선명도 이미징 적용 과정은 사후 조직 샘플로 시작됩니다. 다음 일련의 화학 처리는 거의 본래 단백질 및 핵산의 전부가 그 자리에 남겨두는 그러나,견본의 지질 내용이 제거되는 투명도를 달성하기 위하여 적용되어야 합니다. 이 목적은 조직을 투명하게 만들고 구성 기능 부품(주로 단백질 및 핵산)에 대한 상세한 현미경 조사를 수행하는 것입니다. 이를 위해 기존의 단백질 구조는 지질 성분을 제거하는 동안 그것을 보존하는 투명한 비계에 배치되어야합니다. 이’스캐 폴딩’은 아크릴 아미드와 같은 하이드로 겔 단량체로 구성됩니다. 포름 알데히드,파라 포름 알데히드 또는 글루 타르 알데히드와 같은 분자의 첨가는 보존 될 단백질 및 핵산에 대한 스캐 폴딩의 부착을 용이하게 할 수 있으며,세포 성분과 아크릴 아미드 사이의 실제 결합을 확립하기 위해 열을 첨가하는 것이 필요합니다.
이 단계가 완료되면,표적 조직 세포의 단백질 및 핵산 성분은 제자리에 단단히 고정되고,지질 성분은 분리된 상태로 유지된다. 지질은 세제에 있는 수동적인 유포의 1-2 주 이상 그 때 제거되거나,일에 단지 시간에 전기 이동 방법에 의해 가속됩니다. 그들이 통과할 때,세제의 친지방질 재산은 그것을 길을 따라 부닥친 어떤 지질든지 줍고 소비하는 가능하게 합니다. 친지방질성 염료는 디이 제거되기 때문에,그러나 이웃 단백질에 고정될 수 있는 명확성 양립한 친지방질성 염료가 있습니다. 아크릴 아미드 겔과 관련된 분자의 화학적 특성 덕분에이 절차의 영향을받지 않습니다.
초기 논문에서 보고된 바와 같이,이 과정에서 조직이 팽창하지만,필요에 따라 굴절률 매칭 용액에서 배양의 마지막 단계를 통해 초기 치수로 복원될 수 있다.
이 과정에서 샘플은 이미징용으로 완전히 준비되었습니다. 영상에 대한 대조는 내인성 형광 분자,핵산(유전자 또는 아르 자형)라벨,또는 면역 염색,특정 표적 물질에 특이 적으로 결합하는 항체가 사용됩니다. 더하여,이 항체는 마지막 화상 진찰 결과에 열쇠인 형광성 꼬리표로 레테르를 붙입니다. 표준 공 초점,2 광자,또는 빛 시트 이미징 방법은 모든 다음 따라서 최종 매우 상세한 및 3 차원 이미지 선명도 생산 결과 단백질 현지화의 규모에 방출 형광 검출에 적합 합니다.
샘플이 영상에 대해 면역화된 후,항체를 제거하고 새로운 항체를 재적용할 수 있으며,따라서 샘플을 여러 번 영상화하고 여러 단백질 유형을 표적으로 할 수 있다.