anyagok és módszerek
miután megkaptuk a betegek írásos tájékoztatáson alapuló beleegyezését, megvizsgáltuk az orálisan alkalmazott klonidin egyensúlyi farmakokinetikáját 17 terhes nő plazmájában, akik klonidint kaptak a terhesség közepén (22-26 hetes terhesség) vagy a késői terhességben (34-38 hetes terhesség). Ezek közül hat nő vett részt anyai és köldökzsinór (artériás és vénás) plazmamintagyűjtésben a szülés idején a klonidin koncentrációjának mérésére. A terhességi kor az utolsó menstruáción vagy a korai ultrahangon alapult randevú.
Tárgy Kiválasztása. Ezt a tanulmányt a Washingtoni Egyetem vizsgálati felülvizsgálati testülete hagyta jóvá. Az alanyok jogosultak voltak a részvételre, ha terhesek voltak, 18 éves kor, hematokritja 28% volt, orális klonidint kaptak anyai hipertónia miatt.
Adagolási Rend. Az orális klonidin terápiát nem változtatták meg vizsgálati célokra. Az adagok napi 0,15-0,30 mg között mozogtak, osztott adagokban adva. A farmakokinetikai vizsgálat időtartama az alany adagolási intervallumától függött, amely 6-12 h. a vizsgálat előtt 3 napig orális klonidin tablettákat biztosítottak ugyanabból a gyártási tételből. Az alanyok feljegyezték az egyes adagok idejét egy vizsgálati naptárban. Az alanyok reggel bevették klonidin adag 30 percen belül 8: 00 AM. A következő adagokat a tervezett beadási időtől számított 30 percen belül vették be. A farmakokinetikai vizsgálat reggelén az alanyokat arra kérték, hogy a tiszta folyadékok kivételével böjtöljenek 5 órán át a klonidin beadása előtt az adagolás után 1 óráig.
Mintagyűjtemény. Soros plazmamintákat gyűjtöttünk a következő időpontokban: 0, 0.5, 1, 1.5, 2, 3, 4, 6, 8, 10, 12 órával az adagolás után, vagy csonkolva, hogy megfeleljen az alany adagolási intervallumának. A klonidin renalis clearance és kreatinin clearance meghatározása céljából a vizeletet egy adagolási intervallum alatt gyűjtötték össze. A beadáskor az anyai és a köldökzsinór (artériás és vénás) plazmamintáit gyűjtötték a klonidin koncentrációk mennyiségi meghatározása céljából. Az összes mintát -80cc-n tároltuk a minta elemzéséig.
Klonidin Koncentrációk. A plazma klonidin-koncentrációkat validált folyadékkromatográfiás/tömegspektrometriás (LC/MS) vizsgálattal határoztuk meg. Röviden:250 db plazmamintát 500 pg belső standarddal (klonidin-d4) 500 db 0,1 M nátrium-karbonáttal (pH = 9,3) és 3 ml heptán/izoamil-alkohollal (98,5: 1,5) kevertek össze. A standardokat úgy állítottuk elő, hogy a vak plazmát a 0, 12.5, 25, 50, 100, 200, 250, 375, 500, és 750 pg klonidin. A mintákat vízszintes rázógépen ráztuk 15 percig szobahőmérsékleten. Centrifugálás után (1500 g 10 percig) a mintákat szárazjégen fagyasztottuk, majd a szerves réteget egy tiszta tenyészcsőbe dekantáltuk. Két milliliter kénsav alikvotot (0,05 M) adtunk a szerves réteghez, majd ismét 15 percig ráztuk. Centrifugálás után (1500 g 10 percig) a mintákat szárazjégre fagyasztottuk, majd a szerves réteget eldobtuk. Egy 200-6L alikvot 29.29% – os vizes ammónium-hidroxidot adtunk a vizes réteghez 3 ml heptán/izoamil-alkohollal (98,5:1,5) együtt, majd 15 percig ráztuk. Centrifugálás után (1500 g 10 percig) a mintákat szárazjégen fagyasztottuk, majd a szerves réteget egy tiszta tenyészcsőbe dekantáltuk. A szerves réteget nitrogénáram alatt elpárologtattuk 40 6 / C hőmérsékleten. a maradékot 75 ml hangyasavval (12 mM)/metanollal (60:40) oldottuk fel, amelyből 10 ml-t injektáltunk az LC/MS rendszerbe.
250 6L vizeletmintát 250 ml hangyasavval (12 mM) és 50 ng belső standarddal (klonidin-d4) kevertek össze. A szabványokat úgy állítottuk elő, hogy az üres vizeletet a 0, 1.25, 2.5, 6.25, 12.5, 18.75, illetve 25 ng klonidint.
az LC / MS rendszer egy Agilent 1100 MSD (Agilent Technologies, Santa Clara, CA) volt, amely bináris szivattyúból, automatikus mintavevőből, oszloprekeszből és tömegspektrométerből állt. A nagy teljesítményű folyadékkromatográfiás oszlop egy Fenomenex Synergi poláris Rp80a volt, 250 mm 6.0 mm, 4 db (Fenomenex, Torrance, CA). Az oszlopot 40 db C-on tartottuk. a Mozgófázis komponensei 12 mM hangyasav (A) és metanol (B) voltak, kezdeti áramlási sebességük 0,25 ml/perc volt. A kezdeti mozgófázist 1 percig fenntartottuk, és a plazmaminták esetében 40% B, a vizeletminták esetében 35% B volt. A B százalékos arányát lineárisan növeltük a következő 4 perc alatt a plazma 90% – ára és a vizelet 60% – ára, majd 1 percig állandó szinten tartottuk, lineáris áramlási növekedéssel 0,3 ml/percre a vizelet és a plazma esetében. A visszatérési gradiens esetében a B százalékos arányát ezután lineárisan csökkentettük 1 perc alatt 40% – ra (plazma) vagy 35% – ra (vizelet), amelyet ezután állandó szinten tartottunk. Az áramlási sebességet 0,3 ml/perc-en tartottuk 1 percig, majd lineárisan csökkentettük 1 perc alatt 0,25 ml/percre, majd állandó szinten tartottuk. A teljes futási idő 12,5 perc volt. Mind a plazma, mind a vizeletvizsgálatok esetében a tömegspektrométert pozitív elektrospray üzemmódban működtették, és az m/z 230 (klonidin) és az m/z 236 (klonidin-d4) szelektív ionmonitorozására állították be, minden egyes ionra 289 msec várakozási idővel.
Farmakokinetikai Paraméterek. A Steady-state farmakokinetikai paramétereket standard, nem összehasonlító módszerekkel határoztuk meg. A plazma klonidin koncentráció-idő görbe alatti területet egy adagolási intervallumon (AUCt) a lineáris trapéz szabály alkalmazásával számítottuk ki. A látszólagos orális clearance-t (CL/F) a CL/F = dózis/AUCt érték alapján számították ki. A klonidin renális clearance-ét (CLrenal) a CLrenal = ae,AUCt, ahol Ae,az egy adagolási intervallum alatt változatlan formában a vizelettel ürülő klonidin mennyisége alapján számították ki. A kreatinin-clearance-t a CrCl = (Volumeurin 6 kreatinin-vizelet)/(kreatinin-szérum 6) alapján számították ki. A glomeruláris filtrációs rátához (GFR) igazított klonidin renális clearance – t a GFR = CLrenal-fu-ra korrigált CLrenal-nal számították ki, ahol a plazmában nem kötött frakciót (fu) 0,80-nak feltételezték (Hulter et al., 1979). Minden alanyunkban a viszonylag rövid adagolási intervallum nem tette lehetővé a klonidin felezési idejének pontos becslését, amelyről korábban beszámoltak 11,1 3,3 és 10,8 2,2 óra nem terhes egészséges felnőtteknél (Cunningham et al., 1994; Fujimura et al., 1994).
statisztika. A terhesség klonidin farmakokinetikai paramétereit összehasonlítottuk a korábban közzétett paraméterekkel egészséges, nem terhes önkéntesekben (CL / F, Porchet et al., 1992; Cunningham et al., 1994) (CLrenal, Fujimura et al., 1994). Lineáris regressziót alkalmaztak a kreatinin clearance és a klonidin renalis clearance közötti korreláció meghatározására. Az Unpaired Student t tesztjét a terhes és a nem terhes csoportok összehasonlítására használták. A <0,05 p értéket szignifikánsnak tekintették. Az összes eredményt átlagként kell megadni, S. D. S.