diagnosointia ja minimaalista Jäännössairauden mittausta varten: krooninen lymfaattinen leukemia (KLL) on klassinen immunofenotyyppi, joka koostuu kevyestä ketjurajoituksesta CD5+, CD19+, dim CD20, CD23+, CD43+, CD200+, CD10 – ja CD79b-. Tämä erottaa sen normaaleista B-soluista ja muista lymfoproliferatiivisista häiriöistä (LPDs). Näihin antigeeneihin kohdistuvat vasta-aineet sisältyvät kahteen 8-värivirtaussytometriapaneeliin, jotka euroflow consortium on kehittänyt B-solujen LPDs: n työstämiseen. Näiden vasta-aineiden yhdistäminen yhdeksi 10-väriseksi paneeliksi olisi kustannustehokkaampaa. Lisäksi uudet KLL-hoidot voivat aiheuttaa syviä remissioita, mikä lisää tarvetta mitata minimaalista jäännössairautta (MRD), jossa on yli 1 jäljellä oleva leukemiasolu 10 000 leukosyyttiä (10-4) kohti. Nykyisessä kansainvälisessä standardoidussa menetelmässä MRD: n mittaamiseksi, joka on otettu käyttöön eurooppalaisessa KLL-Tutkimusaloitteessa (ERIC), käytetään CD3 -, CD5 -, CD19 -, CD20 -, CD22 -, CD43 -, CD79b-ja CD81-vasta-ainepaneelia. Nämä vasta-aine-fluorokromi-yhdistelmät ovat kuitenkin erilaisia kuin Euroflow-diagnostiikkapaneelien käyttämät yhdistelmät. Näin ollen MRD-testauksen toteuttamista harkitsevien laboratorioiden olisi hankittava vasta-aineita 3 eri paneelille (2 diagnostiikkaa ja 1 MRD). Laajensimme Euroflow 8-värisen lymfosyyttien seulontaputken (lst) CD200: aan ja CD23: een siten, että KLL voidaan havaita yhdessä 10-värisessä putkessa jopa 0,01%: n pitoisuuksina. Tämän tutkimuksen tavoitteena oli selvittää tämän uuden paneelin käyttöönoton mahdolliset kustannussäästöt ja selvittää, onko se riittävän herkkä MRD: n havaitsemiseksi.
menetelmät: laskimme muokatulla 10-värisellä lst-putkella (mlst1, saatu kylmäkuivattu) analysoitujen näytteiden määrän huhtikuusta 2018 maaliskuuhun 2019 LPD: n poissulkemiseksi ja tällä menetelmällä tallennettujen vasta-ainekiintiöiden määrän verrattuna tavalliseen 2-putkiseen Euroflow-menetelmään. Loimme myös version edellä mainitusta paneelista (mLST2) käyttäen nestemäisiä vasta-aineita lisätäksemme tulosten yleistettävyyttä.korvasimme CD38: n CD43: lla nähdäksemme, onko tämä parantanut MRD: n havaitsemista (katso alla olevat paneelit). MRD-testauksessa käytimme 24 eri potilaan KLL-näytteitä, joista saatiin 60 MRD-näytettä eri pitoisuuksina leukemisia soluja. Näytteet valmistettiin lisäämällä KLL-soluja normaalien leukosyyttien suspensioihin noin 0,1, 0,01 ja 0,001 prosentin pitoisuuksilla. Jokainen näyte alikainattiin ja värjättiin kolmella paneelilla: ERIC, MLST1 ja mlst2. Tiedot hankittiin BD FACSCanto II-tai BD FACSAria Fusion-järjestelmällä ja analysoitiin BD FACSDiva-ohjelmistolla. KLL-solut tunnistettiin keskeisten merkkiaineiden differentiaalisen ilmentymisen perusteella ja MRD laskettiin KLL-solujen lukumääränä/leukosyyttien kokonaismäärä. MRD-positiivisuudeksi määriteltiin ≥ 0, 01%. Lautakuntien välinen yhteisymmärrys arvioitiin Bland-Altman-juonimenetelmällä. Laskimme myös paneelien välisen prosenttisopimuksen MRD-positiivisuuden tunnistamisessa.
tulokset: yhden vuoden aikana mLST1 tehtiin 474 näytteelle, joista 220: llä oli LPD ja 123: lla (56%) oli klassinen KLL-fenotyyppi, joten lisätestejä ei tarvinnut tehdä. Näin saavutettiin 476 vasta-ainekiintiön nettosäästö. MRD-arvon arvioinnissa CD5: n ja CD20: n differentiaaliekspressio oli merkittävin tekijä KLL: n erottamisessa normaaleista B-soluista mlst1: n ja MLST2: n avulla. Tunnistimme yhden KLL-tapauksen, jossa oli epätyypillinen immunofenotyyppi (dim CD5, bright CD20), jota oli vaikea avata mLST-paneelilla. MLST-paneelien ja ERIC-paneelin kanssa päästiin yhteisymmärrykseen MRD-tuloksista. Määritysrajan ylittävien arvojen osalta 95 prosentin hyväksymisraja oli ±0,3369 log ERIC vs. MLST1-vertailussa ja ±0,3485 log ERIC vs. MLST2-vertailussa. Näin ollen MRD-tasojen vaihtelu paneelien välillä oli alle 2-kertainen valtaosaan ajasta, mitä pidimme kliinisesti hyväksyttävänä, koska MRD mitataan eksponentiaalisella asteikolla. ERIC-paneeli ja mLST1 olivat 88,3 prosentin yksimielisiä MRD-positiivisten näytteiden erottamisesta MRD-negatiivisista näytteistä. Ericin paneelin ja mLST2: n välinen sopimus oli 93,3 prosenttia.
päätelmät: muunnetun 10-värisen LST-paneelin käyttäminen sekä KLL: n diagnosointiin että MRD-mittaukseen on mahdollista. Etuja ovat lisääntynyt perehtyneisyys vasta-aineisiin ja mahdolliset kustannussäästöt, jolloin MRD: tä voidaan käyttää useammissa sytometrialaboratorioissa. Epätyypilliset KLL tapauksissa ilman tavallista CD5 positiivisuus ja dim CD20 on hyvin vaikea portti käyttäen lst paneeli. Näissä tapauksissa ERIC-paneeli on selvästi parempi, koska CD22, CD79b, CD81 ja CD43 voivat edelleen erottaa pahanlaatuiset ja normaalit lymfosyytit toisistaan.
Bazinet: BD Biosciences: Muu: toimitti merkittävän määrän tässä hankkeessa käytettyjä vasta-aineita maksutta.. Wever: Teva Canada Innovation: Työllisyys. Gimmig: Bd biotieteet: työllisyys. Johnson:Lundbeck: Employment, honoraria, Membership on a entity ’s Board of Directors or advisory committeet, Other: Travel fees, gifts, and others, Research Funding; Other: Consultancy, Employment, Honoraria, Membership on the entity’ s Board of Directors or advisory committeet, Other: Travel fees, gifts, and others, Research Funding; Abbvie: Consultancy, Employment, Honoraria, Membership on the entity ’ s Board of Directors or advisory committeet, Research Funding; BD Biosciences: Other: Toimitti merkittävän osan hankkeessa käytetyistä vasta-aineista maksutta.; BMS: Consultancy, Honoraria; Seattle Genetics: Honoraria.