Vita
a táptalajban inkubált felnőtt C. sinensis férgek kezdetben több mint 4000 tojást/férget hoztak létre naponta. Ezt követően a tojásszám alig 1000 fölé csökkent a 7.napon, és 300-400-ra a 14. napon. A számok 100-nál alacsonyabbak lettek az 28 napon a táptalajban. A számlálások hasonlóak voltak egymáshoz 3 táptalaj között. Ezzel ellentétben a Locke lelkének számlálása 220-44, illetve 1023-64 volt az 1., illetve a 3. napon. Ezek a számok alacsonyabbak voltak, mint az elején a táptalajban, de a férgek több tojást termeltek a 21.napon és később. A táptalajban lévő férgek az inkubáció korai szakaszában erőteljesebben termelték petéiket, míg a Locke-oldatban lévők kevesebb tojást termeltek naponta, de hosszabb ideig. A napi 4000 tojásszám egy felnőtt féregnél összeegyeztethető volt a fertőzött ember 3770 tojásának becsült átlagos számával .
a tojásszám alapján egy inkubált felnőtt féreg által termelt összes tojást, amelyet nyulakból nyertek ki 8 hetes fertőzés után, átlagosan 37 274 2988-ra becsülték. Ezek az összes tojásszám hasonló volt, függetlenül a termesztési oldattól vagy a közegtől. A napi tojásszám gyorsan csökkent, és a méh kiürült a termesztés során. Ezért a jelenlegi napi tojásszám azt jelentette, hogy az in vitro termesztett férgek csak azokat az intrauterin petesejteket termelték, amelyeket a méhükben előformáltak, miközben nyulakban éltek a termesztés előtt. Az adatok alapján úgy becsülik, hogy egy gravid C. sinensis körülbelül 37 000 tojást tartalmaz a méhében, és naponta körülbelül 4000 tojást termel. Ennek megfelelően a petesejtek körülbelül 10 napig maradhatnak a méhben az intrauterin érés érdekében. A méhben lévő tojások nagy részét érettnek találták, és a miracidium már kialakult, de néhányuk éretlen volt, főleg a proximális méhben. Ezek az éretlen tojások nem fejlődtek tovább a termesztés során. Ezek az eredmények arra utalnak, hogy a tenyésztett férgek nem képesek új életképes petesejteket létrehozni, és az előformált éretlen petesejtek érése in vitro tenyésztéssel is lehetetlen.
a C. sinensis tojásainak mérete 28-31 6-13-16 km között mozog, kúpos végén operculum és kis abopercularis gomb található . Jelen tanulmányban a kiutasított tojások rendellenes kontúrt mutattak, mivel a féreg hosszabb ideig fennmaradt. A tojás átlagos hossza fokozatosan és jelentősen csökkent a Locke-oldatban (27,49 6,48 6m) és az összes táptalajban. A hosszcsökkentés az FMI értékének csökkenését eredményezte. Az FMI-t a biometrikus elemzés paramétereként javasolták a heterophyid és opisthorchiid flukes tojások mennyiségének közelítésére . A jelen vizsgálatban az FMI-értékek a Locke-oldatban a 60.napon, a tápközegben pedig a 90. napon csökkentek. A csökkent FMI értékek azt sugallják, hogy a tojás mennyisége csökken a hossz zsugorodásával és a tartalom degenerációjával. A 60 napos in vitro tenyésztés után termelt tojások többsége deformálódott, hosszúság / szélesség arányuk kevesebb volt, mint 1,7, az FMI érték pedig kevesebb, mint 7000 volt. A tojások többségét életképtelennek találták, ha tripánkékkel festették. A tojás életképességének maximális időtartama 60 nap lehet.
a fénymikroszkópos megfigyelés során vakuolok és sötét tömegek halmozódtak fel a tojáshéjban, mivel a termesztés 60 napnál tovább tartott. A vakuolák és a sötét tömegek deformált vitellin sejteknek tűntek, amint azt O. viverrini is mutatja . Ezek az anyagok a tojásokban arra utaltak, hogy a vitellin sejtek vagy más tojásképző anyagok degenerálódtak, és a tojások abortívak voltak. A miracidiumot alkotó érett tojások sokáig fennmaradhatnak, de az abortáltak nem. A belső anyagok degenerációja deformitást és a petesejt mennyiségének csökkenését okozhatta. Egy tanulmány deformált petesejteket talált, amikor érett Echinostoma caproni gravid felnőtteket Locke oldatában tároltak 4 hónap 4 KB C . A fenti változások egyik lehetséges magyarázata lehet a nem megfelelő kinon barnulás, amely a tojáshéj képződésének folyamatához kapcsolódik . A hosszú távú in vitro tenyésztés befolyásolhatta ezt a fenol-oxidáz által közvetített enzimatikus folyamatot, amely deformált tojáshéjat eredményezett . Így a C. sinensis hosszan tartó in vitro tenyésztése deformálhatja a tojásokat, valamint életképességüket.
a C. sinensis Érett tojásai nagyon észrevétlen abopercularis gombot tartalmaznak. O. viverrini, egy szorosan kapcsolódó májpehely, a tojások nagyon kicsi vagy kissé fejlett abopercularis gombját is mutatja . Jelen tanulmányban a tojáshéj abopercularis gombja a tojások többségében kiemelkedőbbé vált 60 napos inkubáció után. Egy ilyen kiemelkedő abopercularis gomb megjelenése nyilvánvaló volt a legtöbb degenerált tojásban. Krejci és Fried kimutatták, hogy az echinostoma caproni és az E. trivolvis esetében az abopercularis gomb sekély vagy mélyen be van ágyazva a tojáshéjba. Ebben a tanulmányban nem figyelték meg a héjat körülvevő abopercularis gomb összecsukását. A kiemelkedő abopercularis gomb a létező normál észrevétlen Gomb kiterjesztése lehet, válaszul a haldokló férgek változó fiziológiájára. Összességében a flukes számára nehéz in vitro tenyésztéssel normális életképes petesejteket előállítani.
a tojások felszíni szerkezete, amelyet a SEM megfigyelt, megfelelő morfológiai jellemzőnek tűnt a tojáshéj állapotának megértéséhez. Között opisthorchiids, C. sinensis tojás felülete rendkívül faragott, hogy átlapolt ráncok különböző magasságú, amely segít a képesség, hogy felhalmozódnak a természetes vízi rostok, valamint növeli annak lehetőségét, érintkezés puhatestű gazdaszervezetek , . A jelen tanulmányban csökkent felületi ráncokat figyeltek meg a megszakított tojások SEM-je. Ez a csökkent ráncosodás a kiemelkedő abopercularis gombbal a tojáshéj degeneráló folyamatának eredménye lehet.
jelen tanulmánynak volt néhány korlátja. Nem voltak közvetlen adatok a tojás életképességéről a morfológiai változásokkal összehasonlítva. A tojások In vitro keltetése pontos információt adhat a tojás életképességéről, de a C. sinensis tojások még mindig nem képesek. Az inkubált férgek morfológiájára és fiziológiájára vonatkozó adatok is korlátozottak voltak.
összefoglalva, a termesztett C. a táptalajban lévő sinensis férgek életképes tojásokat adnak át 60 napig, amelyek a méhükben előformálódnak a nyulak túlélése során. Az előformált éretlen tojások in vitro tenyésztéssel nem képesek miracidium kialakulására. Egy érett C. sinensis felnőtt körülbelül 37 000 tojást tartalmaz a méhben, és naponta körülbelül 4000 tojást termel. A 7000-nél kisebb FMI-értékű deformált tojások és az 1,7-nél kisebb hosszúság/szélesség arány nem életképesek.