discussie
volwassen C. sinensis wormen die werden geïncubeerd in bouillon media produceerden in het begin meer dan 4.000 eieren/worm/dag. Daarna daalde het aantal eieren tot iets boven de 1.000 op dag 7, en tot 300-400 op 14 dag. De tellingen werden lager dan 100 op 28 dag in de bouillon media. De tellingen waren vergelijkbaar met elkaar tussen 3 bouillon media. In tegenstelling hiermee waren de tellingen in de Locke ‘ s soultion respectievelijk 220±44 en 1023±64 op dag 1 en 3. Deze tellingen waren lager dan die in bouillon media in het begin, maar de wormen produceerden meer eieren op dag 21 en later. De wormen in bouillon media produceerden hun eieren krachtiger in de vroege fase van incubatie, terwijl die in de Locke ‘ s oplossing produceerden minder eieren dagelijks, maar voor een langere periode. De dagelijkse ei tellingen van 4.000 bij één volwassen worm waren compatibel met het geschatte gemiddelde aantal 3770 eieren van een geïnfecteerde mens .
op basis van het aantal eieren werden de totale eieren geproduceerd door een geïncubeerde volwassen worm, die na 8 weken infectie van konijnen werd teruggevonden, geschat op gemiddeld 37.274±2.988. Deze totale aantallen eieren waren vergelijkbaar, ongeacht de kweekoplossing of het medium. Het dagelijkse aantal eieren nam snel af en de baarmoeder werd leeg tijdens de kweek. Het huidige dagelijkse aantal eieren betekent dus dat de in vitro gekweekte wormen alleen de intra-uteriene eieren produceerden die in hun baarmoeder waren voorgevormd terwijl ze voor de kweek in konijnen leefden. Op basis van de gegevens wordt geschat dat een gravide C. sinensis ongeveer 37.000 eieren in zijn baarmoeder bevat en ongeveer 4.000 eieren per dag produceert. Dienovereenkomstig kunnen de eieren in de baarmoeder blijven ongeveer 10 dagen voor intra-uteriene rijping. De meeste eitjes in de baarmoeder werden volwassen gevonden en het miracidium ontwikkelde zich al, maar sommige waren vooral onvolwassen in de proximale baarmoeder. Die onrijpe eieren ontwikkelden zich niet verder tijdens de teelt. Deze bevindingen suggereren dat de gekweekte wormen niet in staat zijn om nieuwe levensvatbare eieren te formuleren en rijping van voorgevormde onvolgroeide eieren is ook onmogelijk door in vitro teelt.
eieren van C. sinensis met een grootte van 28-31×13-16 µm, met een operculum aan het conische uiteinde en een kleine, cirkelvormige knop . In dit onderzoek vertoonden de uitgeworpen eitjes een abnormale contour, omdat de worm langer overleefde. De gemiddelde lengte van het ei werd geleidelijk en significant verminderd in de Locke-oplossing (27,49±0,48 µm) en alle bouillonmedia. De lengte vermindering resulteerde in vermindering van de FMI-waarde. De FMI werd voorgesteld als een parameter voor biometrische analyse om het volume van eieren voor heterofyide en opisthorchiide flukes te benaderen . In dit onderzoek daalden de FMI-waarden op dag 60 in de Locke-oplossing en op dag 90 in bouillonmedia. De verminderde FMI-waarden suggereren vermindering van het eivolume door krimp van de lengte en degeneratie van de inhoud. De meeste eieren geproduceerd na 60 dagen van in vitro teelt waren vervormd, en hun lengte / breedte verhouding was minder dan 1,7 en de FMI-waarde was minder dan 7.000. De meeste van die eieren bleken niet levensvatbaar toen ze bevlekt waren met trypanblauw. Het kweken gedurende 60 dagen kan de maximale periode van levensvatbaarheid van de eieren zijn.
lichtmicroscopische observatie toonde accumulatie van vacuolen en donkere massa ‘ s in de eischaal aan, aangezien de kweek langer dan 60 dagen duurde. De vacuolen en donkere massa ‘ s leken misvormde vitellinecellen te zijn, zoals getoond in O. viverrini . Die materialen in de eieren suggereerden dat vitellinecellen of andere eivormende materialen waren gedegenereerd en de eieren waren afgebroken. De volwassen eitjes die het miracidium vormen kunnen lang overleven, maar geaborteerde eitjes niet. De degeneratie van Innerlijke Materialen kan misvorming en vermindering van ei volume hebben veroorzaakt. Een studie vond misvormde eieren wanneer volwassen echinostoma caproni gravid volwassenen opgeslagen in Locke ‘ s oplossing tot 4 maanden bij 4°C . Een mogelijke verklaring voor bovenstaande veranderingen kan onjuist quinon looien, die wordt geassocieerd met het proces van eischaalvorming . Langdurige in vitro teelt kan invloed hebben gehad op dit fenol-oxydase gemedieerde enzymatische proces, resulterend in een misvormd eischaaltje . Zo kan een langdurige in vitro teelt van C. sinensis de eieren en hun levensvatbaarheid vervormen.
rijpe eieren van C. sinensis bevatten een zeer onopvallende, cirkelvormige knop. O. viverrini, een nauw verwante leverbot, vertoont ook een zeer kleine tot licht ontwikkelde knobbel van de eieren . In de huidige studie, abooperculaire knop van de eischaal werd prominenter in de meeste van de eieren na 60 dagen van incubatie. De verschijning van zo ‘ n prominente aboperculaire knop was duidelijk in de meeste gedegenereerde eieren. Krejci en Fried toonden aan dat de bovenste knop ondiep of diep in de eischaal kan zijn in het geval van respectievelijk Echinostoma caproni en E. trivolvis. In dit onderzoek werd geen Infolding van de bovenste knop rond de schelp waargenomen. De prominente aboperculaire knop kan een uitbreiding van bestaande normale onopvallende knop in reactie op de veranderende fysiologie van stervende wormen. Bij elkaar genomen is het voor de staartvin moeilijk om normale levensvatbare eitjes te produceren door in-vitroteelt.
de oppervlaktestructuur van eieren, waargenomen door SEM, bleek een geschikte morfologische eigenschap te zijn om de status van de eischaal te begrijpen. Onder opisthorchiids, C. sinensis ei oppervlak is zeer gebeeldhouwd om interlaced rimpels van verschillende hoogte die het vermogen om natuurlijke aquatische vezels accumuleren helpt te maken en de mogelijkheid van contact met molluscan gastheren te verhogen , . In dit onderzoek werd een verminderde rimpel aan het oppervlak waargenomen door SEM van de geaborteerde eieren. Dit verminderde rimpel met de prominente aboperculaire knop kan een resultaat van degeneratie proces van de eischaal zijn.
deze studie had enkele beperkingen. Er waren geen directe gegevens over de levensvatbaarheid van eieren om te vergelijken met morfologische veranderingen. In vitro broedeieren kunnen nauwkeurige informatie geven over de levensvatbaarheid van eieren, maar die van eieren van C. sinensis is nog steeds niet in staat. Ook gegevens over morfologie en fysiologie van de geïncubeerde wormen waren beperkt.
concluderend, de gecultiveerde C. sinensis wormen in bouillon media passeren levensvatbare eieren gedurende 60 dagen die zijn voorgevormd in hun baarmoeder tijdens hun overleving bij konijnen. De voorgevormde onvolgroeide eieren zijn niet in staat om miracidium te ontwikkelen door in vitro kweek. Een volwassen C. sinensis adult bevat ongeveer 37.000 eieren in de baarmoeder en produceert ongeveer 4.000 eieren per dag. De vervormde eieren met een FMI-waarde van minder dan 7.000 en een lengte/breedte-verhouding van minder dan 1,7 zijn niet levensvatbaar.