Her-2/neu status voidaan havaita analysoimalla geenikopioiden määrää Southern blotting, PCR, tai FISH, tai ilmaistun proteiinin määrä voidaan todeta Western blottaus, entsyymi-immunologinen määritys tai IHC. Tällä hetkellä kaksi yleisimmin käytettyä menetelmää ovat IHC ja FISH, koska niillä voidaan arvioida Her-2/neu formaliinikiinteässä parafiinisessa arkistokudoksessa.
useimmat Her-2/neu-tutkimukset on tehnyt IHC, joka havaitsee Her-2/neu-proteiinituotteen yliekspression kasvainsolujen solukalvolla. Tässä tutkimuksessa käytettiin CB11-monoklonaalista vasta-ainetta, joka on standardoidun polyklonaalisen Herceptestin tavoin suunnattu Her2/neu-molekyylin sytoplasmaa vastaan .
IHC on laajasti saatavilla ja helppo suorittaa kohtuullisin kustannuksin. Tätä semikvantitatiivista menetelmää vaivaavat kuitenkin TEKNISET artefaktit, herkkyyserot eri vasta-aineiden välillä ja subjektiivinen tulkinta, mikä johtaa patologien väliseen interobserver-vaihteluun . Tutkimukset paljastavat Yhdysvaltain elintarvike-ja lääkeviraston hyväksymän Herceptestin yliherkkyyden, väärän positiivisen tuloksen ollessa jopa 50% . Thomson ja kollegat totesivat, että tapauksissa, joissa IHC-tahran voimakkuus on 1 + tai 2+, interobserver-sopimus on huono ja ennustava arvo on epätyydyttävä kliiniseen käyttöön.; he suosittelivat lisätestejä, mieluiten kaloilla .
FISH on melko objektiivinen ja kvantitatiivinen menetelmä Her-2/neu-geenin monistumisen toteamiseksi kasvainsolujen tumissa. Haittoja tämän menettelyn ovat sen jyrkkä hinta (10 kertaa IHC), hienostuneisuus, fluoresenssimikroskoopin tarve, väliaikainen signaali (se vaatii erityistä kameraa), ja sen kyvyttömyys havaita ja arvioida kasvaimen histomorfologia.
IHC: n havaitsema Her-2/neu-yliekspressio korreloi suuresti kalojen havaitseman geenien monistumisen kanssa (jopa 98%: n vastaavuus) . Kuitenkin 3-15%: ssa rintakarsinoomista esiintyy Kohtalaista Her-2/neu-kalvovärjäystä ilman näyttöä monistumisesta. Ne edustavat useimmiten erittäin herkkää epäspesifistä värjäytymistä (vääriä positiivisia) ja harvoin joko tehostettua mRNA-transkriptiota amplifikaation puuttuessa tai geenien monistumista, joka on in situ-hybridisaatiomenetelmien havaitsemistason alapuolella .
Kakar ja kollegat päättelivät, että IHC soveltuu alustavaan Her-2/neu-arviointiin, mutta potilaat, joiden kasvaimet antoivat alle 3+ (erityisesti ne, jotka tulkittiin 2+), hyötyisivät FISH-hoidosta, jotta he voisivat arvioida Her-2/neu-statuksen tarkemmin ja välttää epätarkkoja ennusteita ja epäasiallista hoitoa .
CISH on tuore edistysaskel Her-2 / neu-tunnistuksessa. Se käyttää vankkaa uniikkisekvenssistä luotainta, joka on kehitetty in situ-hybridisaatioon ja on lupaava käytännöllinen vaihtoehto kaloille. Tannerin ja kollegoiden ensimmäisen cish-tutkimuksen jälkeen seitsemän muuta raporttia vahvisti cish-tulokset suotuisasti . Cishin ja kalojen välinen vastaavuus vaihteli 85 prosentista jopa 100 prosenttiin . Kaikki nämä raportit totesi edut CISH kaloihin: se vaatii tavallista mikroskooppia; menetelmä on vähemmän raskas ja taloudellisempi; signaalin voimakkuus on pysyvä; ja patologit tuntevat IHC signaaleja ja pystyvät korreloimaan havainnot taustalla kasvain histomorfologia. CISH: n avulla tarkkailijat voivat valita invasiivisen duktaalikarsinooman alat välttäen intraduktaalisen karsinooman pesäkkeitä, joille Her-2/neu: lla on erilainen kliininen merkitys. CISH on erityinen, herkkä ja helposti sovellettavissa oleva menetelmä Her-2/neu-geenin monistamiseen, ja sitä voidaan käyttää yhdessä IHC: n kanssa rintasyöpäpotilaiden arvioinnissa . Ross ja kollegat tarkastelivat äskettäin Her-2/neu-testauksen nykytilaa, ja he totesivat, että CISH on kätevämpi geenipohjainen tekniikka, joka on ”waiting in the wings”.
tässä tutkimuksessa konkordanssi 3+ IHC: n ja CISH: n monistettujen tapausten välillä oli 100% (40/40), mikä osoittaa kaikkien monistettujen geenitapausten yliekspressoivan Her-2 / neu-proteiinia. Sen sijaan 2+ IHC: n ja CISH: n vahvistamista tapauksista sopu oli vain 45 prosenttia, mikä on aiemmin ilmoitettua vähemmän (93 prosenttia) . 13.75% (22/160) IHC-positiivisia / CISH ei monistettu kasvaimia tässä tutkimuksessa, joissa kaikissa oli 2+ IHC pisteet, on suurempi kuin 6% vääriä positiivisia tuloksia Zhao ja kollegat , vaikka verrattavissa 17% tulos (IHC CB11 vs. FISH) saatu Tubbs ja kollegat . Ilmeisesti, huomaamme, että 2 + IHC pisteet on epäselvä verrattuna CISH. Tämä osajoukko saattaa hyötyä cish-refleksitestauksesta. Kaikki negatiiviset IHC: n tapaukset olivat cish non-amplified, osoittaa täydellistä yksimielisyyttä kaikista negatiivisista tuloksista. Tässä tutkimuksessa IHC: n (käyttäen CB11-vasta-ainetta) ja CISH: n välinen 86, 25%: n kokonaiskonkordanssi on pienempi kuin aiemmissa raporteissa (94-96%) . Olemme Sapinon ja kollegoiden kanssa samaa mieltä siitä, että geenien monistusanalyysiä voidaan välttää kaikissa 0, 1+ ja 3+ IHC-tapauksissa, koska tulokset ovat ennustettavissa IHC: stä ja ovat täysin yhdenmukaisia CISH: n kanssa . CISH: n hyödyllisyys on siksi Her-2/neu-muunnoksen lisätesteissä epäselvissä tapauksissa IHC: ssä, joka on edelleen ensisijainen seulontamenetelmä. Yhdistetty IHC-CISH-algoritmi tarjoaa taloudellisen ja kattavan Her-2/neu-datan ohjaamaan kliinikoita hoitovaihtoehtojen kartoittamisessa.
heikosti monistettu CISH-Luokka (6-10 signaalia) oli vaikeimmin tulkittava, mikä vaati geenien kopioinnin tarkkaa luettelointia. Signaaliklusterointi, joka todennäköisesti johtuu intrakromosomaalisesta monistuksesta homogeenisesti värjäytyvillä alueilla, ilmeni välittömästi erittäin monistetuissa tapauksissa ja oli helposti arvioitavissa .
kromosomi 17: n aneuploidiatestiä ei tehty monistamattomilla ja vähän monistetuilla CISH-määrityksillä, koska viimeaikaiset tutkimukset osoittivat, että se tekee analyysin kalliimmaksi ja aikaa vievämmäksi lisäämättä asiaankuuluvia tietoja, lukuun ottamatta suositeltujen ydinamplikonien määrän raportointia ja hybridisaatioreaktion toisena sisäisen kontrollin muotona . Lisäksi, vaikka valmistaja (Zymed) ehdotti, että kromosomi 17 aneuploidia testataan kaikissa geenivahvistetuissa tapauksissa , olemme samaa mieltä Vera-Roman ja kollegat, jotka oikein huomautti, että koska useimmat polysomia tulokset kuuluvat harmaalla alueella kolmesta viiteen signaalia, asettamalla kynnys cutoff signaalin osoittaa korkea kuusi tai enemmän (kuten tässä tutkimuksessa) käytännössä poistaa polysomia muuttuja.
tässä tutkimuksessa ei havaittu IHC-negatiivisia CISH-monistettuja kasvaimia. Tämä selittynee sillä, että kyseessä oli yhden laitoksen tutkimus, jossa oli todennäköisesti tasaisesti kiinteitä ja käsiteltyjä kasvainkudoksen parafiinilohkoja sekä yhtenäinen antigeenihakutekniikka, jotka molemmat helpottavat korkealaatuista IHC: tä. Zhao ja kollegat raportoivat satunnaisista IHC-negatiivisista cish-monistetuista tapauksista, ja he katsoivat, että nämä edustavat pientä määrittelemätöntä prosenttiosuutta, joka monisti Her-2/neu ilman yliekspressiota . Samassa tutkimuksessa ja muissa KALATUTKIMUKSISSA havaittiin myös harvinaisia 3 + IHC-kasvaimia, jotka eivät olleet monistettuja (vääriä positiivisia) . IHC–CISH: n erojen syyt ovat samanlaiset kuin IHC: n ja FISH: n väliset erot, kuten tässä raportissa aiemmin todettiin.
aiempien CISH–tutkimusten testivirheen ja väärän negatiivisuuden syitä olivat Sektion kasvaimen puuttuminen, korkean taustan aiheuttama pisteytys, Alhainen signaalin voimakkuus toistuvista kokeista huolimatta, sisäisen kontrollin signaalien puuttuminen ja alkoholi–formaliini-etikkahappo-fiksatiivin käyttö . Lisäksi todettiin, että lämpökäsittely ja ruoansulatus pepsiinillä ovat kriittisimmät menetelmät CISH: n optimoidulle suorituskyvylle ja että CISH: n onnistumisprosentit olivat alhaiset, kun käytettiin 20 vuotta vanhoja kudoslohkoja .
Sauer ja kollegat korreloivat IHC-ja KALATULOKSET kliinisen ennusteen kanssa. He totesivat, että IHC/FISH-positiivisilla tapauksilla sekä FISH-positive-only-tapauksilla oli sama ennuste eloonjäämisestä, kun taas IHC-positive-only-tapauksilla oli samanlainen ennuste kuin IHC/FISH-negative-kasvaimilla. Sen sijaan IHC-negatiivisilla/FISH-positiivisilla tapauksilla oli samanlainen selviytymistodennäköisyys kuin IHC/FISH-positiivisilla tapauksilla. Samat kirjoittajat päättelivät, että jos vain IHC: tä käytettäisiin ensisijaisena välineenä, IHC-negatiiviset/KALAPOSITIIVISET tapaukset jäisivät väliin; nämä naiset eivät hyötyisi trastutsumabista ja heidän selviytymisensä vaarantuisi. Sen sijaan pelkät IHC-positiiviset kasvaimet näyttävät kuuluvan parempaan ennusteryhmään, eikä niiden toteamatta jättäminen todennäköisesti vaikuttaisi negatiivisesti eloonjäämiseen .
koska kliinisissä tutkimuksissa ei ole vielä käsitelty vähän monistettujen ja paljon monistettujen CISH-tulosten hyödyllisyyttä, erityisesti heikosti monistetun ryhmän epävarmaa merkitystä, nämä luokat ovat edelleen muutostilassa. Tästä rajoituksesta huolimatta tällaisten monistettujen ryhmien ilmoittaminen erikseen on nykyisellään edelleen hyödyllistä, kunnes tulevaisuudessa saadaan mitä tahansa kliinisiä assosiaatioita. Intraobserver ja interobserver variability on reporting low-amplified and high-amplified cish results was not included in this study, vaikka patologi, joka tulkitsi cish-määrityksiä, sovelsi johdonmukaisesti valmistajien asettamia kriteerejä.
premenopausaalisilla naisilla rintasyövällä on erilainen biopatologinen profiili kuin vanhemmilla potilailla. Nuori ikä toimii korvaavana mittarina epäsuotuisille ennusteprofiileille . Tämä tutkimus ei onnistunut osoittamaan yhteyttä vaihdevuosien tilan, joka oli mielivaltaisesti asetettu 50 vuotta ja yli, ja Her2 / neu muutos.
Her2/neu-monistuminen korreloi suoraan rintasyövän asteeseen ja histologiseen tyyppiin . Sapino ja kollegat ehdottivat, että kasvaimen laadun ja histologisen tyypin perusteella patologin pitäisi pystyä ilmoittamaan onkologille, mikä rintasyöpä vaatii Her2 / neu-analyysejä . Vaikka yksikään neljästä hyvin erilaistuneesta kasvaimesta ei osoittanut HER2 / neu-vahvistusta tai yli-ilmentymää, tässä tutkimuksessa ei kuitenkaan kerätty merkittävää korrelaatiota HER2/neu-statuksen ja histologisen arvosanan suhteen; siksi kannatamme edelleen Her2/neu-testausta kaikissa vastikään diagnosoiduissa rintasyövissä. Kaiken kaikkiaan rintasyöpäpotilaiden ikäjakauma ja kasvaimen histologinen aste eivät ennustaneet merkittävästi IHC: n ja Cish Her2/neu: n statusta.