지금까지 플라스미드 101 시리즈에서는 플라스미드 지도를 통해 항생제 내성,복제의 기원 등을 연구했습니다. 이 시점까지 우리는 플라스미드를 복제하고 세포가 그것을 유지하도록 할 수 있습니다.다음 단계는 플라스미드가 우리의 관심 유전자를 표현하게하는 것입니다. 발기인을 입력합니다.
실제로,용어”프로모터”는 프로모터(폴리메라 제 결합 부위)와 연산자(반응 요소)의 조합을 기술한다. 발기인은 대략 100 개에서 1000 의 염기쌍 길 그들의 표적 유전자의 상류 찾아냈습니다. 따라서 프로모터는 관심 유전자가 언제 발현 될지를 결정하는 데 큰 역할을합니다. 본 발명의 실시예에 따르면,본 발명의 실시예는 다음과 같다. 박테리아에서 이것은 단 하나 효소에 의해 행해집니다;그러나,진핵 생물은 다중중합효소를 가지고 있습니다. 이 특이성을 얻기 위해 진핵 세포 내막은 특정 프로모터 요소를 인식하고 결합 할 수 있습니다. 즉,플라스미드 등뼈에 존재하는 프로모터는 반드시 만들어져야 하는 레알니나의 유형과 호환되어야 한다는 것을 의미합니다. 이 게시물은 일반적으로 렌티 바이러스 및 레트로 바이러스 구조에 사용되며 향후 바이러스 벡터 부분에 대한 게시물에 대해 논의 할 것입니다.
프로모터 특이성
플라스미드에 숙주 생물에 적합한 프로모터가 있는지 확인해야 합니다. 전사 기계는 세포 유형 또는 유기체간에 다르기 때문에 프로모터는 유사하게 가변적이어야합니다. 세균성 발기인은 원핵 세포에서만 그리고 전형적으로 파생된 동일하거나 가깝게 관련 종에서서만 작동합니다. 유사하게,다양한 진핵 세포 유형(포유류,효모,식물 등)은 고유 한 촉진제를 필요로하며 크로스 오버가 거의 없습니다. 일반적으로 말하자면,박테리아에 있는 발기인은 보다 적게 다양하고 복잡하,진핵 세포에 있는 그들 보다는 몇몇 부분이 있. 다른 사람이 더 신중하게 제어하는 동안 일부 발기인은 구성 적으로 활성 및 모든 시간에 있습니다. 규제 발기인은 특정 조직 또는 개발의 특정 시간에만 행동 할 수 있습니다 또는 화학,열,또는 빛을 마음대로 켜거나 끌 수있는 방법이있을 수 있습니다. 세포에서 프로모터 자체는 다른 규제 요인에 의해 제어됩니다:강화제,경계 요소,절연체 및 소음기;그러나 전사의 일부”누출”이 발생할 수 있습니다. 이것은 일반적으로 세포에 큰 문제는 아니지만 연구 결과를 혼란스럽게하거나 관심 유전자가 독성이있는 경우 세포를 죽일 수도 있습니다. 이를 방지하기 위해 과학자들은 일반적으로 다른 프로모터 요소의 조합을 포함하는 합성 프로모터를 만들었으며 더 엄격하게 규제되는 경향이 있습니다.
진핵 생물과 원핵 생물에 대한 일반적인 프로모터
우리는 가장 일반적인 세균 및 포유류 프로모터의 일부를 나열 아래 두 개의 참조 테이블을 포함했다. 이 명부는 결코 철저한 이고지 않,그러나 너의 완전한 발기인을 쑤신것을 해볼 때 시작할 것이다 좋은 장소 이어야 한다!
진핵 촉진제
| 발기인 | 에 주로 사용 | 설명 | 표현 | 추가 고려 사항 | ||||
| 인간 사이토메갈로바이러스로부터의 강력한 포유류 발현 촉진제 | 구성적 | 인핸서 영역을 포함할 수 있다. 일부 세포 유형에서 침묵 할 수 있습니다. | ||||||
| 인간 신장 인자 1 알파로부터 강한 포유류 발현은 세포 유형 또는 생리학에 관계없이 일관된 발현을 제공하는 경향이 있다. | ||||||||
| 본 발현 촉진제(1318)는 유인원 공포 바이러스로부터 포유류 발현 촉진제(40)를 포함할 수 있다. | ||||||||
| 포스포글리세레이트 키나아제 유전자로부터의 포유류 프로모터. | 구성 적 | 광범위한 발현이지만 세포 유형에 따라 다를 수 있습니다. 메틸화 또는 탈 아세틸 화로 인해 프로모터 다운 조절에 저항하는 경향이 있습니다. | ||||||
| 본 발기인은 인간 유비퀴틴 유전자로부터의 포유류 발기인 | 구성적 | 이름에서 알 수 있듯이,이 발기인은 유비쿼터스이다. | ||||||
| 인간 베타 액틴 | 일반 발현 | 미르나 | 베타 액틴 유전자로부터 포유류 촉진제 | 구성적 | 유비쿼터스. 치킨 버전은 일반적으로 프로모터 하이브리드에 사용됩니다. | |||
| 강력한 하이브리드 포유류 프로모터 | 구성적 | 은 베타-글로빈 스플 라이스 수용체,닭 베타 액틴 프로모터 및 토끼 베타-글로빈 스플 라이스 수용체를 함유한다. | ||||||
| 테트라 사이클린 반응 요소 프로모터 | 테트라실린 또는 그 유도체로 유도 가능. | 은 전형적으로 낮은 기초 활성을 갖는 최소 프로모터 및 여러 테트라 사이클린 조작자를 함유한다. 전사는 사용 구정 트랜스 활성화에 따라 켜거나 끌 수 있습니다. | ||||||
| 특이 적 | 발기인을 활성화시키기 위해 갈 4 유전자의 존재를 필요로 한다. | |||||||
| 초파리에 대한 발현 시스템에서 통상적으로 사용되는 초파리 액틴 유전자로부터의 강력한 곤충 촉진제. | ||||||||
| 바큘로바이러스로부터의 강력한 곤충 촉진제 | 구성적 | 곤충 세포의 발현 시스템에서 통상적으로 사용된다. | ||||||
| 신경원/중추 신경계 발현에 사용되는 특이 적 | 광유전학에 대한 유전자 발현 | 카 2+/칼모둘린 의존성 단백질 키나제 2 촉진제 | . 칼슘과 칼모듈린에 의해 조절됩니다. | |||||
| 갈락토오스로 유도할 수 있고;글루코오스로 억제할 수 있는 | 은 독립적으로 또는 함께 사용될 수 있다. 4 와 80 에 의해 규제됩니다. | |||||||
| 효모전사신장인자 프로모터 | 구성적 | 포유류 에프에프 프로모터와 유사하다. | ||||||
| 효모발현 촉진제는 글리 세르 알데히드 3-포스 파지 탈수소 효소 | 구성 적 | 매우 강하며,또한 매우 강하다발현 촉진제. | ||||||
| ADH1 | 일반적인 식 | mRNA | 효모 발기인 알코올에 대한 효소 I | 의해 억압에탄올 | 전체 길이 버전은 강한 높은 표현입니다. 잘린 프로모터는 더 낮은 표현으로 구성됩니다. | |||
| 콜리플라워 모자이크 바이러스로부터의 강력한 식물 촉진제 | 구성적 | 쌍자엽에서는 활성이고,단자엽에서는 덜 활성이며,동물 세포에서는 일부 활성이 있다. | ||||||
| 유비비 | 일반 발현 | 옥수수 유비퀴틴 유전자로부터의 식물 촉진제 | 구성 | 식물에서 높은 발현을 제공한다. | ||||
| 본 발명의 실시예에 따르면,상기 실시예에 따르면,상기 실시예에 따르면,상기 실시예에 따르면,상기 실시예에 따르면,상기 실시예에 따르면,상기 실시예에 따르면,상기 실시예에 따르면,상기 실시예에 따르면,상기 실시예에 따르면,상기 실시예에 따르면,상기 실시예에 따르면,상기 실시예에 따르면,상기 실시예에 따르면,상기 실시예에 따르면,상기 실시예에 따르면,상기 실시예에 따르면,상기 실시예에 따르면,상기 실시예에 따르면,상기 실시예에 따르면,상기 실시예에 따르면,상기 실시예에 따르면,상기 실시예에 따르면, 신경 세포에서 더 나은 발현을 가질 수 있습니다. | ||||||||
| 또한,인간 유소 핵 발기인 | 구성적 | 뮤린 유소 핵 발기인 | 으로부터의 작은 유소 핵 발기인 | 으로부터의 작은 유소 핵 발기인 | 으로부터의 작은 유소 핵 발기인 | 으로부터의 작은 유소 핵 발기인 | 으로부터의 작은 유소 핵 발기인 | 으로도 사용되지만,덜 효율적일 수 있다. |
원핵 발기인
| 발기인 | 설명 | 표현식 | 추가 고려 사항에 주로 사용됨 | |||||||
| 본 발명은 본 발명은 본 발명은 본 발명은 본 발명은 본 발명은 본 발명은 본 발명은 본 발명은 본 발명은 본 발명은 본 발명은 본 발명은 본 발명은 본 발명은 본 발명은 본 발명은 본 발명은 본 발명은 본 발명은 본 발명은 본 발명은 본 발명은 본 발명은 본 발명은 본 발명은 본 발명은 본 발명은 본 발명은 본 발명은 본 발명은 본 발명은 본 발명은 본 발명은 본 발명은 본 발명은 본 발명은 본 발명은 본 발명은 본 발명은 본 발명은 본 발명은 본 발명은 | 체외 전사에 사용될 때,프로모터는 당신의 유전자에 대한 방향에 따라 감각 또는 안티센스 성적 증명서를 구동한다. | |||||||||
| 유도되지 않을 때 무시할 수 있는 기저 발현. 그것은 또한 운영자에 의해 통제됩니다. 에 의해 유도 될 수 있습니다. | 애완 동물 벡터에서 일반적으로 발견. 매우 긴밀하게 락 운영자에 의해 규제. 다양한 유도제 농도를 통해 유전자 발현을 조절하는 데 좋습니다. | |||||||||
| 체외 전사/일반 발현 | 체외 박테리오파지 | 의 촉진제는 구성적이지만,체외 중합효소를 필요로 한다. | 폴리메라 제는 높은 진행률을 갖는다. 체외 전사에 사용될 때,프로모터는 당신의 유전자에 대한 방향에 따라 센스 또는 안티센스 성적 증명서를 구동합니다. | |||||||
| 아라바드 | 일반 발현 | 아라비노스 대사성 오페론의 촉진제 | 글루코스의 존재 하에서 아라비노스와 억압 된 카타 볼라이트 억압에 의해 유도 가능하거나 항 유도제 푸코스의 경쟁적 결합에 의해 약하다. 일반적으로 발견 피바드 벡터. 급속한 규칙 및 낮은 기초 표정을 위해 좋은;그러나,가지가지 유도제 농도를 통해 유전자 발현을 조절하기를 위해 적절하지 않음. | |||||||
| 유전자 발현의 높은 수준 | 대장균 트립토판 오페론 | 억제 가능한 | 높은 수준의 세포 트립토판으로 꺼집니다. | |||||||
| 본 발명의 실시예는,본 발명의 실시예에 따라,본 발명의 실시예에 따라,본 발명의 실시예에 따라,본 발명의 실시예에 따라,본 발명의 실시예에 따라,본 발명의 실시예에 따라,본 발명의 실시예에 따라,본 발명의 실시예에 따라,본 발명의 실시예에 따라,본 발명의 실시예에 따라,본 발명의 실시예에 따라,본 발명의 실시예에 따라,본 발명의 실시예에 따라,본 발명의 실시예에 따른 실시예에 따라,본 발명의 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따라, 유당 또는 유당에 의해 유발 될 수 있습니다. | 다소 약한 발현 새는 프로모터. 라씨크 돌연변이는 억압 10 배의 발현을 증가,따라서 락 프로모터의 조절을 강화. 다양한 유도제 농도를 통해 유전자 발현을 조절하는 데 좋습니다. | |||||||||
| 본 발명의 실시예에 따르면,본 발명의 실시예에 따르면,본 발명의 실시예에 따르면,본 발명의 실시예에 따르면,본 발명의 실시예에 따르면,본 발명의 실시예에 따르면,본 발명의 실시예에 따르면,본 발명의 실시예에 따르면,본 발명의 실시예에 따르면,본 발명의 실시예에 따르면,본 발명의 실시예에 따르면,본 발명의 실시예에 따르면,본 발명의 실시예에 따르면,본 발명의 실시예에 따르면, 매우 엄격한 규제. 다양한 유도제 농도를 통해 유전자 발현을 조절하는 데 좋습니다. 혼자 락보다 일반적으로 더 나은 표현. | ||||||||||
| 박테리오파지 람다로부터의 높은 수준의 유전자 발현 | 프로모터는 온도 조절 가능 | 종종 온도에 민감한 억제기와 짝을 이룰 수 있다. | ||||||||
| 시험관내 전사/일반 발현 | 시험관내 전사/일반 발현 | 시험관내 전사/일반 발현 | 시험관내 전사/일반 발현 | 발현 | 체외 전사/일반 발현 | 체외 전사 | 체외 전사/일반 발현 | 체외 전사 | 체외 전사/일반 발현 |
이 목록은 시작하기에 좋은 장소이지만 위의 표는 과학자들이 사용할 수있는 조직 또는 개발 관련 프로모터를 탐구하지 않습니다. 플라스미드는 종종 치료 용도로 사용되며,이러한 경우 여기 국립 보건원 연구원이 설명한 바와 같이 올바른 조직 특이 적 프로모터를 식별하는 것이 중요합니다.
참고:에이.