kun mietit proteiinien erottamista, Ajatteletko niiden erottamista geelillä? Erityisesti käyttämällä SDS-PAGE? Jos vastasit ”kyllä”, siihen oli hyvä syy. SDS-PAGE on kaikkialla molekyylibiologian laboratorioissa, koska se on hyvä erottamaan proteiineja. SDS-PAGE vie kuitenkin paljon aikaa ja on työvoimavaltainen. Joten laajennetaan työkalupakkiasi ja tarkastellaan toista tapaa erottaa proteiinit: Kapillaarigeelielektroforeesi.
Hiussuonielektroforeesi (CGE) alias hiussuonielektroforeesi alias hiussuonielektroforeesi aliasa.SDS-kapillaarigeelielektroforeesi erottaa proteiinit geelissä erottavalla väliaineella täytettyjen kolonnien kautta.
laitevaatimukset
kapillaarigeelielektroforeesissa analyyttisi (tutkittavat proteiinit) kulkeutuvat elektrolyyttiliuoksen läpi kapillaarien läpi Sähkökentän vetävällä voimalla – toisin kuin tutummalla SDS-sivulla. CGE: n suorittamiseen tarvitaan: näytepullo, lähde-ja kohdepullot, seulomatriisi, kapillaarikolonni, kolonnin ilmaisin, tietojen lähtö-ja käsittelylaite sekä suurjännitevirtalähde.
protokolla lyhyesti
CGE-kokeessa näyte alkaa lähdepullosta ja suuntaa kohti määräpulloa. Tässä on protokolla lyhyesti:
Vaihe 1: lähde-ja kohdepullot sekä niitä yhdistävä kapillaari täytetään elektrolyyttiliuoksella ja näyte johdetaan kapillaariin.
Vaihe 2: kun sähkökenttä on käytössä, analyytit siirtyvät lähdepullon puolelta määräpullon puolelle.
Vaihe 3: on-column detector (ei yllättävää) mahdollistaa on-column detection. Ilmaisin lähettää dataa lähtö-ja käsittelylaitteelle, kuten tietokoneelle.
Vaihe 4: nämä tiedot esitetään elektroferogrammina. Analyyttisi luetaan erilaisten retentioaikojen huipuiksi.
Lisätietoja Tämän toiminnasta löytyy UC Davisin avuliaasta aineistosta.
lisää matriisista
seulomatriisi voi koostua useista polymeroiduista materiaaleista, mukaan lukien ristisidottu polyakryyliamidi, dekstraani ja poly(etyleeniglykoli tai etyleenioksidi). Pylväät on yleensä valmistettu vaihdettavista seulontapolymeereistä. Se on sitten sinusta kiinni, jos teet omia sarakkeita tai ostaa niitä. Beckman Coulter, Agilent Tech ja Bio-Rad Laboratories myyvät seulontasarjoja, mutta tietävät, että nämä vaativat myös CGE-instrumenttien käyttöä.
miksi sinun pitäisi käyttää CGE: tä
nyt olet kuullut mitä CGE on, miksi sinun pitäisi käyttää sitä?
- sen toiminta-ajat ovat lyhyemmät. CGE: n suorittaminen vie 10-100 kertaa vähemmän aikaa kuin laatageelielektroforeesi.
- CGE-kokeessa on vähemmän vaiheita kuin SDS-PAGE-kokeessa. Tämä johtuu siitä, että CGE-kokeen lopputuloksen antaa laitteeseen kytketty tietokone.
- CGE soveltuu myös paremmin pienille proteiineille kuin perinteinen SDS-sivu.
- voit analysoida proteiinejasi reaaliaikaisesti CGE: llä.
- CGE-laitteita voidaan käyttää toistuvasti, ei tarvitse tehdä loputtomasti geelejä.
- lopuksi suuri osa prosessista on automaattista. Kun olet lisännyt näytteen, olet valmis! Tämä tarkoittaa, että sinun ei tarvitse valvoa prosessia, kuten teet geelin tai tuoda se erikoismittauslaitteisiin heti, kun geeli on käynnissä.
miksi sinun ei pitäisi käyttää CGE
no, totta puhuen, vaikka CGE on ollut olemassa nykyisessä muodossaan yli kymmenen vuotta ja monia teknisiä edistysaskeleita on saavutettu, CGE kärsii edelleen uusittavuusongelmista. Toinen ongelma on se, että CGE-erotukset suoritetaan sarjoina. Tämä tarkoittaa, että CGE: llä ei voi kätevästi vertailla kaistoja. Lopuksi, kun se tulee 2D geelit, CGE vain voi kilpailla perinteisen 2D erottaminen.
yhteenvetona voidaan todeta, että vaikka jotkut tutkijat ylistävät ylpeinä CGE-teknologian käyttöä, siihen liittyy vielä useita ongelmia. Mutta älä hylkää CGE: tä vielä! Uusin sysäys tällä alalla on mikrosiru CGE, joka näyttää paljon lupauksia nopea proteiinianalyysi. Joten ensi kerralla, kun mietit proteiinin erottelua, älä unohda CGE: tä.
Oletko kokeillut CGE: tä? Mitä pidät siitä verrattuna SDS-Pageen?