a koleszterin oldallánc hasításának vizsgálata (20,22 dezmoláz) a veleszületett lipoid mellékvese hiperpláziát okozó hiány szarvasmarha – szekvencia alkalmazásával p450scc oligodeoxiribonukleotid próbák

a koleszterin pregnenolonná történő átalakulását a koleszterin oldallánc hasításának vizsgálata közvetíti hasítási (SCC) enzim, p450scc. A hiányos SCC aktivitás veleszületett lipoid mellékvese hiperpláziát (más néven 20,22 dezmoláz hiányt) okoz, amely potenciálisan halálos hiba az összes szteroid hormon szintézisében. A betegséget okozó lehetséges genetikai hibák vizsgálatára négy oligodeoxiribonukleotidot szintetizáltunk, amelyek 63-72 bázist tartalmaznak, amelyek megfelelnek a szarvasmarha komplementer DNS (cDNS) szekvenciájának a P450scc számára. A szarvasmarha-oligonukleotidokat felcímkézték és közvetlenül felhasználták a normál humán genomi DNS Déli blotjainak vizsgálatára, feltárva egy olyan mintát, amely azt jelzi, hogy egyetlen P450scc gén van az emberi genomban. A normál humán és szarvasmarha mellékvese messenger RNS északi blotjaival való hibridizáció azt jelzi, hogy a P450scc messenger RNS körülbelül 2,0 kilobázis hosszú mindkét fajban. Az oligonukleotidok genomi DNS-re történő hibridizációja három, egymással nem összefüggő SCC-hiányban szenvedő betegtől nem mutatott deléciót a humán P450scc génben. A szarvasmarha-szekvencia oligonukleotidokat ezután humán P450scc cDNS klón izolálására használtuk. Az izolált p450scc cDNS fragmens 818 bázist tartalmaz, amelyek a fehérje 239 aminosavát, a transzlációs terminációs jelet, valamint 98 bázist tartalmaznak a 3 ‘ nem transzlált régióból. A humán P450scc fehérje ezen karboxi-terminális felének szekvenciája 72% – ban homológ a szarvasmarha-szekvenciával, és tartalmaz egy további aminosavat, amely nem található meg a szarvasmarha-P450scc-ben; a humán és a szarvasmarha-nukleotid szekvenciák 81% – ban homológ. A genomi DNS-blot vizsgálatok megismétlése a cDNS-szondával ugyanazokat az eredményeket adta, mint a szarvasmarha-szekvencia oligonukleotid próbákkal, megerősítve, hogy az SCC-hiány nem a p450scc régióinak deléciójának köszönhető, amely a próbákkal hibridizálódik. Hosszú, kémiailag szintetizált heterológ szekvencia oligonukleotidok, amelyek ismeretlen számú bázis-eltérést tartalmaznak az emberi szekvenciákkal, így felhasználhatók az emberi gének tanulmányozására, így az ilyen vizsgálatokhoz nem szükséges cDNS-hez való hozzáférés.

Vélemény, hozzászólás?

Az e-mail-címet nem tesszük közzé.