amikor a fehérjék elválasztására gondol, gondol-e arra, hogy gél segítségével elválasztja őket? Kifejezetten az SDS-oldal használatával? Ha azt válaszolta, hogy” igen”, akkor jó oka van. Az SDS-PAGE mindenütt jelen van a molekuláris biológiai laboratóriumokban, mert jól képes elválasztani a fehérjéket. Az SDS-PAGE azonban sok időt vesz igénybe és munkaigényes. Tehát bővítsük ki az eszköztárat, és nézzünk meg egy másik módszert a fehérjék elválasztására: kapilláris gél elektroforézis.
kapilláris gélelektroforézis (CGE), más néven kapilláris szitáló elektroforézis, más néven kapilláris szitáló elektroforézis.a. SDS-kapilláris gélelektroforézis elválasztja a fehérjéket egy gélben elválasztó közeggel töltött oszlopokon keresztül.
felszerelési követelmények
a kapilláris gélelektroforézisben az analitok (a tanulmányozni kívánt fehérjék) elektrolitikus oldaton keresztül vándorolnak a kapillárisokon keresztül egy elektromos mező húzóerejével – nem ellentétben az ismertebb SDS-oldallal. A CGE végrehajtásához a következőkre van szüksége: mintaüveg, forrás-és célüveg, szitáló mátrix, kapilláris oszlop, oszlopdetektor, adatkimeneti és-kezelő eszköz, valamint nagyfeszültségű tápegység.
protokoll röviden
egy CGE kísérletben a minta a forrás injekciós üvegtől indul és a cél injekciós üveg felé tart. Itt van a protokoll röviden:
1. lépés: a forrás és rendeltetési fiolákat, valamint az azokat összekötő kapillárisokat elektrolitikus oldattal töltjük meg, és a mintát a kapillárisba vezetjük be.
2. lépés: az elektromos mező alkalmazása után az analitok a forrás injekciós üveg oldaláról a cél injekciós üveg oldalára vándorolnak.
3. lépés: az oszlopdetektor (nem meglepő módon) lehetővé teszi az oszlopdetektálást. Az érzékelő adatokat küld egy adatkimeneti és-kezelő eszköznek, például egy számítógépnek.
4.lépés: ezek az adatok elektroferogramként jelennek meg. Az analitok különböző retenciós idők csúcsaként olvashatók.
ha további részleteket szeretne megtudni arról, hogyan működik ez, látogasson el az UC Davis hasznos anyagába.
További információ a mátrixról
a szitáló mátrix számos polimerizált anyagból állhat, beleértve a térhálósított poliakrilamidot, dextránt és poli(etilénglikol vagy etilén-oxid). Az oszlopok általában cserélhető szitáló polimerekből készülnek. Ezután rajtad múlik, hogy saját oszlopokat készít-e, vagy megvásárolja-e őket. Beckman Coulter, Agilent Tech és Bio-Rad Laboratories eladni szitáló készletek, de tudom, hogy ezek megkövetelik, hogy használja a CGE eszközök is.
miért érdemes használni a CGE-t
most már hallottál arról, hogy mi a CGE, miért kellene használni?
- rövidebb működési idővel rendelkezik. A CGE futtatása 10-100 – szor kevesebb időt vesz igénybe, mint a lemezgél-elektroforézis.
- kevesebb lépés van egy CGE kísérletben, mint egy SDS-oldalas kísérletben. Ennek oka az, hogy a CGE kísérlet végeredményét a készülékhez csatlakoztatott számítógép adja.
- CGE is jobban megfelel a kis fehérjék, mint a hagyományos SDS-oldal.
- a CGE segítségével valós időben elemezheti fehérjéit.
- a CGE berendezés többször is használható, nincs szükség végtelen gélek készítésére.
- végül a folyamat nagy része automatikus. Miután hozzáadta a mintát, kész! Ez azt jelenti, hogy nem kell felügyelnie a folyamatot, mint egy gélt, vagy el kell vinnie speciális detektáló berendezésekhez, amint a gél lefut.
miért ne használja a CGE-t
Nos, az igazat megvallva annak ellenére, hogy a CGE a jelenlegi formájában több mint egy évtizede létezik, és számos technikai fejlődés történt, a CGE még mindig reprodukálhatósági problémákkal küzd. Egy másik probléma az, hogy a CGE elválasztásokat sorozatban hajtják végre. Ez azt jelenti, hogy a CGE-vel nem lehet kényelmesen összehasonlítani a sávokat. Végül, amikor a 2D gélekről van szó, a CGE egyszerűen nem tud versenyezni a hagyományos 2D elválasztással.
összefoglalva, míg egyes kutatók büszkén kiáltják a CGE technológia használatát, még mindig számos probléma van vele. De még ne utasítsa el a CGE-t! A legújabb lendület ezen a területen a microchip CGE, amely sok ígéretet mutat a nagysebességű fehérje elemzésre. Tehát legközelebb, amikor a fehérje elválasztására gondol, ne felejtse el a CGE-t.
próbálta már a CGE-t? Hogy tetszik az SDS-oldalhoz képest?