materialen en methoden
na schriftelijke geïnformeerde toestemming van patiënten, hebben we de steady-state farmacokinetiek van oraal toegediend clonidine in het plasma onderzocht bij 17 zwangere vrouwen die clonidine kregen tijdens de mid-dracht (22-26 weken zwangerschap) of late zwangerschap (34-38 weken zwangerschap). Zes van deze vrouwen namen deel aan monstercollecties van moeder-en navelstreng (arteriële en veneuze) plasmamonsters op het moment van de bevalling voor het meten van clonidineconcentraties. Zwangerschapsduur was gebaseerd op de laatste menstruatie of vroege echografie datering.
Onderwerpselectie. Deze studie werd goedgekeurd door de University of Washington Investigational Review Board. Proefpersonen kwamen in aanmerking voor deelname als ze zwanger waren, 18 jaar oud, een hematocriet ≥28% hadden en oraal clonidine kregen voor maternale hypertensie.
Doseringsschema. Orale clonidinetherapie werd niet gewijzigd voor onderzoeksdoeleinden. De dosering varieerde van 0,15 tot 0,30 mg per dag, gegeven in verdeelde doses. De duur van de farmacokinetische studie was afhankelijk van het doseringsinterval van de patiënt, dat varieerde van 6 tot 12 uur. gedurende 3 dagen vóór de studie werden orale clonidinetabletten van dezelfde productiepartij verstrekt. Proefpersonen noteerden het tijdstip van elke dosis op een studiekalender. Proefpersonen namen hun ochtend dosis clonidine binnen 30 minuten van 08: 00. De volgende doses werden binnen 30 minuten na de geplande toedieningstijden ingenomen. Op de ochtend van de farmacokinetische studie werd aan proefpersonen gevraagd om gedurende 5 uur vóór toediening van clonidine tot 1 uur na toediening te vasten, met uitzondering van heldere vloeistoffen.
Monsterneming. Seriële plasmamonsters werden verzameld op de volgende tijdstippen:: 0, 0.5, 1, 1.5, 2, 3, 4, 6, 8, 10, en 12 uur na het doseren, of afgekapt om overeen te komen met het doseringsinterval van de patiënt. Urine werd verzameld gedurende één doseringsinterval om de renale klaring van clonidine en de creatinineklaring te bepalen. Plasmamonsters, maternale en navelstreng (arterieel en veneus), werden verzameld op het moment van de bevalling voor het kwantificeren van clonidineconcentraties. Alle monsters werden bewaard bij -80°C tot monsteranalyse.
Clonidineconcentraties. De plasmaconcentraties van clonidine werden gekwantificeerd met behulp van een gevalideerde vloeistofchromatografie/massaspectrometrie (LC/MS) assay. In het kort werd 250 µl plasmamonsters gemengd met 500 pg interne standaard (clonidine-d4) in 500 µl natriumcarbonaat (0,1 M) (pH = 9,3) en 3 ml heptaan/isoamylalcohol (98,5:1,5). Normen werden bereid door het spieken van blank plasma met 0, 12.5, 25, 50, 100, 200, 250, 375, 500, en 750 pg clonidine. De monsters werden gedurende 15 minuten bij kamertemperatuur op een horizontaal schudapparaat geschud. Na centrifugering (1500g gedurende 10 min) werden de monsters ingevroren op droog ijs en de organische laag gedecanteerd naar een schone kweekbuis. Twee milliliter zwavelzuur aliquots (0,05 M) werd toegevoegd aan de organische laag en opnieuw gedurende 15 minuten geschud. Na centrifugering (1500 g gedurende 10 min) werden de monsters ingevroren op droog ijs en werd de organische laag weggegooid. Een aliquot van 200 µl van 29.Aan de waterige laag werd 29% waterig ammoniumhydroxide toegevoegd samen met 3 ml heptaan/isoamylalcohol (98,5:1,5) en gedurende 15 minuten geschud. Na centrifugering (1500g gedurende 10 min) werden de monsters ingevroren op droog ijs en de organische laag gedecanteerd naar een schone kweekbuis. De organische laag werd verdampt onder een stikstofstroom bij 40°C. Het residu werd gereconstitueerd met 75 µl mierenzuur (12 mM)/methanol (60:40), waarvan 10 µl op het LC/MS-systeem werd geïnjecteerd.
urinemonsters van 250 µl werden gemengd met 250 µl mierenzuur (12 mM) en 50 ng interne standaard (clonidine-d4). Normen werden bereid door het spieken van lege urine met 0, 1.25, 2.5, 6.25, 12.5, 18.75, en 25 ng clonidine, respectievelijk. De monsters werden vortexed, en 1 µl werd geïnjecteerd op de LC/MS
het LC / MS-systeem was een Agilent 1100 MSD (Agilent Technologies, Santa Clara, CA) bestaande uit binaire pomp, autosampler, kolomcompartiment en massaspectrometer. De kolom voor hogedrukvloeistofchromatografie was een Fenomenex Synergi polaire Rp80a, 250 mm × 2.0 mm, 4 µm (Phenomenex, Torrance, CA). De kolom werd gehandhaafd op 40°C. De mobiele fase componenten waren 12 mM mierenzuur (A) en methanol (B), met een initiële debiet van 0,25 ml/min. De eerste mobiele fase werd gedurende 1 min aangehouden en bestond uit 40% B voor plasmamonsters en 35% B voor urinemonsters. Het percentage B werd de volgende 4 minuten lineair verhoogd tot 90% voor plasma en 60% voor urine en vervolgens 1 min constant gehouden met een lineaire stroomverhoging tot 0,3 ml/min voor urine en plasma. Voor de terugkeergradiënt werd het percentage B vervolgens lineair verlaagd gedurende 1 min tot 40% (plasma) of 35% (urine), die vervolgens constant werd gehouden. Het debiet werd gedurende 1 min op 0,3 ml/min gehouden en daalde vervolgens lineair gedurende 1 min tot 0,25 ml/min en bleef vervolgens constant. De totale looptijd was 12,5 min. Voor zowel plasma-als urineanalyses werd de massaspectrometer in de positieve elektrospraymodus gebruikt en ingesteld voor selectieve ionenmonitoring van m/z 230 (clonidine) en M/z 236 (clonidine-d4) met een verblijftijd van 289 msec voor elk ion.
Farmacokinetische Parameters. De farmacokinetische parameters bij Steady-state werden bepaald met behulp van standaard nietcompartmentale technieken. De oppervlakte onder de plasma-clonidineconcentratie-tijdcurve over één doseringsinterval (AUCt) werd berekend met behulp van de lineaire trapeziumregel. Schijnbare orale klaring (CL/F) werd berekend door CL/F = dosis/AUCt. De renale klaring van Clonidine (CLrenal) werd berekend door CLrenal = Ae,τ/AUCt, waarbij Ae,τ = de hoeveelheid clonidine die gedurende één doseringsinterval onveranderd in de urine werd uitgescheiden. De creatinineklaring werd berekend met CrCl = (VolumeUrine × CreatinineUrine)/(CreatinineSerum× τ). De renale klaring van Clonidine, aangepast voor glomerulaire filtratiesnelheid (GFR), werd berekend door CLrenal, aangepast voor GFR = CLrenal – fu × CrCl, waarbij werd aangenomen dat de ongebonden fractie in plasma (fu) 0,80 was (Hulter et al., 1979). Bij al onze proefpersonen liet het relatief korte doseringsinterval geen nauwkeurige schatting van de halfwaardetijd van clonidine toe, die eerder werd gerapporteerd als 11,1 ± 3,3 en 10,8 ± 2,2 uur bij niet-zwangere gezonde volwassenen (Cunningham et al., 1994; Fujimura et al., 1994).
statistieken. Onze farmacokinetische parameters van clonidine tijdens de zwangerschap werden vergeleken met eerder gepubliceerde parameters bij gezonde, niet-zwangere vrijwilligers (Cl / F, Porchet et al., 1992; Cunningham et al., 1994) (CLrenal, Fujimura et al., 1994). Lineaire regressie werd gebruikt om de correlatie te bepalen tussen de creatinineklaring en de renale klaring van clonidine. De t-test van de ongepaarde Student werd gebruikt om de zwangere en niet-zwangere groepen te vergelijken. Een p-waarde <0,05 werd als significant beschouwd. Alle resultaten worden gerapporteerd als gemiddelde ± S. D.