Abstract
we hebben een tweestaps klooncultuursysteem gebruikt om ondubbelzinnig aan te tonen dat individuele primitieve lymfohemopoëtische voorlopercellen de capaciteit hebben voor differentiatie langs de myeloïde of de B-lymfoïde lijn. Sterk verrijkte muriene beenmergcellen werden individueel in cultuur geplateerd door micromanipulatie in aanwezigheid van door pokeweed mitogeen gestimuleerde miltcel geconditioneerd medium, erytropoëtine, staalfactor (SF) en interleukine (IL) 7. Vijfenveertig procent van de enkele cellen vormden primaire kolonies die meerdere hemopoietische lijnen uitdrukken. Toen aliquots uit individuele kolonies opnieuw werden geplakt in secundaire methylcellulosecultuur die SF en IL-7 bevat, gaf 41% van de primaire kolonies aanleiding tot lymfocytenkolonies. Cellen van de lymfocytenkolonies waren blast-achtig en B220+, Sig -, Mac-1 -, Gr-1 -, Ly-1 -, L3T4 -, Ly-2-en CD3 -. Dertig tot 70% van de cellen waren Thy-1+. mu-chain mRNA werd ontdekt in de meeste cellen door in situ hybridisatie met een antisense RNA-sonde. Wanneer lymfocytenkolonies afgeleid van een enkele cel werden samengevoegd en individueel in scid-muizen werden geïnjecteerd, was donor-type IgM meetbaar in het serum van muizen en milten bevatten donor-Type B-cellen. Vervolgens voerden we een eerste screening uit van groeifactoren om groeifactoren te identificeren die pokeweed mitogengestimuleerde milt cel geconditioneerd medium in de primaire cultuur zouden kunnen vervangen. Combinaties van twee factoren waaronder SF plus IL-6, IL-11 of granulocyt-koloniestimulerende factor waren allemaal effectief in de primaire cultuur voor het behoud van het B-lymfoïde potentieel. Interessant, IL-3 kon noch synergetisch met SF vervangen noch handelen om het lymfoïde potentieel van de primaire culturen te ondersteunen. Onze waarnemingen tonen aan dat veel primitieve stamvaders die eerder werden verondersteld myeloïde-geëngageerd ook B-lymfoïde potentieel bezitten. Dit kweeksysteem zou waardevol moeten blijken voor de opheldering van de mechanismen die vroege stadia van lymfohemopoiese regelen.