이 세포는 적혈구,기생충 또는 박테리아가 될 수 있습니다. 또한 샘플 유형,다운스트림 분석 등에 따라 선택할 수 있는 다양한 유전자 추출 방법이 있습니다. 많은 과학자들이 건조한 혈액 반점으로 시작하므로 그러한 샘플에서 유전자를 추출하는 방법이 특히 중요합니다. 일반적으로 왓먼 크로마토그래피 3 밀리미터 여과지에 혈액을 채취하여 가공하기 전에 일정 시간(~4 시간)동안 건조시켜 제조합니다. 이 바이오 샘플링 방법은 수십 년 동안 사용되어 왔습니다.
비티 첼렉스 100 레진 3 을 사용하여 이러한 샘플로부터 디에이티 유전자를 분리하는 유용한 방법이 아래에 설명된다.
1 단계:적혈구 용해
- 건조한 혈액 반점을 잘라내어 구멍 펀처를 사용하여 미세 원심 분리기 튜브에 넣습니다. 특히 여러 샘플에서 작업 할 때 튜브에 라벨을 붙이는 것을 잊지 마십시오. 품질 관리 목적을 위해,또한 긍정적인 통제 혈액 반점을 포함하십시오.
- 혈액 반점을 포함하는 미세 원심 분리기 튜브에 0.5%사포닌 1 밀리리터를 첨가하십시오. 적어도 4 시간 동안,또는 더 나은 아직,밤새도록. 이 단계에서,적혈구 막에 콜레스테롤과 사포닌 복합체는 막 따라서 용혈에 기공의 형성을 선도.4 사포닌은 적혈구에서 기생충(예:말라리아 기생충)을 제거하는 데 일반적으로 사용되는 용해 시약입니다.
- 4,000 분당 회전수에서 몇 초 동안 회전하여 내부 뚜껑에서 방울을 제거하고 진공 조립 기계의 파스퇴르 피펫에 부착 된 비 장벽 피펫 팁을 사용하여 튜브에서 사포닌을 흡입합니다. 플라스틱 파스퇴르 피펫도 사용할 수 있습니다. 미세 원심 분리기 튜브에 자리를 남겨주세요.
2 단계:세척
- 1 밀리리터의 인산염 완충 식염수를 미세 원심분리기에 넣고,닫고,소용돌이치고,4 0 에서 20-30 분 동안 배양한다. 밤새 배양하는 것은 해를 끼치 지 않을 것입니다. 이 단계는 사포닌이 튜브에서 제거되도록합니다.
- 4,000 분당 회전수에서 몇 초 동안 회전시킨 다음 사포닌을 제거한 것과 같은 방법으로 피피피스를 제거합니다. 미세 원심 분리기 튜브에 자리를 남겨주세요.2 단계:첼렉스 수지를 이용한 유전자 추출 원리:첼렉스 수지는 분해효소 및 하류 분석을 저해할 수 있는 잠재적 오염물로부터 유전자분해를 방지함으로써 작용한다. 일반적으로,첼렉스 수지는 이러한 오염물질을 포획하여 용액에 유전자를 남기게 된다. 첼렉스 수지는 다음과 같은 양이온을 체포합니다.5,6
- 피펫 및 6.7%첼렉스 수지 용액 150 개를 스폿을 포함하는 미세 원심 분리기 튜브에 첨가하십시오. 튜브를 닫으십시오. 중요한 알림:6.7%첼렉스 용액을 준비 할 때는 드나 제,뉴 클레아 제(또는 해를 입히고 분해 할 수있는 물)가없는 물을 사용하십시오.
- 열 블록/셰이커를 사용하여 95 0 도에서 10 분간 배양한다. 2 분마다 튜브를 두 번 열어 압력을 해제 한 다음 몇 초 동안 흔들어주는 것이 중요합니다. 이 솔루션으로 유전자 출시.
4 단계:최종 추출물에서 첼렉스 수지 비드를 피하세요.
- 10 분 동안 4,000 분당 회전수에서 0.6 밀리람베르트 미세 원심분리기를 원심분리한다. 두 번째 스핀의 아이디어는 최종 추출물에 이월 할 수있는 나머지 첼렉스 구슬을 제거하는 것입니다. 이것이 왜 중요한가? 두 가지 주요 이유:1)첼렉 스는 마그네슘 이온에 결합합니다. 형광이 결과를 시각화하는 방법 인 경우,이 거짓 긍정을 만들 수 있습니다.
- 약 100 개의 피펫을 피펫하고 최종 추출물을 새로운 미세 원심 분리기로 옮깁니다. 냉장고에 있는 상표 그리고 상점.
- 오염물질이 없는 깨끗한 환경에서 작업하기
- 뉴클레아제가 없는 피펫 팁 사용
- 모든 시료를 장갑으로 다루십시오.
-
결론
첼렉스 레진 7 은 다양한 분자 분석 응용 분야에서 사용하기 위해 간단하고 신속한 유전자 추출 방법을 제공합니다. 이 방법은 값 비싼 장비를 필요로하지 않으며 다른 방법에 대해 테스트 할 때 신뢰할 수 있습니다.
- 일반 의료(2010). 카드 추출은 매우 간단합니다. 신청 노트 28-9822-22 금주 모임. 2018 년 11 월 15 일-2018 년 12 월 15 일
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존 아테 게카 글이미지 제공:퀸 돔 브로우 스키