Chimerism 테스트를 사용에 대한 일상적인 문서의 생착 post-transplant 따라 최대의 동종이식 받는 사람입니다. 기증자 및 수령자 세포는 이식 전에 결정되는 유전자 마커를 테스트하여 구별 할 수 있습니다.2 성 불일치 이식에서 수령인과 기증자가 성별이 다른 경우 여성 및 남성 세포의 비율은 일반적으로 성 염색체 마커의 분석에 의해 결정되며,대부분 물고기와 함께 결정됩니다.8,9 탠덤 반복의 변수 수의 평가(비인간적 인)또는 짧은 탠덤 반복(비인간적 인)성 일치 이식 키메라의 결정을위한 가장 가치있는 방법이되고있다.10 다양한 방법은 부인의 탐지를 위해 개발되었다. 골수의 형태 학적 분석은 골수 공간의 5%이상을 차지하는 잔류 질환을 식별 할 수 있으므로 조기 발견에 필요한 민감도가 부족합니다. 또한,추가 마커를 사용하지 않고 골수를 다시 채우는 정상적인 기증자 유래 조혈 모세포에서 작은 백혈병 폭발 인구를 구별하는 것은 종종 어렵습니다. 특정 검사는 특정 세포 유전 적 이상,특정 면역 표현형,특정 면역 표현형 또는 복제 성 분석에서 증폭 될 수있는 특정 성장 패턴과 같은 특정 종양 마커가있는 경우 자궁 경부를 검출 할 수 있습니다. 부인 종양에 대 한 특정 종양 마커의 부재에서 키메라 테스트 받는 파생 된 세포를 감지 하는 데 사용할 수 있습니다. 받는 사람 파생 된 세포의 탐지 재발에 대 한 위험과 항상 상관 하지 않을 수 있습니다. 혼합 키메라 증에 기여하는 수신자 세포는 악성 클론에 속하거나 정상 조혈 세포 또는 기질 세포 일 수 있습니다. 표준 동종 이식 후 처음 몇 주 동안 수신자 세포는 민감한 검사가 사용될 때 여전히 검출 될 수 있습니다.9,11 이들은 대부분 조절 요법에서 살아남은 세포입니다. 숙주 세포는 이식 후 과정 후반에도 낮은 수준(<1%)에서 검출 될 수 있습니다. 맥은 비 골수 조절 조절 후 더 자주 검출됩니다.2 따라서,종양 특이 적 마커 프로브는 아마도 성 불일치 프로브보다 우수하고 정확합니다.12 그러나,종양 특이 적 검사를 통한 부인병 검출조차도 항상 재발의 위험과 상관 관계가있는 것은 아닙니다. 긍정적 PCR 테스트 BCR/ABL 에서 보고 되었다 건강한 사람.비호 지킨 림프종 환자에서 림프구 이외의 혈통에서 전좌가 검출되었다.14 임상 적으로 유의할 수있는 임계 값이있을 수 있습니다. 다음과 같은 여러 질병에서;21),15 오래 지속되는 완화는 급성 전 골수성 백혈병과 같은 다른 경우에는 재발을 예측하는 반면,다낭성 백혈병에서 검출 된 다낭성 백혈병의 존재 하에서 관찰되었다.도 16 을 참조하면,이는 임상 적 중요성에 대한 임계 값 및 특정 적혈구 증가율 검사의 민감도와 관련이있을 수 있습니다. 잔류 악성 세포는 휴면 상태에있을 수 있습니다 17 두 번째 유전 적 변화의 부족 또는 이득 때문에 재발에 기여할 잠재력이 부족합니다. 일부 질병에서는 더 성숙한 세포로의 부분 분화가 발생할 수 있으며 이러한 세포는 증식 할 가능성이 부족할 수 있습니다. 부인 면역 감시 아래 있을 수 있습니다 또는 부인 세포 질병 재발에 대 한 무관 한 그들을 렌더링 아폽토시스 단계에 있을. 따라서 이러한 다른 설정에서 부인과의 상관 관계는 셀 불분명 하다.
결합 된 동시 형태학 및 세포 유전 학적 다모수 분석을위한 듀엣 제 2 시스템 은 검출의 관련성을 공개하는 데 도움이 될 수있는 몇 가지 장점을 제공합니다. 이 시스템은 고유 한 세포 유전 학적 또는 면역 표현형을 가진 작은 세포 하위 집합을 위해 많은 수의 세포(슬라이드 당 약 150000 개의 세포)를 자동으로 검색합니다. 작은 개체군의 탐지에 대한 감도가 증가합니다. 그러나 일련의 희석 실험에서 우리는 여성 세포 집단에서 남성 세포의 검출에 대 한 감도 1:50000 보다 높은 것으로 나타났습니다,,이 역가에 제한 된 특이성으로 인해 최고의 검출 1:10000 및 1:50000 사이 발생(부록 참조). 환자 1(마지막 분석)과 환자 2 의 골수 샘플 분석에서 볼 수 있듯이,듀엣 시스템은 일상적인 물고기에 의해 감지되지 않은 매우 작은 개체군을 감지 할 수 있습니다. 물고기의 양이 많은 정확도는 득점된 세포의 관측된 빈도 그리고 수에,따라서 세포를 더 득점해서 개량해 의지하고 있습니다.18 이렇게 많은 수의 세포를 채점하는 것은 수동 생선으로는 실용적이지 않지만 듀엣 자동 시스템은 10000 셀/분을 밝은 필드 현미경으로 스캔 할 수 있으며 2000-10000 셀/시간을 형광 현미경으로 스캔 할 수 있으므로 신속하고 효율적인 스캐닝과 증가 된 감도의 필요성을 지원합니다.
민감한 테스트는 종종 특이성 감소 및 상대적으로 높은 위양성 비율과 관련이 있습니다. 표준 물고기 거짓 긍정적 인 점수로 인해 프로브의 비특이적 하이브리드에 발생할 수 있습니다. 염색체 전좌에 대한 위양성 점수는 무작위 공간 연관성 및 광학 융합으로 인해 발생할 수 있습니다.18 듀엣 시스템은 검색된 모집단에서 세포의 형태를 확인함으로써 잠재적으로 특이성을 향상시킬 수 있습니다. 작은 인구하지만 균일 한 듀엣와 물고기 양성의 검출,형태 학적 외관은 긍정적 인 세포가 서로 다른,관련이없는 혈통 내에 흩어져있는 경우보다,진정한 긍정적 인 것이 더 가능성이 있습니다. 비특이적 키메라 테스트와 부인 검출의 특이성 또한 향상 될 수 있습니다. 위에서 논의한 바와 같이,수취인 세포는 악성 클론에 속할 수 있으며(환자 1 에서와 같이),정상 조혈 세포(환자 3,571 로 치료 한 후 환자 1)또는 비 조혈/간질 세포(예:조골 세포,환자 2)일 수 있습니다. 듀엣 제 2 시스템은 형태 학적 외관에 의해 이러한 옵션들 사이의 차별화를 허용한다. 우리는 환자 1 의 분석과 2 명의 추가 환자(데이터는 표시되지 않음)에서 폭발 또는 미성숙 세포 내에서 수신자 특성(예:반대 성별 세포 유전학)의 식별이 명백한 재발을 예측하고 몇 주에서 몇 달까지 선행한다는 것을 보여주었습니다. 환자 1 에서 별도 물고기 분석 공개 작은 1 받는 사람 인구(0.6%),그리고 작은 1/2 의 긍정적인 인구(0.8%)는 모두 물고기 분석의 거짓 긍정적인 속도 내에서 간주 될 수 있습니다. 그러나,듀엣 2010 시스템은 많은 수의 환자가 동일한 세포에 대한 두 번째 어류 시험에 의해 폭발(그리고 또한 동일한 세포에 대한 두 번째 어류 시험에 의해 양성)이었고,따라서 환자가 재발 할 운명임을 예측할 수 있음을 보여 주었다. 성숙한 조 혈 세포 내에서 작은 받는 사람 인구의 식별 재발을 예측할 수 없습니다. 3 개의 추가 환자(데이터 표시 되지 않음)에서 우리는 성숙한 형태와 작은 받는 사람 인구의 면전에서 지속적인 죄 사함을 문서화 했습니다. 더 이상 후속 대규모 연구 잔여 호스트 세포의 형태와 악성 클론에 대 한 다른 독특한 마커를 가진 환자에서 재발 위험 사이의 연결을 확인 하는 데 필요한.
이 시스템은 작동이 비교적 간단하고,대부분 자동이며,턴 아웃 시간과 비용은 표준 어류 및 회선 및 회선과 같은 키메라 및 회선 탐지를위한 다른 시스템과 비교할 수 있으며 대규모 테스트에 적합 할 수 있습니다. 시스템의 하드웨어 및 키트 이외의 대형 실험실에서 쉽게 사용할 수있는 표준 장비 만 필요합니다(부록 참조).
최근 몇 년 동안 서로 다른 세포 부분 집합 내의 키메라에 대한 연구가 관심과 인기를 얻고 있습니다.19,20 이것은 비 골수 이식 후 가장 중요합니다.이 세포 부분 집합에서 맥 특히 공격적,급속 하 게 성장 하는 악성 종양의 재발에 대 한 위험 증가와 관련 될 수 있습니다.세포 부분 집합의 2,19 키메라 테스트는 그 과정에서 일부 세포를 잃을 수있는 이론적 인 잠재력을 가진 세포의 번거롭고 시간이 많이 걸리는 정렬을 필요로합니다. 부록에서 논의 된 바와 같이 듀엣을위한 슬라이드의 제조 제 10 분석 손실 또는 세포 인구의 감소가 발생하지 않습니다. 듀엣 제 2 시스템은 림프구 및 기타 세포 하위 집합을 찾기 위해 마그네슘 염색 슬라이드를 사용하고 면역 세포 화학적 얼룩(예:항-시디 3 단클론 항체)을 사용하여 이러한 세포를 찾을 수 있습니다. 두 번째 단계에서 물고기는 성 불일치 이식에서 키메라 테스트에 적용 할 수 있습니다. 환자 3 의 사례 발표는 비 골수 이식 후 환자의 키메라 증을 따르는 데 시스템이 어떻게 사용되었는지,사이클로스포린 금단 후 완전한 키메라 증으로의 전환이 어떻게 골수 이식 및 골수 이식 반응의 발생을 예측했는지를 보여줍니다.
이 보고서는 골수 이식 후 듀엣 제 2 의 사용에 초점을 맞추고 있지만 다른 많은 의미가있을 수 있습니다. 이 시스템은 또한 독특한 세포 유전 적 또는 면역 표현형 마커를 보유하고있는 세포 및 혈통을 연구하는 데 도움이 될 수 있습니다. 그것은 다른 악성 종양에 부인 검출이 항상 재발의 예측되지 않는 이유 부인의 성격을 공개하는 데 도움이 될 수 있습니다. 특정 설정에서 작은 기증자 세포 집단 또는 마이크로 키메라가 추구 될 수 있습니다. 예를 들어,고체 장기 이식 후 검출 된 전신 림프–조혈 마이크로 키머리즘은 이식 된 장기에 대한 내성을 예측하고 면역 억제 요법을 지시 할 수있다.제대혈 동종 이식편을 오염시키는 작은 모체 개체군도 비슷한 방식으로 검출 될 수 있으며 이식 후 위험에 영향을 미칠 수 있습니다.
결론적으로,악성 종양 또는 수신자 관련 마커와 세포의 작은 집단의 형태 학적 분석을 추가 하 여 듀엣 제 3 시스템 키메라 및 부인 테스트 정확도 향상 시킬 수 있습니다 및 그들의 임상 적 중요성을 묘사. 이 시스템은 더 큰 규모의 시험에서 더 많은 연구를 할 수 있습니다.