dit voorstel voegt de structuur-functie relatie van de vitamine k-afhankelijke bloedstollingseiwitten toe, met speciale aandacht voor gamma carboxyglutaminezuur. Dit programma, dat vier afzonderlijke, maar verwante projecten omvat, is geëvolueerd van eerder werk dat in de vorige periode is ontwikkeld. In Project # 1 zal de structuur-functie relatie van Factor IX en protrombine bestudeerd worden. Mutant vormen van deze eiwitten, verkregen van patiënten met erfelijke structurele en functionele afwijkingen van deze eiwitten, zullen worden gezuiverd met behulp van conformatie-specifieke antilichamen, gefragmenteerd door proteolyse, en de mutant peptiden sequenced. Het moleculaire defect in elk mutant eiwit zal worden vastgesteld en gecorreleerd aan functionele defecten. In Project # 2 zal het nieuw ontdekte KC4 bloedplaatjes membraaneiwit volledig gekarakteriseerd en gelokaliseerd worden tot specifieke subcellulaire organellen. De functie en de bindende eigenschappen van dit eiwit, alleen uitgedrukt op geactiveerde bloedplaatjes, zullen worden bepaald. Project # 3 zal de rol van Gla in protrombine definiëren. Een nieuw model van GLA, metaal en membraan interactie in protrombine met behulp van immunochemische en spectroscopische benaderingen zal worden geëvalueerd. De membraanbindingseigenschappen en de Gla-verdeling van een reeks gedeeltelijk carboxylated protrombins zouden inzicht in dit probleem moeten geven. Project # 4 is een directe klinische toepassing van onze immunochemische studies. Gebruikmakend van antilichamen specifiek voor de volledig carboxylated protrombine (NPT) en des-gamma-carboxyprotrombine (APT), zullen we een klinische studie voortzetten om deze assays te evalueren als een verbeterde methode voor het monitoren van orale anticoagulantia. Vitamine K-deficiëntie bij pasgeborenen en hun moeders zal worden bestudeerd, in de hoop eenvoudige rationele benaderingen te ontwikkelen om hemorragische ziekte van de pasgeborene te elimineren. Verder zal de bepaling van het KC4 antigeen, specifiek voor geactiveerde bloedplaatjes, worden onderzocht als een methode voor de detectie van de pretrombotische toestand. Deze basis-en klinische projecten moeten bijdragen tot het begrijpen van deze groep eiwitten, nieuwe modaliteiten bieden voor de diagnose van de pretrombotische toestand en vitamine K-dificiëntie, en verdere gegevens ontwikkelen om het gebruik van de NPT-test gedurende de protrombinetijd te rechtvaardigen, waardoor de morbiditeit/mortaliteit geassocieerd met orale anticoagulatietherapie significant wordt verminderd.