Abstract
hoog risico papillomavirus (HR-HPV) testen in combinatie met cytologie verbetert de detectie van cervicale laesies en verhoogt de duur van de screeningsintervallen. Voor een populatie-gebaseerde HR-HPV-enquête, testen Automatisering is in grote behoefte. Het Cobas 4800 HPV-testsysteem is een volledig geautomatiseerde test die gelijktijdig HPV16, HPV18 en andere 12 gepoolde HR-HPV-genotypen kan detecteren. Dit systeem is gebruikt voor HR-HPV-screening in een aantal landen; een dergelijke toepassing in een grote populatie in China is echter niet gedocumenteerd. In deze studie gebruikten we het Cobas 4800 HPV-testsysteem om HR-HPV te detecteren in cervicale cytologie specimens verzameld van een totaal van 5650 asymptomatische vrouwen uit een regio van Zuid-China. We meldden het volgende: (1) de prevalentie van de 14 genotypes van HR-HPV was 12,96%; (2) voor degenen met HR-HPV-infectie was 2,25% positief voor HPV16, 0,50% voor HPV18, 9,15% voor gepoolde 12 HPV-typen en 1,06% voor meervoudige HPV-infectie; en (3) Er was geen significant verschil in de prevalentie van HR-HPV tussen verschillende leeftijdsgroepen. HPV16 en HPV18 zijn de belangrijkste HPV-typen die in sommige regio ’s in China worden aangetroffen bij baarmoederhalskankerpatiënten, wat erop wijst dat een volledig geautomatiseerde assay zoals het Cobas 4800 HPV-testsysteem bijzonder waardevol is voor POPULATIEGEBASEERDE HR-HPV-screening in deze regio’ s, aangezien deze assay tegelijkertijd HPV16 en HPV18 kan detecteren.
1. Inleiding
humaan papillomavirus (HPV) is een dubbelstrengs DNA-virus uit de familie Papillomaviridae . Er zijn meer dan 200 genotypen van HPV die zijn geïdentificeerd, waaronder 15 (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68, 73, en 82) zijn sterk geassocieerd met baarmoederhalskanker . Baarmoederhalskanker is de vierde meest voorkomende kanker bij vrouwen wereldwijd en de zesde meest voorkomende kanker bij vrouwen in China . Om de last van baarmoederhalskanker te verminderen, is vroege identificatie van cervicale laesies die waarschijnlijk vooruitgang naar invasieve kanker is van het grootste belang. Cervicale cytologie speelt een belangrijke rol bij de preventie van baarmoederhalskanker . De toevoeging van HPV-tests aan de cytologie resulteert in een verhoogde detectie van hooggradige cervicale laesies en daarom wordt aanbevolen om screening van hoog-risico HPV (HR-HPV) in de cytologie op te nemen om de detectie van ziekten te verbeteren en de duur van de screeningsintervallen te verhogen .
tot op heden zijn verschillende methoden gerapporteerd voor HPV-genotypering en-detectie . Voor population-based screening is het testen van automatisering vooral nuttig omdat automatisering de mogelijkheid heeft om een groot aantal monsters in korte tijd te verwerken en menselijke fouten die kunnen optreden bij handmatige bewerkingen te verminderen. Het Cobas 4800 HPV-testsysteem (Roche Molecular Systems Inc., Rotkreuz, Zwitserland), volledig geautomatiseerd, is ontworpen om gelijktijdig 14 HR-HPV-typen te detecteren: HPV16 individueel, hpv18 individueel en 12 gepoolde HR-HPV-genotypen (31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, en 68) . Dit systeem is goedgekeurd door de Amerikaanse Food and Drug Administration voor HR-HPV screening. Het Cobas 4800 HPV-testsysteem bestaat uit 2 delen, d.w.z., een Cobas x 480 Instrument dat wordt gebruikt voor automatisering van nucleïnezuur zuivering en PCR Monster pipetteren en een Cobas Z 480 Analyzer die is voor automatische real-time PCR versterking en daaropvolgende type-specifieke hybridisatie. Hoewel het gebruik van het Cobas 4800-systeem voor HR-HPV-tests in een aantal landen is gemeld , is een dergelijke toepassing in een grote populatie in China niet gedocumenteerd. In deze studie gebruikten we het Cobas 4800 HPV-testsysteem om HR-HPV te detecteren in cervicale cytologie specimens verzameld van een totaal van 5650 asymptomatische vrouwen.
2. Methods
deze studie werd goedgekeurd door de Medical Research Review Committee van het Zhongshan Hospital of Traditional Chinese Medicine. Informed consent werd verkregen van alle deelnemers.
2.1. Cervicale monsterverzameling
asymptomatische vrouwen in de leeftijd van 20-65 jaar werden ingeschreven van januari 2018 tot December 2018 voor deze studie met de testkosten gedekt door proefpersonen of hun werkgevers of in combinatie. De inclusiecriteria omvatten 20 jaar of ouder zijn, niet zwanger zijn, intacte baarmoeder hebben, seksueel actief zijn, of met een voorgeschiedenis van seksuele activiteit. Alle proefpersonen werden geïnformeerd over het niet gebruiken van vaginale geneesmiddelen, vaginale anticonceptiva of smeermiddelen gedurende 48 uur vóór de baarmoederhalsbemonstering. Cervicale cytologie monsters werden verzameld met behulp van de Cervex-Brush Combi-apparaat (Rovers Medical Devices) als volgt: de endocervicale bemonstering deel van het apparaat werd ingebracht in het endocervicale kanaal om de laterale borstels volledig contact met de ectocervix, en het apparaat werd vervolgens gedraaid twee volledige draaien met de klok mee. Na het opzuigen werd het hulpmiddel met de geoogste cellen onmiddellijk ingebracht in een injectieflacon met Conservcyt-oplossing (Hologic Inc., Bedford, MA, USA)en krachtig wervelde. Monsters werden gebruikt voor HPV-DNA-detectie zoals hieronder beschreven.
2.2. HR-HPV-detectie met behulp van het Cobas 4800 HPV-testsysteem
Lysis-Buffer, Wash-Buffer, Elutiebuffer, HPV-Positieve en negatieve Controlekits en alle andere reagentia werden gekocht bij Roche Molecular Systems Inc. Elk monster had een interne controle, β-globine, om de celtoereikendheid te controleren, en elke run omvatte een reeks HPV-Positieve en negatieve controles. DNA extractie en zuivering werden gedaan met het Cobas x 480 Instrument volgens de instructies van de fabrikant. Kort, de Conserveercyt oplossing monsters werden vortexed en geplaatst op de monsterdrager, en de reagentia, bijvoorbeeld Lysis Buffer, Wash Buffer, en Elution Buffer, werden geladen in de respectieve reagensreservoir dragers. Na monster-en reagensverlading werd de voorbereiding van DNA automatisch voltooid en werden de definitieve producten van DNA verzameld in een microwell-plaat. Vervolgens werd de microwell-plaat die DNA bevat handmatig verzegeld en geladen op de cobas Z 480-analysator, en de versterking en kruising werden automatisch voltooid.
2.3. Statistische analyse
statistische analyse werd uitgevoerd met behulp van SPSS 13.0 (IBM Corp., Armonk, NY, USA). De χ2-test werd gebruikt om categorische variabelen te beoordelen. Alle statistische tests waren tweezijdig, en waarden minder dan 0,05 werden statistisch significant geacht.
3. Resultaten
een totaal van 5650 asymptomatische vrouwen in de leeftijd van 20-65 jaar met een gemiddelde leeftijd van jaren voldeden aan de vereisten van het onderzoek en werden in dit onderzoek opgenomen. Van deze deelnemers werden 732 (12,96%) als HR-HPV-positief gedetecteerd, waaronder 127 (2,25%) met HPV16-infectie, 28 (0,50%) met HPV18, 517 (9,15%) met gepoolde 12 HPV-typen en 60 (1,06%) met meervoudige HPV-infectie (HPV16 gemengd met HPV18, HPV16 gemengd met 12 gepoolde typen, hpv18 gemengd met 12 gepoolde typen, of HPV16 gemengd met HPV18 en 12 gepoolde typen) (Tabel 1).
|
||||||||||||||||
|
meerdere HPV-infecties omvatten HPV16 gemengd met HPV18, HPV16 gemengd met 12 gepoolde typen, hpv18 gemengd met 12 gepoolde typen, of HPV16 gemengd met HPV18 en 12 gepoolde typen.
|
||||||||||||||||
volgens de leeftijd werden de deelnemers verdeeld in 4 groepen: 20-30, 31-40, 41-50 en >51 jaar. Zoals blijkt uit Tabel 2, had de 31-40-jarige groep het hoogste percentage HR-HPV-infecties van 15,32%, gevolgd door de groepen van >50 jaar, 41-50 jaar en 20-30 jaar, hoewel er geen statistische significantie werd waargenomen onder de infectiepercentages van deze groepen.
|
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
4. Discussie
In deze studie gebruikten we het Cobas 4800-systeem om HR-HPV bij 5650 asymptomatische vrouwen op te sporen en vonden we het volgende: (1) de prevalentie van de 14 genotypes van HR-hpv was 12,96%; (2) van de 732 HR-HPV-positieve vrouwen was 2,25% positief voor HPV16, 0,50% voor HPV18, 9,15% voor gepoolde 12 HPV-typen en 1,06% voor meervoudige HPV-infectie; en (3) Er was geen significant verschil in de prevalentie van HR-HPV tussen verschillende leeftijdsgroepen.
zowel de realtime HPV-test met hoog risico van Abbott Molecular Inc. (Des Plaines, IL, USA) en het Cobas 4800 HPV-testsysteem zijn klinisch gevalideerde, volledig geautomatiseerde PCR-gebaseerde assays voor de detectie van HR-HPV . Een voordeel van deze 2 Tests is dat ze gelijktijdig HPV16 en HPV18 kunnen detecteren en onderscheiden, wat belangrijk is voor de screening van baarmoederhalskanker aangezien HPV16 en HPV18 wereldwijd goed zijn voor ongeveer 70% van de baarmoederhalskanker . Weinig studies hebben deze 2 assays in het ontdekken van HR-HPV in klinische steekproeven vergeleken. Park et al. 365 cervicale uitstrijkjes werden getest en rapporteerden dat de realtime HPV-Test met hoog risico een gevoeligheid vertoonde van 78,3% met een specificiteit van 99,2%, terwijl de sensitiviteit en specificiteit van het Cobas 4800-systeem respectievelijk 91,7% en 97,0% waren . Cuzick et al. onderzocht 6000 vrouwen en toonde aan dat 16,0% HR-HPV-positief bevonden werd door het Cobas 4800-systeem, terwijl 13,4% HR-HPV-positief bevonden werd door de RealTime HPV-Test met hoog risico . Deze gegevens geven aan dat het Cobas 4800-systeem een grotere detectiegevoeligheid bezit.
verschillende klinisch gevalideerde moleculaire systemen voor de detectie van HR-HPV-DNA zijn door de Wereldgezondheidsorganisatie in 2016 opgenomen in de manual Integrating HPV Testing in Cervical Cancer Screening Programs-a Manual for Program Managers (https://www.paho.org/hq/dmdocuments/2016/manual-VPH-English—FINAL-version.pdf). Deze tests bestaan uit op hybridisatie gebaseerde assays, d.w.z. de hybride Capture 2-techniek en de carehpv-test, en PCR-gebaseerde assays, bijv. de cobas HPV-test, de Abbott RealTime High Risk HPV-test, de Cervista HPV HR-test en de BD HPV-test. Alle op PCR-gebaseerde analyses vereisen isolatie van DNA terwijl de op hybridisatie-gebaseerde analyses niet. Van alle methoden, de Cervista HPV HR-Test duurt 6-7 uur en de Abbott RealTime High Risk HPV-test duurt 6-8 uur te lopen, die mogelijk niet voldoen aan het doel van “zien en behandelen” dezelfde dag. Daarentegen vereisen alle restmethoden, waaronder het Cobas 4800-systeem, een maximale looptijd van ongeveer 5 uur, zodat patiënten in één bezoek “see and treatment” kunnen voltooien.
wereldwijd varieert de prevalentie van HR-HPV van continent tot continent . In China zijn voor het onderzoek naar de prevalentie van HR-HPV verschillende methoden gebruikt . Wu et al. gebruikt de Hybrid Capture 2 Assay (Qiagen, Hilden, Duitsland) voor de detectie van HR-HPV van 13 gepoolde typen (HPV16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, en 68) in een totaal van 4215 vrouwen in de leeftijd van 17-54 jaar uit 5 verschillende geografische gebieden van China en ontdekten dat HR-HPV prevalentie 12,4% was . Met dezelfde methode als Wu et al. , Zhao et al. ik heb die 15 gevonden.2% van de 1274 vrouwen uit een regio in Noord-China was positief voor HR-HPV . Chen et al. gebruikte een HPV Genotyping Kit (Yaneng Biotechnology Limited Corp., Shenzhen, China )voor een totaal van 961.029 HPV-tests voor vrouwen van 16 tot 83 jaar uit Zuidoost-China en toonde een HR-HPV-infectiepercentage van 16,61%. Jing et al. gebruikte een massaspectrometrische test voor HPV-DNA-testen bij 78.355 vrouwen in de leeftijd van 18 tot 75 jaar uit Zuid-China en rapporteerde een <7,3% HPV-prevalentiepercentage . Deze studies tonen een HR – HPV-infectiepercentage aan variërend van ongeveer 10-15% bij Chinese vrouwen, wat in overeenstemming is met onze bevinding. De methode die we in dit onderzoek hebben gebruikt, is echter eenvoudiger en minder omslachtig in vergelijking met de methode die we in eerdere onderzoeken hebben gebruikt .
in twee onderzoeken met de grootste steekproefomvang die in China zijn uitgevoerd, is de prevalentie van HR-HPV onder leeftijdsgroepen vergeleken. Zeng et al. retrospectief geanalyseerd 671.163 HPV-tests uitgevoerd met behulp van de Hybrid Capture 2 methode van 2007 tot 2014 en aangetoond de hoogste HR-HPV prevalentie van 36.9% in de leeftijdsgroep <20 jaar, terwijl de HR-HPV-positieve cijfers voor de leeftijdsgroepen 20-30, 30-40 en 40-50 jaar respectievelijk 24,4%, 19,7% en 19,9% waren . HR-HPV-testen met de grootste steekproefgrootte (961.029 monsters) uitgevoerd door Chen et al. toont opnieuw de hoogste prevalentie van HR-HPV in de leeftijdsgroep van <20 jaar (22,3%), terwijl de prevalentiepercentages voor de leeftijdsgroepen van 20-30, 30-40 en 40-50 jaar respectievelijk 16,8%, 15,2% en 15,9% zijn . Deze studies tonen een iets hogere prevalentie in de groep van 20-30 jaar dan in de groepen van 30-40 en 40-50 jaar, wat in tegenstelling is met onze resultaten, aangezien we de laagste HPV-prevalentie in de groep van 20-30 jaar waargenomen. Deze discrepantie kan optreden als gevolg van de volgende factoren: (1) jongere vrouwen hebben tegenwoordig meer toegang tot gezondheidsprogramma ‘s, vooral online programma’ s met behulp van elektronische apparaten, en (2) jongere vrouwen zijn meer te popelen om te leren en te accepteren nieuwe kennis over sanitaire voorzieningen en seksuele gezondheid.
HPV16 is het meest voorkomende type HR-HPV dat werd aangetroffen in cervicale monsters van vrouwen uit Noord – (Beijing en Henan, Shanxi en Xinjiang provincies), Zuidoost (Shanghai en Zhejiang provincie) en Zuid-China (Guangdong provincie) regio ‘ s, met een positief percentage variërend van 1,5 tot 3,6%, wat overeenkomt met een HPV16 infectiepercentage van 2,25% waargenomen bij onze proefpersonen die uit Zuid-China komen. HPV16 is wereldwijd verantwoordelijk voor ongeveer 50% van de baarmoederhalskanker . Hoewel de informatie over de verdeling van het HR-HPV-genotype bij patiënten met baarmoederhalskanker in China nog steeds beperkt is, zijn Li et al. rapporteerde dat 1818 van de 2309 baarmoederhalskankerpatiënten (78,7%) uit West-China positief waren voor HPV16 en ongeveer 90% van deze patiënten positief waren voor HPV16 en HPV18 . Een infectiepercentage van 53,2% voor HPV16 en HPV18 werd ook aangetoond bij 326 baarmoederhalskankerpatiënten uit de provincie Fujian in Zuidoost-China . Deze gegevens wijzen erop dat HPV16 en HPV18 de belangrijkste HPV-typen zijn die in deze regio ‘ s bij baarmoederhalskankerpatiënten worden aangetroffen. Een volledig geautomatiseerde test zoals het Cobas 4800 HPV-testsysteem dat tegelijkertijd HPV16 en HPV18 kan detecteren en differentiëren, zal vooral waardevol zijn voor POPULATIEGEBASEERDE HR-HPV-screening in regio ‘ s met een HPV16 en hpv18-infectiedominantie.
beschikbaarheid van gegevens
de gegevens die zijn gebruikt ter ondersteuning van de bevindingen van deze studie zijn op verzoek verkrijgbaar bij de overeenkomstige auteur.
belangenconflicten
de auteurs verklaren dat zij geen belangenconflicten hebben.
bijdragen van auteurs
SW, XH, QP en LZ rekruteerden de deelnemers, verzamelden monsters en voerden tests uit. SW en JZ schreven het artikel. FM onderzocht de literatuur en voerde statistische analyse uit. JZ ontwierp de studie, analyseerde de gegevens en keurde uiteindelijk het manuscript goed.