Cobas 4800-järjestelmän soveltaminen Korkean riskin ihmisen papilloomaviruksen toteamiseen 5650 oireettomalla naisella

Abstrakti

korkean riskin papilloomaviruksen (HR-HPV) testaus yhdistettynä sytologiaan parantaa kohdunkaulan leesioiden toteamista ja pidentää seulontavälien pituutta. Väestöpohjaisessa HR-HPV-tutkimuksessa testausautomaatiolle on suuri tarve. Cobas 4800 HPV-testijärjestelmä on täysin automatisoitu määritysjärjestelmä, jolla voidaan samanaikaisesti havaita HPV16, HPV18 ja muut 12 yhdistettyä HR-HPV-genotyyppiä. Tätä järjestelmää on käytetty HR-HPV-seulontaan useissa maissa, mutta tällaista soveltamista suuressa väestössä Kiinassa ei ole dokumentoitu. Tässä tutkimuksessa käytimme Cobas 4800 HPV – testijärjestelmää HR-HPV: n toteamiseen kohdunkaulan sytologian näytteissä, jotka on kerätty yhteensä 5650 oireettomalta naiselta eräältä Etelä-Kiinan alueelta. Raportoimme seuraavaa: (1) HR-HPV: n 14 genotyypin esiintyvyys oli 12, 96%; (2) HR-HPV-infektiota sairastavilla 2, 25% oli HPV16-positiivisia, 0, 50% HPV18-potilailla, 9, 15% yhdistetyissä 12 HPV-tyypeissä ja 1, 06% multiple HPV-infektiossa; ja (3) HR-HPV: n esiintyvyydessä ei ollut merkittävää eroa eri ikäryhmien välillä. HPV16: n ja HPV18: n on osoitettu olevan vallitsevia HPV-tyyppejä kohdunkaulan syöpää sairastavilla potilailla joillakin Kiinan alueilla, mikä osoittaa, että täysin automatisoitu määritys, kuten Cobas 4800 HPV-testausjärjestelmä, on erityisen arvokas väestöpohjaisessa HR-HPV-seulonnassa näillä alueilla, koska tällä määrityksellä voidaan samanaikaisesti havaita HPV16 ja HPV18.

1. Johdanto

ihmisen papilloomavirus (HPV) on Papilloomaviridae-heimoon kuuluva kaksijuosteinen DNA-virus . On todettu yli 200 HPV: n genotyyppiä, joista 15 (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68, 73, ja 82) ovat vahvasti yhteydessä kohdunkaulan syöpään . Kohdunkaulan syöpä on naisten neljänneksi yleisin syöpä maailmanlaajuisesti ja naisten kuudenneksi yleisin syöpä Kiinassa . Kohdunkaulan syövän taakan vähentämiseksi on ensiarvoisen tärkeää tunnistaa varhaisessa vaiheessa kohdunkaulan leesiot, jotka todennäköisesti etenevät invasiiviseksi syöväksi. Kohdunkaulan sytologialla on tärkeä rooli kohdunkaulan syövän ehkäisyssä . HPV-testauksen lisääminen sytologiaan lisää vaikeiden kohdunkaulan leesioiden havaitsemista, ja siksi on suositeltavaa, että korkean riskin HPV (HR-HPV) seulonta sisällytetään sytologiaan taudin toteamisen parantamiseksi ja seulontavälien pidentämiseksi .

tähän mennessä on raportoitu erilaisia menetelmiä HPV: n genotyypin määrittämiseen ja osoittamiseen . Väestöpohjaisessa seulonnassa testausautomaatio on erityisen hyödyllinen, sillä automaatiolla on kyky käsitellä suuri määrä näytteitä lyhyessä ajassa ja vähentää manuaalisessa toiminnassa mahdollisesti esiintyviä inhimillisiä virheitä. Cobas 4800 HPV – testijärjestelmä (Roche Molecular Systems Inc., Rotkreuz, Sveitsi), täysin automatisoitu, on suunniteltu havaitsemaan samanaikaisesti yhteensä 14 HR-HPV-tyyppiä: HPV16 yksittäin, HPV18 yksittäin ja 12 yhdistettyä HR-HPV-genotyyppiä (31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, ja 68). Yhdysvaltain elintarvike-ja lääkevirasto on hyväksynyt tämän järjestelmän HR-HPV-seulontaan. Cobas 4800 HPV – testijärjestelmä koostuu 2 osasta, ts., Cobas x 480-instrumentti, jota käytetään nukleiinihappopuhdistuksen ja PCR-näytepipetoinnin automatisointiin ja Cobas z 480-analysaattori, joka on automaattinen reaaliaikainen PCR-vahvistus ja myöhempi tyyppikohtainen hybridisaatio. Vaikka Cobas 4800-järjestelmän käytöstä HR-HPV-testauksessa on raportoitu useissa maissa , tällaista käyttöä suuressa väestössä Kiinassa ei ole dokumentoitu. Tässä tutkimuksessa käytimme Cobas 4800 HPV – testijärjestelmää HR-HPV: n toteamiseen kohdunkaulan sytologian näytteissä, jotka kerättiin yhteensä 5650 oireettomalta naiselta.

2. Menetelmät

tämän tutkimuksen hyväksyi Zhongshan Hospital of Traditional Chinese Medicinen lääketieteellinen tutkimuskomitea. Tietoon perustuva suostumus saatiin kaikilta osallistujilta.

2.1. Kohdunkaulan näytteenotto

oireettomat 20-65-vuotiaat naiset otettiin tähän tutkimukseen tammikuusta 2018 joulukuuhun 2018 tutkittavien tai heidän työnantajiensa kattamilla testauskustannuksilla tai yhdistelmällä. Mukaan ottamisen kriteerejä ovat 20-vuotias tai vanhempi, ei raskaana, on ehjä kohtu, on seksuaalisesti aktiivinen, tai joilla on ollut seksuaalista toimintaa. Kaikille tutkittaville ilmoitettiin, etteivät he käyttäneet emätinlääkkeitä, ehkäisyvalmisteita tai voiteluaineita 48 tuntiin ennen kohdunkaulan näytteenottoa. Kohdunkaulan solunäytteet kerättiin Cervex-Brush Combi-laitteella (Rovers Medical Devices) seuraavasti: laitteen endokervainen näytteenottoosa työnnettiin endokervix-kanavaan, jotta sivuharjakset pääsivät täysin kosketuksiin ectocervixin kanssa, ja laitetta käännettiin kaksi täyttä kierrosta myötäpäivään. Vetämisen jälkeen laite, jossa on kerätyt solut, työnnettiin välittömästi Säilöntäliuosta sisältävään injektiopulloon (Hologic Inc., Bedford, MA, Yhdysvallat) ja voimakkaasti pyöriteltynä. HPV-DNA: n toteamiseen käytettiin näytteitä alla kuvatulla tavalla.

2.2. HR-HPV-detektio käyttäen Cobas 4800 HPV-testijärjestelmää

Lysis-Puskuri, Pesupuskuri, ELUUTIOPUSKURI, HPV-positiiviset ja negatiiviset Kontrollisarjat ja kaikki muut reagenssit ostettiin Roche Molecular Systems Inc: ltä. Jokaisessa näytteessä oli sisäinen kontrolli, β-globiini, solujen riittävyyden seuraamiseksi, ja jokainen näyte sisälsi joukon HPV-positiivisia ja negatiivisia kontrolleja. DNA: n poisto ja puhdistus tehtiin Cobas x 480-laitteella valmistajan ohjeiden mukaan. Säilöntäliuosnäytteet pyörrettiin ja laitettiin näytekantoalustalle, ja reagenssit, esim.Lysis -, pesu-ja Eluutiopuskuri, lastattiin vastaaviin reagenssisäiliönäytteisiin. Näytteen ja reagenssin lastauksen jälkeen DNA: n valmistus valmistui automaattisesti ja lopulliset DNA-tuotteet kerättiin mikroputkilevylle. Tämän jälkeen DNA: ta sisältävä mikrowellilevy sinetöitiin käsin ja ladattiin Cobas z 480-analysaattoriin, ja vahvistus ja hybridisaatio suoritettiin automaattisesti.

2.3. Tilastoanalyysi

tilastoanalyysi tehtiin käyttäen SPSS 13.0: aa (IBM Corp., Armonk, NY, USA). Χ2-testiä käytettiin kategoristen muuttujien arviointiin. Kaikki tilastolliset testit olivat 2-puolisia, ja alle 0,05: n arvoja pidettiin tilastollisesti merkitsevinä.

3. Tulokset

yhteensä 5650 oireetonta 20-65-vuotiasta naista, joiden keski-ikä täytti tutkimusvaatimuksen ja jotka otettiin mukaan tähän tutkimukseen. Näistä osallistujista 732: lla (12, 96%) todettiin HR-HPV-positiivinen, joista 127: llä (2, 25%) oli HPV16-infektio, 28: lla (0, 50%) HPV18-infektio, 517: llä (9, 15%) yhdistetyt 12 HPV-tyyppiä ja 60: llä (1, 06%) useita HPV-infektioita (HPV16 yhdistettynä HPV18: aan, HPV16 sekoitettuna 12: een yhdistettyyn tyyppiin, HPV18 sekoitettuna 12: een yhdistettyyn tyyppiin, tai HPV16 sekoitettuna hpv18: n ja 12 yhdistetyn tyypin kanssa) (taulukko 1).

osallistujat jaettiin iän mukaan 4 ryhmään: 20-30, 31-40, 41-50 ja >51-vuotiaat. Kuten taulukosta 2 ilmenee, HR-HPV-tartuntojen esiintyvyys oli 31-40-vuotiaiden ryhmässä korkein (15, 32%), jota seurasivat >50-vuotiaat, 41-50-vuotiaat ja 20-30-vuotiaat, joskaan näiden ryhmien infektioluvuilla ei havaittu tilastollista merkitsevyyttä.

4. Keskustelu

tässä tutkimuksessa käytimme Cobas 4800-järjestelmää HR-HPV: n havaitsemiseen 5650 oireettomalla naisella ja havaitsimme seuraavaa: (1) HR-HPV: n 14 genotyypin esiintyvyys oli 12, 96%; (2) 732 HR-HPV-positiivisesta naisesta 2, 25% oli HPV16-positiivisia, 0, 50% HPV18-positiivisia, 9, 15% yhdistettyjen 12 HPV-tyyppien osalta ja 1, 06% useiden HPV-infektio; ja (3) HR-HPV: n esiintyvyydessä ei ollut merkittävää eroa eri ikäryhmien välillä.

sekä reaaliaikainen Korkean riskin HPV-testi Abbott Molecular Inc. (Des Plaines, IL, USA) ja Cobas 4800 HPV-testausjärjestelmä ovat kliinisesti validoituja, täysin automatisoituja PCR-pohjaisia määrityksiä HR-HPV: n toteamiseksi . Yksi näiden 2 määrityksen eduista on se, että ne voivat samanaikaisesti havaita ja erottaa HPV16: n ja HPV18: n, mikä on tärkeää kohdunkaulan syövän seulonnassa, sillä HPV16 ja HPV18 aiheuttavat noin 70 prosenttia kohdunkaulan syövistä maailmanlaajuisesti . Harvoissa tutkimuksissa on verrattu näitä kahta määritystä HR-HPV: n havaitsemiseksi kliinisissä näytteissä. Park ym. testattiin 365 kohdunkaulanäyttettä ja raportoitiin, että reaaliaikaisen Korkean riskin HPV-testin herkkyys oli 78, 3% ja spesifisyys 99, 2%, Kun taas Cobas 4800-järjestelmän herkkyys oli 91, 7% ja spesifisyys 97, 0%. Cuzick ym. seuloi 6000 naista ja paljasti, että 16,0%: lla havaittiin HR-HPV-positiivinen Cobas 4800-järjestelmä ja 13,4%: lla todettiin HR-HPV-positiivinen reaaliaikainen Korkean riskin HPV-testi . Nämä tiedot osoittavat, että Cobas 4800-järjestelmän tunnistusherkkyys on suurempi.

Maailman terveysjärjestö on sisällyttänyt useita kliinisesti validoituja molekyylijärjestelmiä HR-HPV DNA: n havaitsemiseksi vuonna 2016 käsikirjaan Integrating HPV Testing in Cervical Cancer Screening Programs-a Manual for Program Managers (https://www.paho.org/hq/dmdocuments/2016/manual-VPH-English—FINAL-version.pdf). Nämä testit koostuvat hybridisaatioon perustuvista määrityksistä eli Hybrid Capture 2-tekniikasta ja CareHPV-testistä sekä PCR-pohjaisista määrityksistä, esim., Cobasin HPV-testi, Abbottin RealTime High Risk HPV-testi, Cervistan HPV HR-testi ja BD HPV-testi. Kaikki PCR-pohjaiset määritykset edellyttävät DNA: n eristämistä, kun taas hybridisaatioon perustuvat määritykset eivät. Kaikista menetelmistä Cervistan HPV HR-testi kestää 6-7 tuntia ja Abbottin reaaliaikainen Korkean riskin HPV-määritys 6-8 tuntia, mikä ei välttämättä täytä tavoitetta ”nähdä ja hoitaa” samana päivänä. Sen sijaan kaikki muut menetelmät, mukaan lukien Cobas 4800-järjestelmä, vaativat kuitenkin noin 5 tunnin maksimikäyttöajan, joka sopii potilaille ”nähdä ja hoitaa” yhdellä käynnillä.

maailmanlaajuisesti HR-HPV: n esiintyvyys vaihtelee maanosittain . Kiinassa HR-HPV: n esiintyvyyden selvittämisessä on käytetty erilaisia menetelmiä . Wu ym. käytettiin Hybrid Capture 2-määritystä (Qiagen, Hilden, Saksa) 13 yhdistetyn HR-HPV-tyypin (HPV16) toteamiseen, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, ja 68) yhteensä 4215 iältään 17-54-vuotiasta naista 5 eri maantieteellisellä alueella Kiinassa ja havaitsi, että HR-HPV esiintyvyys oli 12,4% . Käyttäen samaa menetelmää kuin Wu et al. , Zhao et al. löytyi 15.2%: lla 1274 naisesta Pohjois-Kiinan alueelta oli HR-HPV-positiivinen . Chen ym. työllisti HPV genotyypin Kit (Yaneng Biotechnology Limited Corp., Shenzhen, Kiina) yhteensä 961,029 HPV-testit vuotiaiden naisten 16-83 vuotta Kaakkois-Kiinassa ja paljasti HR-HPV-tartunnan määrä 16,61% . Jing ym. sovellettiin MASSASPEKTROMETRISTÄ määritystä HPV-DNA-testaukseen 78 355: lle Etelä-Kiinasta kotoisin olevalle 18-75-vuotiaalle naiselle ja raportoitiin <7, 3% HR-HPV: n esiintyvyys . Nämä tutkimukset osoittavat, että HR-HPV-tartuntojen määrä on noin 10-15% kiinalaisilla naisilla, mikä on sopusoinnussa havaintomme kanssa. Tässä tutkimuksessa käyttämämme menetelmä on kuitenkin yksinkertaisempi ja vähemmän työläs verrattuna aiemmissa tutkimuksissa käytettyihin menetelmiin .

kahdessa Kiinassa tehdyssä tutkimuksessa, joissa otoskoko oli suurin, verrattiin HPV: n esiintyvyyttä ikäryhmien välillä. Zeng ym. analysoitiin retrospektiivisesti 671 163 HPV-testiä, jotka tehtiin Hybrid Capture 2-menetelmällä vuosina 2007-2014 ja osoitettiin korkein HR-HPV-esiintyvyys, 36.<20-vuotiaiden ikäryhmässä 9% ja 20-30 -, 30-40-ja 40-50-vuotiaiden ikäryhmässä HR-HPV-positiivisia oli 24, 4%, 19, 7% ja 19, 9%. HR-HPV-testaus, jossa suurin otoskoko (961 029 näytettä), suoritti Chen et al. HR-HPV: n esiintyvyys on suurin <20-vuotiaiden ikäryhmässä (22, 3%), kun taas 20-30-vuotiaiden ikäryhmässä esiintyvyys on 16, 8%, 30-40-vuotiaiden ikäryhmässä 15, 2% ja 40-50-vuotiaiden ikäryhmässä 15, 9%. Näiden tutkimusten mukaan esiintyvyys on hieman suurempi 20-30-vuotiaiden ryhmässä kuin 30-40-ja 40-50-vuotiaiden ryhmissä, mikä on vastoin tuloksiamme, sillä havaitsimme alhaisimman HR-HPV-esiintyvyyden 20-30-vuotiaiden ryhmässä. Tämä ristiriita voi johtua seuraavista tekijöistä: (1) nuoremmat naiset ovat nykyään enemmän pääsyä terveysvalistusohjelmiin, erityisesti sähköisiä laitteita käyttäviin Online-ohjelmiin, ja (2) nuoremmat naiset ovat innokkaampia oppimaan ja hyväksymään uutta tietoa puhtaanapidosta ja seksuaaliterveydestä.

HPV16 on yleisin HR-HPV-tyyppi, jota esiintyy kohdunkaulan näytteissä Pohjois – (Pekingin ja Henanin, Shanxin ja xinjiangin maakunnat), Kaakon (Shanghain ja Zhejiangin maakunnat) ja Etelä-Kiinan (Guangdongin maakunta) alueilta, ja positiivinen määrä vaihtelee 1,5-3,6%: sta, mikä vastaa 2,25%: n HPV16-tartuntojen määrää , joka on havaittu Etelä-Kiinasta tulevilla tutkimushenkilöillämme. HPV16 aiheuttaa maailmanlaajuisesti noin 50 prosenttia kohdunkaulan syövistä . Vaikka tiedot HR-HPV-genotyypin jakautumisesta kiinalaisilla kohdunkaulasyöpäpotilailla ovat vielä rajalliset, Li et al. raportoi, että 1818 / 2309 kohdunkaulasyöpäpotilaasta (78,7%) Länsi-Kiinasta oli HPV16-positiivisia, ja noin 90% näistä potilaista oli HPV16-ja HPV18-positiivisia . HPV16: n ja HPV18: n 53,2 prosentin tartuntaprosentti osoitettiin myös 326: lla kohdunkaulan syöpää sairastavalla potilaalla Fujianin maakunnasta Kaakkois-Kiinasta . Nämä tiedot osoittavat, että HPV16 ja HPV18 ovat vallitsevia HPV-tyyppejä, joita esiintyy näillä alueilla kohdunkaulasyöpäpotilailla. Täysin automatisoitu määritys, kuten Cobas 4800 HPV-testausjärjestelmä, joka voi samanaikaisesti havaita ja erottaa HPV16: n ja HPV18: n, on erityisen arvokas väestöpohjaisessa HR-HPV-seulonnassa alueilla, joilla HPV16-ja HPV18-infektio on hallitseva.

tietojen saatavuus

tämän tutkimuksen tulosten tueksi käytetyt tiedot ovat pyynnöstä saatavissa vastaavalta tekijältä.

eturistiriidat

kirjoittajat ilmoittavat, ettei heillä ole eturistiriitoja.

tekijöiden osuus

SW, XH, QP ja LZ rekrytoivat osallistujat, keräsivät näytteitä ja suorittivat testejä. SW ja JZ kirjoittivat artikkelin. FM kävi läpi kirjallisuuden ja teki tilastollisen analyysin. JZ suunnitteli tutkimuksen, analysoi tiedot ja hyväksyi lopulta käsikirjoituksen.