a monoklonális antitest (mAb) gyógyszerek jelentős érdeklődést váltottak ki erős terápiás hatékonyságuk és specifikusságuk miatt a gyulladásos, onkológiai és autoimmun betegségek kezelésére. A nagyszámú mikro-heterogenitás miatti belső összetettségük miatt döntő szükség van analitikai módszerekre a jelölt molekulák átfogó, mélyreható jellemzésének biztosításához.
a Creative Biolabs számos analitikai technikát biztosít az antitestek jellemzésére és a homogenitás értékelésére a mAb felfedezésének, preklinikai és klinikai fejlesztésének minden szakaszában. Itt bemutatjuk a kapilláris izoelektromos fókuszálás (cIEF) alkalmazását az antitest töltés heterogenitásának elemzésére. Széles körben használják a terápiás MAB-k jellemzésére. A MAB töltésizoformák pI-jének meghatározásával a cIEF kulcsfontosságú információkat szolgáltat az identitás, a tisztaság, a transzláció utáni módosítások és a stabilitás megállapításához.
Bevezetés a cIEF-be
a cIEF a kapilláris gélelektroforézis elvén alapul. Az elektroforézis egy elválasztási technika, amely a töltött Fajok elektromos mezőben történő mozgásának differenciális sebességén alapul, az ellentétes töltésű elektróda felé. Az izoelektromos ponton (pI) alapuló molekulák elválasztásához a gél belsejében egy pH-gradienst hoznak létre ampholit keverékek alkalmazásával. Az elektromos mező alatt a molekulák az elektromos mező mentén vándorolnak, amíg el nem érik a pI-nek megfelelő pH-t, ahol a molekulák pozitív és negatív töltései kiegyensúlyozottak. Az UV abszorpciót a teljes kapillárison az elválasztás során mérik, lehetővé téve a valós idejű megfigyelést és a végső számszerűsítést.
ábra.1 az izoelektromos fókuszálás elve. (Pergande, 2017)
cIEF a töltés heterogenitásának jellemzésére
a MAB-k különböző poszttranszlációs módosításokra hajlamosak (pl., glikozilezés, foszforiláció, oxidáció és lizinvágás), ami töltésváltozatokhoz vezet. Ezen töltésváltozatok némelyike különböző mértékben befolyásolhatja a molekula biológiai aktivitását és biztonságát. Például a MABS glikozilezési profilja nagymértékben befolyásolja a fehérje biológiai aktivitását. Következésképpen a mAb-díjak heterogenitásának rutinszerű monitorozása szerves részét képezi bármely termékminőség-és életciklus-kezelési tervnek. Ez egyben a biohasonló fejlesztési és összehasonlíthatósági vizsgálatok egyik legfontosabb analitikai szempontja. Töltés-alapú elválasztási technikaként a cIEF hatékony eszköz a MAB-ok töltési profiljának jellemzésére, mivel a különböző töltési változatok pi szerint megkülönböztethetők belső kalibrálással. Mivel a cIEF nagyon magas reprodukálhatóságot és specifitást biztosít, ez az egyik legnépszerűbb eszköz a mAb elemzéshez.
szolgáltatásaink jellemzői
- ép és redukált MAB-ok méret-és töltésváltozatainak jellemzése cIEF-el
- MAB-ok töltésváltozatainak elemzése ortogonális megközelítéssel
- cIEF elválasztás, majd tömegspektrometriás (MS) elemzés
- egyedi szolgáltatások az egyedi követelmények szerint
a Creative Biolabs az Antitestfunkciós vizsgálatok széles skáláját is kínálja, hogy segítsen megérteni a Töltésvariánsok hatását az antitest aktivitásra és tulajdonságokra, például az effektor funkciókra, az fcrn-re és az antigénkötésre affinitás és PK, ezáltal tisztázva a szerkezet-funkció kapcsolatokat. Ha érdekli a szolgáltatásunk, kérjük, vegye fel velünk a kapcsolatot, hogy megvitassa igényeit.