidaan komplementaariseksi DNA: ksi (cDNA). IL-6: n tai IL-6R: n RNA/cDNA: n määrä määritetään kvantitatiivisella reaaliaikaisella polymeraasiketjureaktiolla (PCR) käyttäen TaqMan-määritystä.

Moment Teno-viruksen (TTV) kvantifiointi

TTV-DNA kvantifioidaan varastoiduissa plasmanäytteissä reaaliaikaisen PCR: n avulla, kuten aiemmin on kuvattu .

pantopratsolin PK

Nestekromatografian tandem-massaspektrometriaa käytetään pantopratsolin pitoisuuksien ja kinetiikan arvioinnissa .

tilastolliset menetelmät

analyysit tehdään intention-to-treat-periaatteen mukaisesti. Jatkuvat tiedot esitetään tapauksen mukaan keskiarvona ja keskihajontana (SD) tai mediaanina ja neljännespisteiden välisenä vaihteluvälinä (IQR) ja kategoriset muuttujat absoluuttisina ja suhteellisina frekvensseinä. Ryhmävertailut (lähtötilanteessa ja kolmen kuukauden kuluttua) jatkuvien tietojen osalta (CRP-tasot, eGFR, proteiini/kreatiniini-suhde, hylkimisreaktion biomarkkerien tasot seerumissa ja virtsassa, IL-6/IL–6R-ekspressiotasot, HLA-vasta-aineiden ominaisuudet , morfologiset tai molekulaariset (esim.ABMR-pisteet) biopsiapisteet) analysoidaan parametrisin (t-testi) tai ei-parametrisin (Mann-Whitney U-testi) testein. Fisherin tarkkaa testiä käytetään ryhmien välisten kategoristen tietojen vertailuun (AEs: n esiintyminen, morfologiset/molekulaariset ABMR-Kategoriat ja biopsialla todetut akuutit hylkimisreaktiot lähtötilanteessa ja kolmen kuukauden kuluttua). Elinsiirron ja potilaan eloonjäämisen tai AE-vapaan eloonjäämisen arvioinnissa käytetään Kaplan-Meier-analyysia ja Mantel Cox Log-rank-testiä käytetään ryhmävertailuissa. Paritiedoissa (esim.morfologiset ja molekyylibiopsiatulokset 3 vs. 12 kuukauden jälkeen koko kohortissa) käytetään paritestiä t tai Wilcoxon-testiä. Kaksipuolinen P-arvo < 0.05 katsotaan tilastollisesti merkitseväksi. KLATSAKITSUMABIN ja pantopratsolin farmakokinetiikan analyysi sisältää kuvauksen vasta-ainepitoisuuden/lääkeainepitoisuuden aikakehityksestä. Eliminaation puoliintumisaika, Tmax, Cmax, puhdistuma ja jakautumistilavuus lasketaan standardiohjelmistolla. Tilastoanalyysiä varten IBM SPSS Statistics 24 (IBM Corporation, Armonk, NY, USA)ja SAS for Windows (SAS Institute Inc., Cary, NC, USA) käytetään.

tutkimuksen rekisteröinti

tutkimuksen hyväksyivät Itävallan (Federal Office for Safety in Health Care, Austrian Agency for Health and Food Safety) ja Saksan sääntelyviranomaiset (Federal Institute for Vaccines and Biolääketieteet, Paul-Ehrlich Institute). Tutkimus rekisteröitiin eurooppalaiseen kliinisten tutkimusten tietokantaan (EudraCT number: 2017-001604-30; prospektiivinen rekisteröinti) ja julkiseen kliinisten tutkimusten tietokantaan (ClinicalTrials.gov nct03444103; takautuva rekisteröinti).