a Her-2/neu státusz kimutatható a génpéldányok számának elemzésével Déli blot, PCR vagy FISH segítségével, vagy az expresszált fehérje mennyiségét nyugati módszerrel lehet megállapítani blot, enzimhez kapcsolt immunszorbens vizsgálat vagy IHC. Jelenleg a két legszélesebb körben alkalmazott módszer az IHC és a FISH, mivel képesek a HER-2/neu értékelésére formalinba rögzített paraffinba ágyazott archív szövetekben.
a legtöbb Her-2/neu vizsgálatot az IHC végezte, amely kimutatja a HER-2/neu fehérje termék túlzott expresszióját a tumorsejtek sejtmembránján. Ez a tanulmány a CB11 monoklonális antitestet alkalmazta, amely a standardizált poliklonális Herceptesthez hasonlóan a Her2/neu molekula intracitoplazmatikus doménje ellen irányul .
az IHC széles körben elérhető és könnyen elvégezhető ésszerű költségek mellett. Ezt a félkvantitatív eljárást azonban technikai leletek, a különböző antitestek közötti érzékenységi különbségek és szubjektív értelmezés támasztja alá, ami a patológusok közötti megfigyelők közötti változékonyságot eredményezi . Tanulmányok azt mutatják, a túlérzékenység az amerikai Food and Drug Administration által jóváhagyott HercepTest, a hamis pozitív arány olyan magas, mint 50%. Thomson és munkatársai arra a következtetésre jutottak, hogy azokban az esetekben, amikor az IHC folt intenzitása 1+ vagy 2+, az interobserver megállapodás gyenge, és a prediktív érték nem kielégítő klinikai használatra; további vizsgálatokat javasoltak, lehetőleg halakkal .
a FISH meglehetősen objektív és kvantitatív eljárás a HER-2/neu gén amplifikáció kimutatására a tumorsejtek magjain. Ennek az eljárásnak a hátrányai a meredek költségek (az IHC 10-szerese), a kifinomultság, a fluoreszcens mikroszkóp szükségessége, Az ideiglenes jel (speciális kamerát igényel), valamint a tumor hisztomorfológiájának kimutatására és értékelésére való képtelenség.
az IHC által kimutatott HER-2 / neu túlexpresszió erősen korrelál a FISH által kimutatott gén amplifikációval (akár 98% – os konkordancia) . Az emlőkarcinómák 3-15%-A azonban mérsékelt Her-2/neu membránfestést mutat az amplifikáció bizonyítéka nélkül. Leggyakrabban nagyon érzékeny, nem specifikus festést (hamis pozitív) jelentenek, ritkán pedig fokozott mRNS transzkripciót amplifikáció hiányában, vagy olyan gén amplifikációt, amely az in situ hibridizációs módszerek kimutatási szintje alatt van .
Kakar és kollégái arra a következtetésre jutottak, hogy az IHC megfelelő a kezdeti Her-2/neu értékeléshez, de azoknak a betegeknek, akiknek a daganata kevesebb, mint 3+ értéket ért el (különösen azok, akik 2+-ként értelmezték), a FISH számára előnyös lenne a Her-2/neu státusz pontosabb felmérése, valamint a pontatlan prognosztizálás és a nem megfelelő kezelés elkerülése .
a CISH a HER-2/neu észlelésének legújabb előrelépése. Az in situ hibridizációhoz kifejlesztett robusztus, egyedi szekvenciájú szondát használ, és ígéretes gyakorlati alternatívát jelent a halak számára. Tanner és kollégái által végzett első CISH-tanulmány után hét másik jelentés kedvezően validálta a CISH eredményeit . A CISH és a FISH közötti összhang 85% – tól 100% – ig terjedt . Mindezek a jelentések rámutattak a CISH előnyeire a halakkal szemben: rendes mikroszkópot igényel; a módszer kevésbé nehézkes és gazdaságosabb; a jelintenzitás állandó; és a patológusok ismerik az IHC jeleket, és képesek korrelálni az eredményeket a mögöttes tumor hisztomorfológiával. A CISH lehetővé teszi a megfigyelők számára az invazív ductalis carcinoma területeinek kiválasztását, elkerülve az intraductalis carcinoma gócait, amelyeknél a Her-2 / neu más klinikai jelentőséggel bír. A CISH egy specifikus, érzékeny és könnyen alkalmazható módszer a Her-2/neu gén amplifikáció kimutatására, és az IHC-vel együtt alkalmazható emlőkarcinómában szenvedő betegek értékelésére . Ross és munkatársai nemrégiben áttekintették a Her-2/neu tesztelés jelenlegi állapotát, és arra a következtetésre jutottak, hogy a CISH egy kényelmesebb génalapú technika, amely a szárnyakban vár .
ebben a tanulmányban a 3+ IHC és a CISH-amplifikált esetek közötti konkordancia 100% volt (40 a 40-ből), ami azt jelzi, hogy az összes gén amplifikált eset túlexpresszálja a Her-2/neu fehérjét. Ezzel szemben a 2+ IHC és CISH-felerősített esetről szóló megállapodás csak 45% volt, ami alacsonyabb, mint korábban jelentették (93%) . A 13,75% (22 A 160) IHC-pozitív/CISH nem amplifikált tumorok ebben a vizsgálatban, amelyek mindegyike 2+ IHC pontszámok, magasabb , mint a 6% hamis pozitív eredmény Zhao és munkatársai, bár hasonló a 17%-os eredmény (IHC CB11 versus FISH) kapott Tubbs és munkatársai . Nyilvánvalóan azt találjuk, hogy a 2+ IHC pontszám egyértelmű a CISH-hoz képest. Ennek a részhalmaznak előnyös lehet a további CISH reflex tesztelés. Az összes negatív IHC-eset CISH nem amplifikált volt, az összes negatív eredmény teljes egyetértését mutatva. A 86,25% – os összhang az IHC (CB11 antitest alkalmazásával) és a CISH között ebben a vizsgálatban alacsonyabb, mint a korábbi jelentések (94-96%) . Egyetértünk Sapinóval és kollégáinkkal abban, hogy a gén amplifikációs analízis minden 0, 1+ és 3+ IHC esetben elkerülhető, mivel az eredmények az IHC-ből kiszámíthatóak és teljesen összhangban vannak a CISH-val . A cish hasznossága tehát a Her-2/neu módosításának további tesztelése az IHC kétértelmű eseteiben, amely továbbra is az elsődleges szűrési módszer. A kombinált IHC-CISH algoritmus gazdaságos és átfogó Her-2/neu adatokat szolgáltat a klinikusok számára a kezelési lehetőségek feltérképezéséhez.
az alacsony amplifikált CISH kategória (6-10 jel) volt a legnehezebb értelmezni, ami a génmásolás pontos felsorolását igényelte. A szignál klaszterezés, valószínűleg a homogénen festődő régiók intrakromoszomális amplifikációjának eredménye, azonnal nyilvánvaló volt az erősen amplifikált esetekben, és könnyen értékelhető volt .
a 17 .kromoszóma aneuploidia vizsgálatát nem végezték el nem amplifikált és alacsony amplifikált CISH teszteken, mert a legújabb vizsgálatok azt mutatták, hogy az elemzés költségesebbé és időigényesebbé teszi a releváns adatok hozzáadása nélkül, eltekintve az ajánlott nukleáris amplikonok számától és a hibridizációs reakció belső kontrolljának egy másik formájától. Ezen túlmenően, bár a gyártó (Zymed) azt javasolta, hogy a 17.kromoszóma aneuploidiát minden gén-amplifikált esetben teszteljék , egyetértünk Vera-Romannal és kollégáival, akik helyesen rámutattak arra, hogy mivel a legtöbb poliszómiás eredmény a három-öt jel szürke területére esik, a küszöbérték beállítása a határérték jelpontok hat vagy annál magasabb értékre (mint ebben a tanulmányban) gyakorlatilag kiküszöböli a poliszómiás változót.
ez a tanulmány nem figyelt meg IHC-negatív CISH-amplifikált daganatokat. Ez valószínűleg azzal magyarázható, hogy ez egy intézményes vizsgálat volt, amely valószínűleg egyenletesen rögzített és feldolgozott tumorszövet paraffin blokkokkal, valamint egységes antigén-visszakeresési technikával rendelkezik, mindkettő megkönnyíti a kiváló minőségű IHC-t. Zhao és munkatársai alkalmanként IHC-negatív CISH-amplifikált esetekről számoltak be, és úgy vélték, hogy ezek egy kis, meghatározatlan százalékot képviselnek, amely túlzott expresszió nélkül felerősítette a Her-2/neu-t . Ugyanez a vizsgálat és más FISH-vizsgálatok ritka 3 + IHC tumorokat is észleltek, amelyek nem amplifikáltak (hamis pozitívak) . Az IHC–CISH eltérések okai hasonlóak az IHC és a FISH közötti eltérésekhez, amint azt e jelentés már korábban megállapította.
a korábbi CISH vizsgálatok által kínált tesztelési kudarc és hamis negativitás okai a következők voltak: tumor hiánya a szekcióban, képtelenség a magas háttér miatt, alacsony jelintenzitás az ismételt kísérletek ellenére, a belső kontrollból származó jelek hiánya és az alkohol–formalin–ecetsav fixáló használata . Azt is megjegyezte, hogy a hő előkezelés és emésztés pepszin a legkritikusabb eljárások optimalizált CISH teljesítmény, és hogy a sikeres aránya CISH alacsony volt, amikor 20 éves szöveti blokkokat használtunk .
Sauer és munkatársai korrelálták az IHC és a FISH eredményeit a klinikai prognózissal. Megjegyezték, hogy az IHC/FISH-pozitív esetek, valamint a csak FISH-pozitív esetek ugyanolyan prognózissal rendelkeztek a túlélés tekintetében, míg az IHC-pozitív csak az esetek prognózisa hasonló volt az IHC / FISH-negatív daganatokéhoz. Ezzel szemben az IHC-negatív/FISH-pozitív esetek túlélési valószínűsége hasonló volt az IHC/FISH-pozitív esetekéhez. Ugyanezek a szerzők arra a következtetésre jutottak, hogy ha csak IHC-t használnának elsődleges eszközként, az IHC-negatív/FISH-pozitív esetek kimaradnának; ezeknek a nőknek nem lenne előnye a trasztuzumabnak, és túlélésüket hátrányosan befolyásolná. Ezzel szemben úgy tűnik, hogy az IHC-pozitív csak daganatok egy jobb prognosztikai csoporthoz tartoznak, és a kimutatásuk elmulasztása valószínűleg nem lenne negatív hatással a túlélésre .
mivel a klinikai eredményvizsgálatok még nem foglalkoztak az alacsony amplifikált és nagy amplifikált CISH eredmények hasznosságával, különösen az alacsony amplifikált csoport bizonytalan jelentőségével, ezek a kategóriák még mindig változóban vannak. Ez a korlátozás ellenére még mindig van érték az ilyen felerősített csoportok külön-külön történő jelentésében, amíg a jövőben bármilyen klinikai asszociációt meg nem szereznek. Az alacsony amplifikált és nagy amplifikált CISH-eredmények jelentésének Intraobserver és interobserver változékonysága nem szerepelt ebben a vizsgálatban, bár a ciish-vizsgálatokat értelmező patológus következetesen alkalmazta a gyártók által meghatározott kritériumokat.
a premenopauzás nők mellrákja eltérő biológiai profillal rendelkezik, mint az idősebb betegeknél, túlnyomórészt kedvezőtlen prognosztikai paraméterekkel, beleértve a 3 .fokozatú daganatok magasabb gyakoriságát és a Her2/neu gyakoribb túlzott expresszióját. A fiatal kor a kedvezőtlen prognosztikai profilok helyettesítőjeként szolgál . Ez a tanulmány nem tudta megállapítani az önkényesen 50 éves vagy annál magasabb menopauzális állapot és a Her2/neu változás közötti összefüggést.
a Her2/neu amplifikáció közvetlenül korrelált az emlőrák súlyossági fokával és szövettani típusával . Sapino és kollégái azt javasolták, hogy a daganatos fokozat és a szövettani típus alapján a patológusnak képesnek kell lennie arra, hogy jelezze az onkológusnak, hogy mely emlőrák igényel Her2/neu elemzést . Bár a négy jól differenciált daganat egyike sem mutatott Her2/neu amplifikációt vagy túlzott expressziót, ebben a tanulmányban nem volt szignifikáns összefüggés a Her2/neu státusz és szövettani fokozat szempontjából; ezért továbbra is feliratkozunk a Her2 / neu tesztelésére az összes újonnan diagnosztizált emlőrákon. Összességében az emlőrákos betegek életkor szerinti megoszlása és a tumor szövettani besorolása nem jósolta meg szignifikánsan az IHC és a Cish Her2/neu státuszt.