the state veterinary diagnostic laboratory, The Texas A&M Veterinary Medical Diagnostic Laboratory, TVMDL, testaa satojatuhansia näytteitä vuosittain. Kunkin vuoden hirvenmetsästyskauden kynnyksellä testimäärät alkavat kuitenkin kasvaa, kun chronic wasting disease, CWD, – testauksen kysyntä kasvaa.
mikä on krooninen Wasting-tauti?
CWD on etenevä neurologinen sairaus, joka vaikuttaa useisiin hirvieläimiin. CWD-taudille alttiita lajeja ovat valkohäntäpeura, mustahäntäpeura, Muulipeura, Hirvi, punapeura, poro, sika ja hirvi. Siitä lähtien, kun se raportoitiin ensimmäisen kerran vuonna 1967, siitä on dokumentoitu sekä vankeudessa että vapaana eläviä hirvieläimiä 25 osavaltiossa ja kolmessa Kanadan provinssissa.
CWD on saanut viime vuosina jonkin verran huomiota, kun raportit ”zombipeurataudista” nousivat pintaan ja levisivät eri tiedotusvälineisiin. Vaikka tarttuva, ”zombie deer disease” on itse asiassa harhaanjohtava nimi, koska eläimet kärsivät CWD eivät ole kuolleita. Kun vaikuttaa, se voi kestää kaksi tai neljä vuotta tartunnan eläin alkaa osoittaa kliinisiä oireita, jotka voivat jäljitellä ”zombie-kuin” käyttäytymistä taudin edetessä. Sairastuneet eläimet osoittavat merkkejä, kuten laihtuminen, kuolaaminen, kompastuminen ja tokkuraisuus. Tämä kliinisten oireiden yhdistelmä huipentuu eläimeen, joka näyttää ”kuihtuvan”, mikä kertoo taudin todellisen nimen.
samanlainen kuin naudan spongiforminen enkefalopatia, BSE, naudoilla ja scrapie lampailla ja vuohilla, CWD on luonnossa esiintyvä tarttuva spongiforminen enkefalopatia, TSE tai prionitauti. Prionit ovat poikkeavia proteiineja ja erittäin vaikeita tuhota. Tartunnan saatuaan prionit vaikuttavat aluksi eläimen imusolmukkeisiin ja levitettyään kehon läpi tartuttavat lopulta aivot.
vuonna 2012 CWD löydettiin ensimmäisen kerran Texasista vapaana eläneistä muulipeuroista Hueco-vuorilta. Sen jälkeen tautia on edelleen havaittu Länsi-Texasin ja Panhandlen alueilla muulipeuroissa, valkohäntäpeuroissa ja hirvissä.
vaikka Texasin CWD-historia on ollut lyhyt muihin osavaltioihin verrattuna, diagnostiset testit lisääntyvät edelleen, kun valtion virastot yrittävät saada taudin kuriin. Texasissa TVMDL on ainoa laboratorio, joka on hyväksytty testaamaan CWD: tä.
CWD: n luovuttajat: keitä he ovat?
viime vuonna TVMDL teki noin 26 500 CWD-testiä. Testien kokonaismäärästä lähes puolet tehtiin loka-joulukuussa. Tämä kasvu CWD huomautuksia samaan aikaan peuranmetsästyskauden Texasissa.
metsästäjien on noudatettava tiettyjä ohjeita peurakauden aikana johtuen Texas Parks and Wildlife Department, Tpwd, ohjelmista, joilla pyritään vähentämään CWD: n leviämistä. Jos esimerkiksi hirvi lopetetaan CWD-karanteenialueella, näytteet on kerättävä ja toimitettava CWD-testaukseen. Näytteitä kerätään metsästäjien tarkastusasemilla, peurankäsittelylaitoksissa ja joskus eläintentäyttäjillä.
CWD: n testipyyntöjä tekevät valtion virastot, kuten Tpwd ja Texas Animal Health Commission, TAHC ja peurankasvattajat. TVMDL tarjoaa palvelua näille virastoille ja hirvieläinteollisuudelle auttaakseen jatkuvissa pyrkimyksissä seurata CWD: n kaltaisten tautien leviämistä.
taudin toteaminen
kerran laboratoriossa tvmdl testaa näytteitä kahdella menetelmällä: entsyymi-immunosorbenttimäärityksellä, ELISA: lla tai immunohistokemialla, IHC: llä. Molemmissa testimenetelmissä tarvitaan kudoksia, jotka on haettu joko peuran imusolmukkeista tai obexista.
ELISA-testi
kysytyin menetelmä on ELISA-testi. Tämä menetelmä on herkempi vaihtoehto, koska siinä käytetään tuoreita kudoksia eikä säilöntäaineeseen kiinnitettyjä kudoksia. Koko prosessi ilman näytteen valmistusaikaa kestää tyypillisesti noin kolme tuntia. Kun näyte saapuu tvmdl: n serologiaosastolle, se aloittaa ensimmäisen kolmesta vaiheesta: näytteen valmistamisen.
näytteenvalmistuksen aikana imusolmuke-ja/tai obex-kudosten tarkat tilavuudet ja anatomiset paikat leikataan ja asetetaan ainutlaatuisiin hiontaputkiin. Putket asetetaan homogenisaattoriin, joka nesteyttää kudokset ja valmistaa ne testauksen toista vaihetta, puhdistusta varten.
puhdistusvaihe on puoliautomaattinen. Nesteen käsittelylaite alkaa näytteen käsittelystä. Tämä prosessi sulattaa normaalit prionit käyttämällä proteinaasi K: ta ja jättää jälkeensä sairauksia aiheuttavia prioneja, jos niitä on. Tämän jälkeen puhdistusprosessin nestemäinen lopputuote sentrifugoidaan pelletiksi. Pelletti käsitellään toisen kerran ja sitten laimennetaan. Pelletti siirtyy tämän jälkeen testauksen viimeiseen vaiheeseen ja selvittää, onko CWD-prioneja.
havaitseminen on ELISA-testausprosessin viimeinen vaihe. Tässä vaiheessa laimennettu näytepelletti testataan sandwich ELISA-menetelmällä. Sandwich ELISA käyttää kahta vasta-ainekerrosta tietyn antigeenin, tässä tapauksessa CWD-prionin, pitoisuuden määrittämiseen. Prosessin aikana lisätään väriä vaihtava substraatti näytteeksi CWD-prionien esiintymisestä näytteessä. Jos näytteeseen kehittyy merkittävä värinmuutos, sitä pidetään ”alkureaktorina”, IR, ja se testataan uudelleen. IR-näytteet,jotka vielä osoittavat CWD-prionien esiintymisen uusintatestauksen jälkeen, toimitetaan Yhdysvaltain maatalousministeriön Animal and Plant Health Inspection Service, USDA-APHIS, National Veterinary Services Laboratory.
IHC-testaus
TVMDL: n toinen CWD-testausvaihtoehto, IHC, käyttää kiinteitä tai säilöttyjä kudoksia. Jos kudokset saapuvat tvmdl: ään tuoreina tai huonosti kiinnitettyinä, prosessiin lisätään päivä, jotta kudokset voidaan vahvistaa formaliinilla, kunnes ne ovat valmiita testausta varten.
kun kudokset on kiinnitetty hyvin, ne asetetaan yksilöllisiin muovikasetteihin. Kasetteja tarvitaan seuraavaan vaiheeseen, jossa kudoksia käsitellään noin 13 tuntia. Tänä aikana kudokset kuivataan, ja kaikki vesi korvataan parafiinivahalla kudoksen solurakenteen säilyttämiseksi.
käsittelyn jälkeen kudokset upotetaan parafiinimuottiin, jotta ne voidaan lohkoa mikrotomin avulla. Tämä väline viipaloi vahakudoksen lohko 5-mikronin paksuisiksi lohkoiksi, ohuemmiksi kuin säie ihmisen hiuksia.
ohut kudososa kiinnitetään lasilevyyn. Kuivaamisen jälkeen yön yli, lasilevyt valmistetaan värjäystä. Diat käsitellään parafiinin poistamiseksi ja sen varmistamiseksi, että antigeenin sitoutumispaikat ovat käytettävissä värjäysprosessin aikana. Tämä prosessi tunnistaa CWD-antigeenejä kudoksessa sitomalla antiprionimolekyylin positiivisessa kudoksessa olevaan CWD-antigeeniin ja sitomalla sitten punaisen kromogeenin kyseiseen molekyyliin.
tämä puoliautomaattinen värjäysprosessi kestää yhteensä noin kuusi tuntia; kaksi tuntia ruumiillista työtä ja neljä automatisoitua tuntia. Tänä aikana kolme värjäysvälineitä voi värjätä 90 lasi dioja. Kun värjäys on valmis, kaikki diat päällystetään ja annetaan TVMDL-patologeille, jotka tarkastavat mikroskooppisesti jokaisen dian CWD: n esiintymisen varalta.
Elisa-testimenetelmän tapaan, jos näytteellä epäillään CWD: tä, se lähetetään Iowan Amesissa sijaitsevaan National Veterinary Service Laboratoryyn varmistustestiä ja lopullista diagnoosia varten.
TVMDL: n ero
vaikka muut laboratoriot ympäri Yhdysvaltoja tarjoavat CWD-testausta, TVMDL erottuu muista omistautumalla Texasin peurateollisuuden yksilöille. Virasto tekee tiivistä yhteistyötä muiden valtion virastojen ja peurankasvattajien kanssa työsuhteiden ja henkilökohtaisten yhteyksien luomiseksi.
lisätietoja CWD-testauksesta TVMDL: ssä on osoitteessa tvmdl.tamu.edu tai soita yliopiston laboratorioon numeroon 1-888-646-5623.