az Állami Állatorvosi diagnosztikai laboratórium, a Texas A& M állatorvosi orvosi diagnosztikai laboratórium, TVMDL, évente több százezer mintát tesztel. Azonban, minden év szarvas vadászidényének szélén, a tesztszámok megugrani kezdenek, mivel növekszik a krónikus sorvadásos betegség, a CWD, a tesztelés iránti igény.
mi a krónikus sorvadásos betegség?
a CWD egy progresszív neurológiai betegség, amely több szarvasfajt érint. A CWD fogékony fajok a fehérfarkú szarvas, feketefarkú szarvas, öszvér szarvas, jávorszarvas, gímszarvas, rénszarvas, sika és jávorszarvas. Amióta 1967-ben először jelentették, 25 államban és három kanadai tartományban dokumentálták fogságban és szabadon élő szarvasfajokban egyaránt.
a CWD az utóbbi években némi figyelmet kapott, mivel a “zombi szarvas betegség” jelentései felszínre kerültek és elterjedtek a különböző médiumokban. Bár fülbemászó, a “zombi szarvasbetegség” valójában téves elnevezés, mivel a CWD-ben szenvedő állatok nem haltak meg. Miután érintett, két-négy évbe telhet, amíg a fertőzött állat klinikai tüneteket mutat, amelyek utánozhatják a” zombi-szerű ” viselkedést a betegség előrehaladtával. Az érintett állatok olyan jeleket mutatnak, mint a fogyás, a nyáladzás, a botlás és a stupor. A klinikai tünetek ezen kombinációja egy olyan állatban csúcsosodik ki, amely úgy tűnik, hogy “elpazarol”, megalkotva a betegség tényleges nevét.
a szarvasmarhák szivacsos agyvelőbántalmához, a BSE-hez hasonlóan szarvasmarhákban és a surlókórban juhokban és kecskékben a CWD egy természetesen előforduló fertőző szivacsos agyvelőbántalom, TSE vagy prionbetegség. A prionok abnormális fehérjék, amelyeket rendkívül nehéz elpusztítani. A fertőzés után a prionok kezdetben befolyásolják az állat nyirokcsomóit, majd a testen keresztül terjedve végül megfertőzik az agyat.
2012-ben a CWD-t először Texasban fedezték fel szabadon terjedő öszvérszarvasokban a Hueco-hegységben. Azóta a betegséget továbbra is kimutatták Nyugat-Texasban és a Panhandle régióban az öszvérszarvasokban, a fehérfarkú szarvasokban és a jávorszarvasokban.
bár Texas CWD története rövid volt más államokhoz képest, a diagnosztikai tesztek továbbra is növekednek, mivel az állami ügynökségek megpróbálják ellenőrizni a betegséget. Texasban a TVMDL az egyetlen laboratórium, amelyet jóváhagytak a CWD tesztelésére.
CWD benyújtók: kik ők?
tavaly a TVMDL körülbelül 26 500 CWD tesztet végzett. A tesztek teljes számából csaknem felét októbertől decemberig végezték el. Ez a növekedés a CWD beadványok egybeesik szarvas vadászidény Texasban.
a vadászoknak be kell tartaniuk bizonyos irányelveket a szarvasszezonban a Texas Parks and Wildlife Department, TPWD, a CWD terjedésének enyhítésére irányuló programok miatt. Például, ha egy szarvast CWD-karantén alá helyezett zónában ölnek meg, mintákat kell gyűjteni és CWD-vizsgálatra benyújtani. A mintavételt vadász ellenőrző állomásokon, szarvasfeldolgozó létesítményekben és néha taxidermistákban végzik.
a CWD tesztkérelmeket olyan állami ügynökségek nyújtják be, mint a Tpwd és a Texas Animal Health Commission, A tahc és a szarvas tenyésztők. A TVMDL szolgáltatást nyújt ezeknek az ügynökségeknek és a szarvasiparnak, hogy segítse a CWD-hez hasonló betegségek terjedésének nyomon követésére irányuló folyamatos erőfeszítéseket.
a betegség kimutatása
a laboratóriumban a tvmdl két módszer egyikével teszteli a mintákat: enzimhez kapcsolt immunszorbens vizsgálat, ELISA vagy immunhisztokémia, IHC. Mindkét vizsgálati módszer megköveteli a szarvas nyirokcsomóiból vagy az obex-ből származó szöveteket.
ELISA tesztelés
a legkeresettebb módszer az ELISA teszt. Ez a módszer az érzékenyebb lehetőség, mert friss szöveteket használ, szemben a tartósítószerben rögzített szövetekkel. A teljes folyamat, kivéve a minta előkészítési idejét, általában körülbelül három órát vesz igénybe. Amint egy minta megérkezik a tvmdl szerológiai szakaszába, megkezdi a három fázis közül az elsőt: minta előkészítése.
a minta előkészítése során a nyirokcsomó és/vagy obex szövetek pontos térfogatát és anatómiai elhelyezkedését kivágják és egyedi csiszolócsövekbe helyezik. A csöveket egy homogenizáló eszközre helyezzük, amely cseppfolyósítja a szöveteket, és előkészíti őket a tesztelés második szakaszára, a tisztításra.
a tisztítási fázis félig automatizált. A folyadékkezelő eszköz a minta feldolgozásával kezdődik. Ez a folyamat a proteináz K felhasználásával megemészti a normál prionokat, és betegséget okozó prionokat hagy maga után, ha vannak ilyenek. Ezután a tisztítási folyamat folyékony végtermékét centrifugáljuk, hogy pelletet képezzünk. A pelletet másodszor kezeljük, majd hígítjuk. A pellet ezután a tesztelés utolsó szakaszába lép, és meghatározza, hogy vannak-e CWD prionok.
a detektálás az ELISA tesztelési folyamat utolsó fázisa. Ebben a fázisban a hígított mintapelletet szendvics ELISA alkalmazásával vizsgáljuk. A szendvics ELISA két réteg antitestet használ egy adott antigén, ebben az esetben a CWD prion koncentrációjának meghatározására. A folyamat során színváltó szubsztrátot adunk a CWD prionok mintában való jelenlétének vizuális indikátoraként. Ha EGY MINTA jelentős színváltozást mutat, akkor azt “kezdeti reaktornak”, IR-nek tekintik, és újra tesztelik. Az IR mintákat, amelyek az újbóli vizsgálat után továbbra is jelzik a CWD prionok jelenlétét, továbbítják az Egyesült Államok Mezőgazdasági Minisztériumának – Állat-és Növény-egészségügyi ellenőrző szolgálatának, USDA-APHIS, Nemzeti állatorvosi szolgálatok Laboratóriumának.
IHC tesztelés
a TVMDL második CWD tesztelési lehetősége, az IHC rögzített vagy tartósított szöveteket használ. Ha a szövetek frissen vagy nem megfelelően rögzítve érkeznek a TVMDL-be, egy napot adnak a folyamathoz, hogy a szövetek formalinban rögzüljenek, amíg készen állnak a tesztelésre.
miután jól rögzítették, a szöveteket egyenként címkézett műanyag kazettákba helyezik. A kazetták szükségesek a következő lépéshez, amelyben a szöveteket körülbelül 13 órán keresztül dolgozzák fel. Ez idő alatt a szövetek kiszáradnak, és az összes vizet paraffinviasszal helyettesítik, hogy megőrizzék a szövet sejtszerkezetét.
feldolgozás után a szöveteket paraffinviasz formába ágyazzák, hogy előkészítsék őket mikrotom alkalmazásával történő metszésre. Ez a műszer a viaszszövet blokkot 5 mikron vastag szakaszokra szeleteli, vékonyabbak, mint az emberi hajszál.
a vékony szövetrész egy üveglemezre van szerelve. Egy éjszakán át történő szárítás után az üveglemezeket festésre készítik elő. A tárgylemezeket úgy kezelik, hogy eltávolítsák a paraffint, és biztosítsák az antigénkötő helyek rendelkezésre állását a festési folyamat során. Ez a folyamat azonosítja a CWD antigéneket a szövetben azáltal, hogy egy anti-prion molekulát köt a pozitív szövetben lévő CWD antigénhez, majd egy vörös kromogént köt hozzá a molekulához.
ez a félig automatizált festési folyamat összesen körülbelül hat órát vesz igénybe; két óra kézi munka és négy automatizált óra. Ebben az időkeretben a három festőeszköz 90 üveglemezt festhet. Amikor a festés befejeződött, az összes tárgylemezt lefedik és a TVMDL patológusainak adják, akik mikroszkóposan megvizsgálják az egyes tárgylemezeket a CWD jelenlétére.
az ELISA-vizsgálati módszerhez hasonlóan, ha a mintában CWD gyanúja merül fel, azt megerősítő vizsgálat és végleges diagnózis céljából elküldik az iowai Ames-i nemzeti állat-egészségügyi szolgálat laboratóriumába.
a TVMDL különbség
bár az Egyesült Államokban más laboratóriumok kínálnak CWD tesztelést, a TVMDL megkülönbözteti magát a Texasi szarvasipar egyéneinek való elkötelezettsége révén. Az ügynökség szorosan együttműködik más állami szervekkel és szarvas tenyésztőkkel a munkakapcsolatok és a személyes kapcsolatok kialakítása érdekében.
További információ a CWD tesztelésről a TVMDL-en tvmdl.tamu.edu vagy hívja a College Station laboratóriumát az 1-888-646-5623 telefonszámon.