a vizsgálat
a tömeges gyógyszeradagolás hatásának felmérése érdekében ivermektin és albendazol alkalmazásával a nyirokfilariasis eltávolítására az STH prevalenciájára és intenzitására, székletmintákat gyűjtöttünk 3 év alatt 2 különböző területen Foya kerületben (Lofa megye) Libéria északnyugati részén és Harper kerületben (Maryland) megye) Libéria délkeleti részén (10). Alanyonként egyetlen székletmintát vizsgáltunk mikroszkóppal (nagyítás 600) Kato-Katz duplikált kenetekkel (41 mg sablon). A véletlenszerűen kiválasztott példányok alikvotjait FTA kártyákon (GE Healthcare, Little Chalfont, Egyesült Királyság) vagy Rnalaterben (ThermoFisher, Waltham, MA, USA) tartósítottuk, majd a Washington University School of Medicine-be (St. Louis, MO, USA) szállítottuk a qPCR elemzésére. Két tapasztalt mikroszkóp (L. G., A. T. Momolu) mindkét vizsgálati területen Kato-Katz kenettel vizsgálta a mintákat. Az STH kimutatása qPCR-rel, kivontuk a DNS-t a 100 mg-os székletből, és Pilotte et al. (5) A Quantstudio 6 Flex Thermocycler (Applied Biosystems, Carlsbad, CA, USA) és TaqMan Fast Advanced Mastermix (Applied Biosystems). A Schistosoma mansoni DNS kimutatására a következő primereket és szondákat használtuk: előre primer 5′-TGTGGGAGTCTTTGGTTGTTGTT-3′, fordított primer 5′-CAACATGACTGGGAACAGGA-3′, szonda 5′-AGGTTCAGGTGG/ZEN/GTGTGTTACGAA-31abkfq-3′.
353 székletmintát teszteltünk a Foya körzetből Kato-Katz kenettel; 31 (8,8%) pozitív volt az A-Ra. lumbricoides tojás, 231 (65,4%) horogféreg tojás, 27 (7,6%) T. trichiura–szerű tojás, 276 (78,2%) S. mansoni tojás. A Harper district 225 mintáját Kato-Katz kenettel teszteltük; 163 (72,4%) pozitív volt az A. lumbricoides tojásokra, 65 (28,9%) a horogféreg tojásokra és 51 (22,7%) a T. trichiura tojásokra (1.táblázat). A Kato-Katz és a qPCR tesztek eredményei jó egyezést mutattak a Harperből származó mintákban (80,5% -91,6%), de általában a qPCR érzékenysége nagyobb volt. Eredményeink összhangban voltak a korábban más területekről származó mintákkal jelentett eredményekkel (3,11). A Foya-ból származó minták 2 diagnosztikai tesztje közötti egyetértés 77,3% és 92,9% között mozgott, de a qPCR érzékenysége váratlanul alacsony volt, ez a megállapítás különösen igaz az Ascaris és a Trichuris fertőzésre (1.táblázat). Míg a Kato-Katz által az Ascaris szempontjából pozitív, a qPCR által negatív minták tojásszáma alacsony volt, a Kato-Katz által a Trichuris szempontjából pozitív, a qPCR által negatív minták száma magasabb volt; 7 Minta >1000 hordó alakú tojást/g székletet tartalmazott (2.táblázat). Megismételtük a DNS extrakciót és a qPCR-t, és alternatív qPCR-t is alkalmaztunk a T-re. trichiura (3), de ezek a tesztek nem javították a mikroszkópia és a qPCR eredmények közötti egyezést.
1. táblázat
| terület és faj | szám. pozitív * | Kato-Katz kenet érzékenység, % | qPCR érzékenység, % | McNemar p érték |
| Foya körzet, n = 353 | ||||
| Ascaris lumbricoides | 34 | 91.2 | 17.6 | <0.0001 |
| Hookworm† | 247 | 93.5 | 83.4 | <0.0001 |
| Trichuris trichiura | 27 | 100 | 7.4 | <0.0001 |
| Schistosoma mansoni | 307 | 89.9 | 84.0 | 0.0573 |
| Harper körzet, n = 225 | ||||
| A. lumbricoides | 180 | 90.6 | 98.9 | 0.0013 |
| Hookworm† | 99 | 65.7 | 89.9 | 0.0005 |
| T. trichiura | 86 | 59.3 | 94.2 | 0.0001 |
*minták, amelyek mindkét módszerrel pozitívak voltak.
6. napon a horogféreg Necator americanus volt. Ancylostoma duodenale-t nem észleltek.
2. táblázat
| demográfia | mikroszkópia, epg | qPCR, ciklusküszöb | |||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| év | beteg száma. | életkor, y/nem | falu | Tt | Al | Hk | Sm | Tt | Al | Na | SM | ||
| 2014 | P320529 | 45 / F | Jallahun | 576 | 0 | 360 | 24 | Neg | Neg | 31.7 | 30.5 | ||
| P320683 | 35 / F | Kpombu | 12 | 0 | 0 | 0 | Neg | Neg | Neg | 28.4 | |||
| P320695 | 16 / M | Kpombu | 24 | 0 | 0 | 72 | Negatív | Negatív | Negatív | 23.8 | |||
| P320620 | 15 / M | Foya-Dundu | 12 | 120 | 0 | 288 | Neg | Neg | 32.2 | 23.5 | |||
| P320746 | 9 / F | Bandenin | 24 | 0 | 0 | 0 | Negatív | Negatív | Negatív | 26.51 | |||
| P320452 | 7 / F | Felaloe | 12 | 0 | 0 | 120 | Neg | Neg | Neg | 23.9 | |||
| P320596 | 6 / F | Foya-Dundu | 12 | 0 | 0 | 90 | Negatív | Negatív | Negatív | 27.6 | |||
| P320656 | 6 / F | Kpombu | 120 | 0 | 0 | 504 | Negatív | Negatív | Negatív | 21.3 | |||
| 2016 | P331772 | 36 / M | Kpormbu | 3,048 | 0 | 12 | 24 | Neg | Neg | Neg | Neg | ||
| P331921 | 35 / M | Felaloe | 60 | 0 | 0 | 12 | Neg | Neg | Neg | Neg | |||
| P331783 | 34 / F | Kpormbu | 420 | 0 | 0 | 0 | Neg | Neg | Neg | Neg | |||
| P330724 | 26 / M | Keyabendu | 4,224 | 0 | 0 | 456 | Neg | Neg | Neg | 30.4 | |||
| P331791 | 6 / F | Kpormbu | 12 | 0 | 156 | 12 | Neg | Neg | 33.1 | 33.4 | |||
| P331962 | 6 / F | Bandenin | 12 | 0 | 0 | 168 | Neg | Neg | Neg | 29.6 | |||
| P331983 | 6 / F | Bandenin | 36 | 0 | 0 | 5,304 | Negatív | Negatív | Negatív | 28.1 | |||
| 2017 | P341287 | 61 / M | Mendikorma | 1,464 | 0 | 0 | 0 | Neg | Neg | Neg | 33.1 | ||
| P341282 | 56 / M | Mendikorma | 540 | 0 | 216 | 0 | Neg | Neg | 28.3 | Neg | |||
| P341284 | 50/M | Mendikorma | 60 | 0 | 0 | 132 | Neg | Neg | Neg | Neg | |||
| P342148 | 45/M | Keyabendu | 1,368 | 0 | 0 | 192 | Neg | Neg | 34.5 | Negatív | |||
| P340246 | 39 / M | Kamatahun | 120 | 0 | 0 | 216 | Neg | Neg | Neg | 30.0 | |||
| P340307 | 19 / F | Bambusz | 2,028 | 0 | 0 | 1,188 | Negatív | Negatív | Negatív | 24.1 | |||
| P340133 | 12 / M | Fokolahun | 1,020 | 16,392 | 0 | 0 | 25.3 | 16.7 | Neg | Neg | |||
| P340183 | 9 / F | Kpelloe Ndama | 72 | 0 | 0 | 0 | Negatív | Negatív | Negatív | 36.0 | |||
| P341308 | 9 / F | Mendikorma | 36 | 0 | 108 | 0 | Neg | Neg | Neg | 28.5 | |||
| P341326 | 9 / M | Mendikorma | 456 | 0 | 0 | 0 | Neg | Neg | 26.5 | 30.4 | |||
| P341327 | 6 / M | Lie | 2,076 | 0 | 0 | 0 | Neg | Neg | Neg | Neg | |||
| P340147 | 5 / M | Fokolahun | 48 | 0 | 0 | 0 | 30.94 | 26.93 | Neg | Neg | |||
*T. a trichiura fertőzést a qPCR csak 2 betegnél igazolta, de 25 székletben Capillaria tojás volt. Al, Ascaris lumbricoides; epg, tojás / gramm széklet; Hk, horogféreg; Na, Necator americanus; Neg, negatív; Sm, Schistosoma mansoni; Tt, T. trichiura.
annak további ellenőrzésére, hogy a Kato-Katz–pozitív, qPCR-negatív székletminták tartalmaztak-e T. trichiura tojásokat, mikroszkóppal megvizsgáltuk az Rnalaterben megőrzött székletminták közvetlen kenetét (nagyítás 600 és 400) (ábra). A qPCR által pozitív minták tojást tartalmaztak (6 mérve)tipikus T. trichiura morfológiával; ezek a tojások volt egy átlagos (±SD) hossza 52 µm (±2.4 µm), valamint a szélessége 25,5 µm (±1.3 µm). Ezzel szemben a qPCR-negatív mintákat tartalmazott tojás (31 mérve) egy átlagos (±SD) hossza 51.8 µm (±1.5 µm), illetve szélessége 32.7 µm (±2.1 µm). A qPCR-negatív minták kevésbé hangsúlyos dugókkal és vastag, csíkos héjjal rendelkeztek, amelyek a Capillaria hepatica (syn. Calodium hepaticum) és néhány más Capillaria faj (Trichuridae). A C. philippinensis vagy a C. az emberi székletmintákban korábban megfigyelt aerophila kisebb vagy nagyobb volt, mint a Lofában található Capillaria tojások (12,13). Mivel ezeknek a tojásoknak a poláris dugói kevésbé kiemelkedőek, mint a T. trichiuráé, és mivel alakjuk néha oválisabb vagy kerekebb, kis teljesítményű mikroszkóppal összetéveszthetők az A. lumbricoides tojásokkal is, különösen, ha csak néhány tojást észleltek (ábra).
A Libériai Lofa megyében élő személyek székletmintáiban talált Helminttojások. A, B) A Trichuris trichiura petéi a Kato-Katz kenet és a qPCR által a T. trichiura szempontjából pozitív mintákban. C-F) Capillaria spp. a Kato-Katz által a T. trichiura szempontjából pozitív mintákban kenet, de a qPCR által a T. trichiura esetében negatív. G) Capillaria spp. a mintában pozitív Ascari lumbricoides által Kato-Katz kenet, de negatív A. lumbricoides által qPCR. H) Az A. lumbricoides tojása a mintában pozitív az A. lumbricoides számára Kato-Katz kenet és qPCR segítségével. A skála sávok 20 db-ot jeleznek. QPCR, kvantitatív PCR.
a Capillaridae alcsalád tagjai kissé eltérő életciklusú állati paraziták, amelyek többsége nem fertőzi meg az embereket. Pszeudoinfekciók C. hepatica előfordulnak; a székletben található tojások azért vannak jelen, mert fertőzött állati májban fogyasztották őket. A C. hepatica tényleges fertőzései azonban nem vezetnek a tojások székletbe jutásához (9). Más fajok, mint például a C. philippinensis, valódi fertőzéseket (és autoinfekciót) okoznak a székletben található tojásokkal; a fertőzés a nyers hal fogyasztásához kapcsolódik. Libériából nem jelentettek emberi kapillariasist, és csak elszigetelt esetjelentéseket tettek közzé a szubszaharai Afrikából (7-9). DNS-szekvenálást végeztünk, hogy jobban jellemezzük a Foya-ban található Capillaria fajokat. A kt875351.1 (5′-CCCTAGTTGCGACTTTAAACGA-3′) és a Capillaria 18s1r (5′- TCCACCAACTAAGAACGGCC-3′) primerek segítségével a T. trichiura qPCR-negatív mintákból a 18S rDNS 288 bp-s részét fel tudtuk erősíteni és szekvenálni, amelyek csak a morfológiailag Capillaria spp-ként azonosított tojásokat tartalmazták. (GenBank csatlakozási szám. MG859285). A DNS-fragmentum 100% – ban azonos volt a C. hepatica ortológusaival (csatlakozási szám. MF287972. 1), Aonchotheca putorii (C. putorii) (csatlakozási szám. LC052356.2) és Pearsonema plica (C. plica) (csatlakozási szám. MF621034. 1), Capillaria féregfajok, amelyek életciklusa és gazdaszervezete változó, de csak 95% – ban azonosak a T. trichiura ortológusával.
a Libéria északnyugati részén az emberekben talált Capillaria Fajok életciklusa és orvosi jelentősége még tisztázásra vár. Tanulmányunkban egyes alanyok magas Capillaria tojásterhelést mutattak, amelyek valódi fertőzésre utalhatnak, nem pedig pszeudoinfekcióra. Pszeudoinfekcióban szenvedő személyeknél azonban átmeneti magas petesejtszámról számoltak be (7). Míg a bokorhús Foya-ban gyakori, a nyers vagy alul főtt hal fogyasztása, amely a C. philippinesis átviteléhez szükséges, ritka.