Monoklonal antibody (Mab) pharmaceuticals ovat herättäneet merkittävää kiinnostusta johtuen niiden voimakkaasta terapeuttisesta tehosta ja spesifisyydestä tulehduksellisten, onkologisten ja autoimmuunisairauksien hoitoon. Koska niiden luontainen monimutkaisuus johtuu suuresta määrästä mikro-heterogeenisyyttä, on ratkaisevan tärkeää analyysimenetelmiä tarjota kattava perusteellista Luonnehdinta ehdokasmolekyylien.
Creative Biolabs tarjoaa lukuisia analyysitekniikoita vasta-aineiden karakterisointiin ja homogeenisuuden arviointiin mAb: n löytymisen, prekliinisen ja kliinisen kehityksen kaikissa vaiheissa. Tässä, esittelemme soveltaminen kapillaari isoelectric tarkennus (cIEF) vasta-aine varauksen heterogeenisuus analyysi. Sitä käytetään laajalti terapeuttisten mAbs: ien luonnehtimiseen. Määrittämällä pI MAB charge isoforms, cIEF tarjoaa tietoa ratkaisevaa identiteetin, puhtaus, post-translational muutoksia, ja vakautta.
Johdatus cIEF: iin
cIEF perustuu kapillaarigeelielektroforeesin periaatteeseen. Elektroforeesi on erotustekniikka, joka perustuu varautuneiden lajien eronnopeuteen sähkökentässä kohti vastakkaisen varauksen elektrodia. Molekyylien erottamiseksi isoelektrisen pisteen (pI) perusteella geelin sisällä määritetään pH-gradientti ampholyyttiseosten avulla. Sähkökentän alla molekyylit vaeltavat sähkökenttää pitkin, kunnes saavuttavat pI: tä vastaavan pH: n, jossa molekyylien positiiviset ja negatiiviset varaukset ovat tasapainossa. Koko kapillaarin UV-absorptio mitataan koko erotuksen ajan, mikä mahdollistaa reaaliaikaisen tarkkailun ja lopullisen kvantifioinnin.
Kuva.1 isoelektrisen tarkennuksen periaate. (Pergande, 2017)
cIEF for Charge Heterogeneity Characterization
mAbs ovat alttiita erilaisille translaation jälkeisille muunnoksille (esim., glykosylaatio, fosforylaatio, hapetus ja lysiinileike), mikä johtaa varausvariantteihin. Joillakin näistä varausmuunnoksista voi olla vaihtelevassa määrin vaikutusta molekyylin biologiseen aktiivisuuteen ja turvallisuuteen. Esimerkiksi mabs: n glykosylaatioprofiili vaikuttaa voimakkaasti proteiinin biologiseen aktiivisuuteen. Näin ollen mAb-latauksen heterogeenisuuden rutiiniseuranta on olennainen osa tuotteen laadun ja elinkaaren hallintasuunnitelmaa. Se on myös yksi biosimilaaristen kehitys-ja vertailututkimusten tärkeimmistä analyyttisistä näkökohdista. Varaukseen perustuvana erotustekniikkana cIEF on tehokas työkalu mabs: n varausprofiilin luonnehtimiseen, koska eri varausmuunnokset voidaan erottaa niiden piin mukaan sisäisen kalibroinnin avulla. Koska cIEF tarjoaa erittäin korkean toistettavuuden ja spesifisyyden, tämä on yksi suosituimmista työkaluista mAb-analyysiin.
palvelujemme ominaisuudet
- ehjien ja pelkistettyjen mAbs: ien koko-ja varausmuunnosten luonnehtiminen cIEF: llä
- mabs: n varausmuunnosten analysointi ortogonaalisella lähestymistavalla
- cIEF: n erottelu massaspektrometrian (MS) analysoinnilla
- räätälöidyt palvelut erityisvaatimusten mukaan
Creative Biolabs tarjoaa myös laajan valikoiman vasta-aineiden Toimintomäärityksiä, jotka auttavat ymmärtämään Varausmuunnosten vaikutuksia vasta-aineiden aktiivisuuteen ja ominaisuuksiin, kuten efektoritoimintoihin, fcrn: ään ja antigeenisidontaan. affiniteetti, ja PK, mikä selvittää rakenne-funktio suhteita. Jos olet kiinnostunut palvelustamme, ota meihin yhteyttä ja keskustele tarpeistasi.