I. U. B.: 3.4.22.8
C. A. S.: 9028-00-6
enzimatikus reakció (a kép új ablakban nyílik meg)
a Clostripain egy cisztein-aktivált proteáz, amely a Kollagenázzal és más proteázokkal együtt megtalálható a Clostridium histolyticum tenyésztési Szűrleteiben. Egyedülálló az arginin karboxil-peptidkötésére, valamint a tiol-és kalciumionoktól való függőségére.
történelem:
a baktériumok, amelyekből a clostripain megtisztul, először az első világháború alatt figyeltek fel a sebesültekre gyakorolt súlyos következményei miatt (Mitchell and Harrington 1971). Cl. a hisolyticum csak egyike a következményes patogén tulajdonságokkal rendelkező organizmusoknak, de proteolitikus aktivitása a sejtmentes tenyésztési szűrletekben már 1917-ben felkeltette a figyelmet (Weinberg és S Xhamgun 1917, valamint Mitchell and Harrington 1971).
1931-ben Weinberg és Randin leírta a ló inak emésztését. Egy évvel később egy exotoxint azonosítottak, amelyet “ferment fibrinolytique” – nek neveztek, mint az emésztés okát (Weinberg and Randin 1932). Később kiderült, hogy ezt az emésztést számos proteolitikus enzim okozta, köztük egy cisztein-aktivált proteináz, a clostripain (Kochalaty and Weil 1938 és Maschmann 1938).
1948-ban Kochalaty és Krejci először sikeresen izolálta a clostripaint viszonylag tiszta formában (Mitchell and Harrington 1968). Ogle és Tytell 1953-ban finomították a tisztítási technikát, és először számoltak be annak sajátosságairól (Ogle és Tytell 1953).
amikor a szűk szubsztrát specificitása clostripain vált az érdeklődés, zavart létezett az irodalomban vonatkozó azonosságát clostripain (Mitchell and Harrington 1971). Mielőtt Labouesse és Gros 1960-ban clostripainként, majd később Mitchell és Harrington 1968-ban leírta, g-proteázként (Bard and McClung 1948, Oakley and Warrack 1950), amidáz-észterázként (Nordwig and Strauch 1963) és clostridiopeptidáz B-ként (Mitchell and Harrington 1968) emlegették.
a közelmúltban a clostripainnal végzett munka magában foglalta a sejtek izolálását és a proteázgátlók modellcéljaként való alkalmazását a Clostridium fertőzések kezelésére (Wang et al. 2004 és Gusman et al. 2001).
specificitás:
a Klostripain szelektíven hidrolizálja az arginilkötéseket és a lizilkötéseket kisebb sebességgel. Transzpeptidázként is működhet, maximális aktivitása pH 7,6-9,0 (Anderson 1985, Fortier és MacKenzie 1986).
Molekuláris Jellemzők:
mind a nehéz, mind a könnyű láncokat egyetlen gén kódolja egy 1581 nukleotid nyitott leolvasási kerettel (ORF). A gén expressziója után a teljes ORF (a szignálrégió, a prorégió és a 9 aminosav-peptid-linker) átíródik. A poszttranszlációs feldolgozás előállítja a heterodimer aktív enzimet (Dargatz et al. 1993).
összetétel:
a Clostripain heterodimer. Az érett lánc 526 maradékból áll. A két láncot erős, nem kovalens erők tartják össze (Gilles et al. 1979, Ullman és Bordusa 2004). Úgy gondolják, hogy az aktív hely katalitikus szulfhidrilmaradványa Cys41 (nehéz láncmaradvány). A prekurzor tartalmaz egy 27 aminosav feltételezett szignálpeptidet, egy 23 aminosav propeptidet, egy 131 aminosav könnyű lánc alegységet, egy 9 aminosav linker peptidet és egy 336 aminosav nehéz lánc alegységet (Ullman and Bordusa 2004).
fehérje csatlakozási szám: P09870
Molekulatömeg:
- 53.0 kDa (elméleti)
- könnyű lánc: 12,5 kDa, nehéz lánc: 45 kDa (Gilles et al. 1979)
optimális pH:
- 7.4-7.8 (a-benzoil-arginin-etil-észter elleni aktivitás) (Mitchell és Harrington 1968)
izoelektromos pont: 4,8-4,9 (Mitchell and Harrington 1971)
kihalási együttható:
- 87,890 cm – 1 M-1 (elméleti)
- E1%,280 = 16,57 (elméleti)
aktív szermaradékok:
- cisztein (C41, nehéz lánc)
aktivátorok:
- Szulfhidriligény: ditiotreitol, cisztein vagy más redukálószerek
- a kalciumion elengedhetetlen
- Redukálószerek
inhibitorok:
- EDTA
- oxidálószerek
- Szulfhidrilreagensek (például TLCK) (Porter et al. 1971)
- Co2+, Cu2+, Cd2+ és nehézfém ionok
- citrát, borát és trisz anionok részlegesen gátolják
Alkalmazások:
- peptid leképezés
- szekvencia analízis
- Sejtizoláció (Wang et al. 2004)
- Amidkötések hidrolízise / kondenzációja
- Peptidszintézis (Meiwes et al. 1991)