에서 진단 및 최소 잔류 질환 측정을위한 10 색 유동 세포 계측 패널 배경:만성 림프 구성 백혈병은 경쇄 제한으로 구성된 고전적인 면역 표현형을 가지고 있습니다. 이것은 정상적인 세포 및 기타 림프 증식 성 질환과 구별됩니다. 이러한 항원을 표적으로하는 항체는 유로 플로우 컨소시엄이 개발 한 두 개의 8 색 유동 세포 계측 패널에 포함되어 있습니다. 1 개의 10 색깔 패널로 이 항체를 결합하는 것은 비용 효과적일 것입니다. 10,000 개의 백혈구(10-4 개)당 1 개 이상의 잔류 백혈병 세포를 갖는 것으로 정의됩니다. 현재,유럽 연구 이니셔티브에 의해 확립 된 측정을위한 국제 표준화 된 접근 방식은 항체를 표적으로하는 패널을 사용합니다. 그러나 이러한 항체-플루오로 크롬 조합은 유로 플로우 진단 패널에 의해 사용되는 것과 다릅니다. 따라서 부인 테스트를 구현 고려 실험실 3 다른 패널(2 진단 및 1 부인)에 대 한 항 체를 구입 해야 합니다. 10 색 튜브에서 0.01%의 낮은 수준으로 검출할 수 있습니다. 이 연구의 목표는이 새로운 패널을 구현 하는 잠재적인 비용 절감을 확인 하 고 부인을 감지 하기에 충분히 민감한 경우 확인 했다.
방법:우리는 2018 년 4 월부터 2019 년 3 월까지 수정 된 10 색 엘티 튜브로 분석 한 샘플 수를 계산하여 표준 2 튜브 유로 플로우 방법에 비해이 접근법을 사용하여 저장 한 항체 분취량의 수를 배제했습니다. 우리는 또한 우리의 결과의 일반화를 증가시키기 위해 액체 항체를 사용하여 위에서 언급 한 패널의 버전을 만들었습니다. 우리는 24 명의 다른 환자들로부터 백혈병 세포의 다양한 농도에서 60 개의 백혈병 샘플을 생산하기 위해 샘플을 사용했습니다. 샘플을 0.1%,0.01%및 0.001%의 대략적인 농도로 정상 백혈구의 현탁액으로 급상승시켜 제조 하였다. 각 샘플은 세 개의 패널로 분류되고 염색되었습니다. 이 소프트웨어를 사용하여 데이터를 분석 할 수 있습니다. 키 마커의 차동 식에 따라 클 리 클 리 셀 확인 하 고 클 리 클 리 셀/총 백혈구의 수로 계산 했다. MRD 양성으로 정의되었≥0.01%. 패널 간의 합의는 개성-알트만 플롯 방법을 사용하여 평가되었습니다. 우리는 또한 부인 양성을 식별하는 패널 사이의 비율 계약을 계산.
결과:1 년에 474 개의 샘플에 대해 수행되었으며,이 중 220 개 샘플 중 123 개 샘플(56%)이 고전적인 표현형을 가졌으며 추가 테스트의 필요성을 없앴습니다. 이것은 476 의 항체 분취액의 순수한 저축 귀착되었습니다. 에 대한 MRD 평가,차등의 식 CD5 및 CD20 가장 중요한 요인 중에서 구별 CLL 에서 정상적인 B 세포를 사용하 mLST1 및 mLST2. 우리는 하나의 확인 된 경우 비정형 면역 표 형(희미 한 5,밝은 20)를 사용 하 여 게이트 하기 어려운 입증 했다. 2015 년 11 월 1 일,2015 년 11 월 1 일,2015 년 11 월 1 일,2015 년 11 월 1 일 수량화 한도를 초과하는 값의 경우,합의의 95%한도는 에릭 대 밀리터리대 비교의 경우 0.3369 로그이고 에릭 대 밀리터리대 비교의 경우 0.3485 로그입니다. 따라서,패널 사이 부인 수준에서 변동 했다 2 배 우리가 부인 지 수 규모로 측정 임상적으로 허용 가능한 고려 시간의 대부분 보다. ERIC 패널 및 mLST1 했 88.3%계약에서 구별 MRD-긍정적인 비 MRD-부정적인 샘플입니다. 에릭 패널과 엠에스에스트 2 사이의 합의는 93.3%였다.
결론:수정 된 10 색 패널을 사용하여 진단 및 측정에 모두 가능합니다. 장점은 더 많은 세포 계측 실험실에 부인 액세스 할 수 있도록,항체 및 잠재적 인 비용 절감에 익숙 증가이다. 정형 CLL 경우 없이 일반적인 CD5 양성과 미 CD20 하기가 매우 어려운 문을 사용하여 LST 패널이 있습니다. 이 경우 에릭 패널은 악성 림프구와 정상 림프구 사이의 분리를 여전히 제공 할 수 있으므로 분명히 우수합니다.
기타:이 프로젝트에 사용 된 상당한 양의 항체를 무료로 제공했습니다.. 베버:테바 캐나다 혁신: 고용. 2018 년 11 월 1 일-2018 년 11 월 1 일 존슨:룬드벡:고용,명예,법인의 이사회 또는 자문위원회 멤버십,기타:여행비,선물 및 기타,연구비;머크:컨설팅,명예,로슈:컨설팅,고용,명예,법인의 이사회 또는 자문위원회 멤버십,기타:여행비,선물 및 기타,연구비;애브비:컨설팅,고용,명예,법인의 이사회 또는 자문위원회 멤버십,연구비;비디 생명과학:기타: 이 프로젝트에 사용되는 항체의 상당 부분을 무료로 제공합니다. 2015 년 11 월 1 일-2015 년 11 월 1 일-2015 년 11 월 1 일