absztrakt
a magas kockázatú papillomavírus (HR-HPV) vizsgálata citológiával kombinálva javítja a nyaki elváltozások kimutatását és növeli a szűrési intervallumok hosszát. A népességalapú HR-HPV felméréshez nagy szükség van az automatizálás tesztelésére. A COBAS 4800 HPV tesztrendszer egy teljesen automatizált vizsgálat, amely egyszerre képes kimutatni a HPV16, HPV18 és más 12 összesített HR-HPV genotípust. Ezt a rendszert számos országban alkalmazták a HR-HPV szűrésére; ilyen alkalmazást azonban Kínában nagy populációban nem dokumentáltak. Ebben a tanulmányban a COBAS 4800 HPV tesztrendszert alkalmaztuk a HR-HPV kimutatására a méhnyak citológiai mintáiban, összesen 5650 tünetmentes nőtől gyűjtve egy dél-kínai régióból. A következőkről számoltunk be: (1) A HR-HPV 14 genotípusának prevalenciája 12,96% volt; (2) A HR-HPV fertőzésben szenvedőknél 2,25% volt pozitív a HPV16, 0,50% a HPV18, 9,15% az összesített 12 HPV-típus esetében, és 1,06% a többszörös HPV-fertőzés esetén; és (3) nem volt szignifikáns különbség a HR-HPV prevalenciában a különböző korcsoportok között. Kimutatták, hogy a HPV16 és a HPV18 a méhnyakrákos betegek domináns HPV-típusai Kína egyes régióiban, ami azt jelzi, hogy egy teljesen automatizált vizsgálat, mint a COBAS 4800 HPV tesztrendszer, különösen értékes a populáción alapuló HR-HPV szűrés szempontjából ezekben a régiókban, mivel ez a vizsgálat egyidejűleg kimutathatja a HPV16-ot és a HPV18-at.
1. Bevezetés
a humán papillomavírus (HPV) a Papillomaviridae család kettős szálú DNS-vírusa . A HPV több mint 200 genotípusát azonosították, amelyek között 15 (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68, 73, 82) szorosan összefügg a méhnyakrákkal . A méhnyakrák világszerte a negyedik leggyakoribb rák a nőknél, Kínában pedig a hatodik leggyakoribb rák. A méhnyakrák terheinek csökkentése érdekében a méhnyakrák korai azonosítása elváltozások, amelyek valószínűleg előrehaladnak invazív rák rendkívül fontos. A nyaki citológia fontos szerepet játszik a méhnyakrák megelőzésében . A HPV-vizsgálat citológiai kiegészítése a magas fokú cervicalis léziók fokozott kimutatását eredményezi, ezért a betegség kimutatásának javítása és a szűrési időközök hosszának növelése érdekében javasolt a magas kockázatú HPV (HR-HPV) szűrésének beépítése a citológiába .
a mai napig különböző módszereket jelentettek a HPV genotipizálására és kimutatására . A populációalapú szűrésnél az automatizálás tesztelése különösen hasznos, mivel az automatizálás képes nagyszámú minta Rövid idő alatt történő feldolgozására és a kézi műveletek során előforduló emberi hibák csökkentésére. A COBAS 4800 HPV tesztrendszer (Roche Molecular Systems Inc., Rotkreuz, Svájc), teljesen automatizált, összesen 14 HR-HPV típus egyidejű kimutatására tervezték: HPV16 külön-külön, HPV18 külön-külön és 12 összesített HR-HPV genotípus (31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68). Ezt a rendszert az Egyesült Államok Food and Drug Administration jóváhagyta a HR-HPV szűréshez. A COBAS 4800 HPV tesztrendszer 2 részből áll, azaz. Cobas x 480 műszer, amelyet nukleinsav tisztítás és PCR minta pipettázás automatizálására használnak, valamint Cobas z 480 analizátor, amely automatikus valós idejű PCR amplifikációra és az azt követő típus-specifikus hibridizációra szolgál. Bár a COBAS 4800 rendszer HR-HPV tesztelésre történő használatáról számos országban beszámoltak, az ilyen alkalmazást Kínában nagy populációban nem dokumentálták. Ebben a tanulmányban a COBAS 4800 HPV tesztrendszert alkalmaztuk a HR-HPV kimutatására méhnyak citológiai minták összesen 5650 tünetmentes nőtől gyűjtötték.
2. Módszerek
ezt a tanulmányt a Zhongshan Hagyományos Kínai Orvostudományi Kórház Orvosi Kutatási felülvizsgálati Bizottsága hagyta jóvá. Minden résztvevőtől tájékozott beleegyezést kaptak.
2.1. Nyaki mintagyűjtemény
a 20-65 éves tünetmentes nőket 2018 januárjától 2018 decemberéig vették fel erre a tanulmányra a vizsgálati költségekkel, amelyeket a vizsgálati alanyok vagy munkáltatóik fedeznek, vagy kombinációban. A felvételi kritériumok között szerepel, hogy 20 éves vagy annál idősebb, nem terhes, ép méhe van, szexuálisan aktív vagy korábban szexuális tevékenységet folytatott. Minden alanyt tájékoztattak arról, hogy a méhnyak mintavétele előtt 48 órán keresztül nem alkalmaznak hüvelyi gyógyszereket, hüvelyi fogamzásgátlókat vagy kenőanyagokat. A méhnyak citológiai mintáit a Cervex-Brush Combi eszköz (Rovers Medical Devices) segítségével gyűjtöttük össze az alábbiak szerint: az eszköz endocervikális mintavételi részét behelyeztük az endocervikális csatornába, hogy az oldalsó sörték teljes mértékben érintkezzenek az ektocervixszel, majd az eszközt két teljes fordulattal az óramutató járásával megegyező irányba forgattuk. A kiszívás után az eszközt a begyűjtött sejtekkel azonnal behelyeztük egy PreservCyt oldatot tartalmazó injekciós üvegbe (Hologic Inc., Bedford, MA, USA) és erőteljesen kavargott. Mintákat használtunk a HPV DNS kimutatására az alábbiakban leírtak szerint.
2.2. HR-HPV detektálás a Cobas 4800 HPV tesztrendszerrel
Lízispuffert, Mosópuffert, elúciós puffert, HPV pozitív és negatív Kontrollkészleteket és minden más reagenst a Roche Molecular Systems Inc. – től vásároltak. Mindegyik mintában volt egy belső kontroll, a sejtek megfelelőségének monitorozására, és minden egyes vizsgálat tartalmazott egy sor HPV pozitív és negatív kontrollt. A DNS kivonását és tisztítását a Cobas x 480 műszerrel végezték a gyártó utasításai szerint. Röviden, a tartósítószer-oldat mintáit vortexeltük és a mintahordozóra helyeztük, majd a reagenseket, pl. Lízispuffert,Mosópuffert és elúciós puffert a megfelelő reagenstartály-hordozókba töltöttük. A minta és a reagens betöltése után a DNS-előkészítés automatikusan befejeződött, és a végső DNS-termékeket egy microwell lemezbe gyűjtötték. Ezt követően a DNS-t tartalmazó microwell lemezt manuálisan lezárták és betöltötték a Cobas z 480 analizátorba, és az amplifikáció és a hibridizáció automatikusan befejeződött.
2.3. Statisztikai elemzés
a statisztikai elemzést az SPSS 13.0 segítségével végeztük (IBM Corp., Armonk, NY, USA). A kategorikus változók értékeléséhez a 62 tesztet használtuk. Minden statisztikai teszt 2 oldalas volt, és a 0,05-nél kisebb értékeket statisztikailag szignifikánsnak tekintették.
3. Eredmények
összesen 5650 tünetmentes, 20-65 éves, átlagos életkorú nő teljesítette a vizsgálati követelményt, és részt vettek ebben a vizsgálatban. E résztvevők közül 732 (12,96%) volt HR-HPV-pozitív, köztük 127 (2,25%) HPV16 fertőzéssel, 28 (0,50%) HPV18-mal, 517 (9,15%) 12 HPV-típussal, és 60 (1,06%) többszörös HPV-fertőzéssel (HPV16 keverve HPV18-mal, HPV16 keverve 12 egyesített típussal, HPV18 keverve 12 egyesített típussal, vagy HPV16 vegyesen hpv18 és 12 összevont típusokkal) (1.táblázat).
|
||||||||||||||||
|
a többszörös HPV-fertőzések közé tartozik a HPV16 és a HPV18, a HPV16 és a 12 összevont típus, a HPV18 és a 12 összevont típus, vagy a HPV16 és a HPV18 és a 12 összevont típus.
|
||||||||||||||||
az életkor szerint a résztvevőket 4 csoportra osztották: 20-30, 31-40, 41-50 és >51 év. Amint azt a 2. táblázat mutatja, a 31-40 éves csoportban volt a legmagasabb HR-HPV fertőzési arány (15,32%), amelyet a >50 éves, 41-50 éves és 20-30 éves csoportok követtek, bár ezeknek a csoportoknak a fertőzési arányai között nem figyeltek meg statisztikai szignifikanciát.
|
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
4. Vita
ebben a tanulmányban a COBAS 4800 rendszert használtuk a HR-HPV kimutatására 5650 tünetmentes nőnél, és a következőket találtuk: (1) A HR-HPV 14 genotípusának prevalenciája 12,96% volt; (2) a 732 HR-HPV-pozitív nő közül 2,25% volt pozitív a HPV16, 0,50% a HPV18, 9,15% az összesített 12 HPV-típusnál, és 1,06% a többszörös HPV-típusnál HPV fertőzés; és (3) nem volt szignifikáns különbség a HR-HPV prevalenciában a különböző korcsoportok között.
mind a valós idejű magas kockázatú HPV teszt az Abbott Molecular Inc. – től. (Des Plaines, IL, USA) és a COBAS 4800 HPV tesztrendszer klinikailag validált, teljesen automatizált PCR-alapú vizsgálatok a HR-HPV kimutatására . Ennek a 2 vizsgálatnak az egyik előnye, hogy egyidejűleg képesek kimutatni és megkülönböztetni a HPV16-ot és a HPV18-at, ami fontos a méhnyakrák szűréséhez, mivel a HPV16 és a HPV18 a méhnyakrákok körülbelül 70% – át teszi ki világszerte . Kevés tanulmány hasonlította össze ezt a 2 vizsgálatot a HR-HPV kimutatásában klinikai mintákban. Park et al. 365 cervicalis tamponmintát vizsgáltak, és arról számoltak be, hogy a valós idejű magas kockázatú HPV teszt 78,3% – os érzékenységet mutatott, 99,2% – os specifitással, míg a Cobas 4800 rendszer érzékenysége 91,7%, illetve 97,0% volt . Cuzick et al. 6000 nőt vizsgáltak meg, és kiderült, hogy a COBAS 4800 rendszer 16,0%-át HR-HPV-pozitívnak, míg 13,4%-át HR-HPV-pozitívnak mutatták ki a valós idejű magas kockázatú HPV teszttel . Ezek az adatok azt mutatják, hogy a Cobas 4800 rendszer nagyobb érzékelési érzékenységgel rendelkezik.
az Egészségügyi Világszervezet 2016-ban számos klinikailag validált molekuláris rendszert vett fel a HR-HPV DNS kimutatására a HPV teszt integrálása a méhnyakrák szűrési programjaiba-Kézikönyv A programvezetők számára (https://www.paho.org/hq/dmdocuments/2016/manual-VPH-English—FINAL-version.pdf). Ezek a tesztek hibridizáción alapuló vizsgálatokból, azaz a hibrid Capture 2 technikából és a CareHPV tesztből, valamint PCR-alapú vizsgálatokból állnak, pl., a COBAS HPV teszt, az Abbott Realtime High Risk HPV teszt, a Cervista HPV HR teszt és a BD HPV teszt. Minden PCR-alapú vizsgálat DNS-izolációt igényel, míg a hibridizáción alapuló vizsgálatok nem. Az összes módszer közül a Cervista HPV HR teszt 6-7 órát vesz igénybe, az Abbott Realtime High Risk HPV assay pedig 6-8 órát vesz igénybe, ami nem biztos, hogy ugyanazon a napon teljesíti a “látni és kezelni” célt. Ezzel szemben az összes többi módszer, beleértve a Cobas 4800 rendszert is, körülbelül 5 órás maximális futási időt igényel, amely alkalmas arra, hogy a betegek egy látogatás során befejezzék a “see and treatment” – et.
globálisan a HR-HPV prevalenciája kontinensenként változik . Kínában a HR-HPV prevalencia felmérésére különböző módszereket alkalmaztak . Wu et al. A Hybrid Capture 2 Assay-t (Qiagen, Hilden, Németország) alkalmazta 13 egyesített típusú HR-HPV kimutatására (HPV16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, és 68) összesen 4215 17-54 éves nő 5 különböző földrajzi területről Kína és felfedezte, hogy a HR-HPV prevalencia 12,4% volt . Ugyanazt a módszert használja, mint Wu et al. , Zhao et al. azt találtuk, hogy 15.Az észak-kínai régióból származó nők 2% – a 1274 pozitív volt a HR-HPV-re . Chen et al. HPV genotipizáló készletet (Yaneng Biotechnology Limited Corp., Shenzhen, Kína) alkalmazott összesen 961 029 HPV-tesztre a délkelet-kínai 16-83 éves nők számára, és 16,61% – os HR-HPV-fertőzési arányt mutatott. Jing és mtsai. tömegspektrometriás vizsgálatot alkalmaztak HPV-DNS tesztelésre 78 355 Dél-Kínai 18-75 éves nőnél, és <7,3%-os HR-HPV prevalencia arányt jelentettek . Ezek a tanulmányok azt mutatják, hogy a HR-HPV fertőzés aránya körülbelül 10-15% között mozog a kínai nőknél, ami egyetért a megállapításunkkal. A jelen tanulmányban alkalmazott módszer azonban egyszerűbb és kevésbé fáradságos a korábbi vizsgálatokhoz képest .
két, Kínában végzett legnagyobb mintaméretű vizsgálat összehasonlította a HR-HPV prevalencia arányát a korcsoportok között. Zeng et al. retrospektív módon 671 163 HPV tesztet elemeztek a hibrid Capture 2 módszerrel 2007 és 2014 között, és kimutatták a legmagasabb HR-HPV prevalenciát, a 36-ot.9% a < 20 éves korcsoportban, míg a HR-HPV-pozitív arány a 20-30, 30-40 és 40-50 éves korcsoportokban sorrendben 24,4%, 19,7% és 19,9% volt . HR-HPV tesztelés a legnagyobb mintamérettel (961 029 minta), amelyet Chen et al. ismét a HR-HPV legmagasabb prevalenciáját mutatja a <20 éves korcsoportban (22,3%), míg a 20-30, 30-40 és 40-50 éves korcsoportok prevalenciája 16,8%, 15,2% és 15,9%. Ezek a vizsgálatok a 20-30 éves csoportban valamivel magasabb prevalencia arányt mutatnak, mint a 30-40 és a 40-50 éves csoportokban, ami ellentétben áll az eredményeinkkel, mivel a legalacsonyabb HR-HPV prevalenciát figyeltük meg a 20-30 éves csoportban. Ez az eltérés a következő tényezők miatt következhet be: (1) A fiatalabb nők manapság jobban hozzáférnek az egészségügyi oktatási programokhoz, különösen az elektronikus eszközöket használó online programokhoz, és (2) a fiatalabb nők inkább szívesen tanulnak és fogadnak el új ismereteket a higiéniáról és a szexuális egészségről.
a HPV16 a HR-HPV leggyakoribb típusa, amelyet Észak – (Peking és Henan, Shanxi és Xinjiang tartomány), Délkelet (Sanghaj és Zhejiang tartomány) és Dél-Kína (Guangdong tartomány) régióból származó nők méhnyakmintáiban találtak, pozitív aránya 1,5-3,6% között mozog, ami összhangban van a dél-kínai vizsgálati alanyokban megfigyelt 2,25% – os HPV16 fertőzési rátával. A HPV16 a méhnyakrák mintegy 50% – áért felelős világszerte . Míg a kínai méhnyakrákos betegeknél a HR-HPV genotípus eloszlására vonatkozó információk továbbra is korlátozottak, Li et al. arról számoltak be, hogy 1818-ból 2309 méhnyakrákos beteg (78,7%) Nyugat-Kínából pozitív volt a HPV16-ra, és ezeknek a betegeknek körülbelül 90% – a volt pozitív a HPV16-ra és a HPV18-ra . A HPV16 és HPV18 53,2% – os fertőzöttségi arányát 326 méhnyakrákos betegnél mutatták ki a délkelet-kínai Fujian tartományból . Ezek az adatok azt mutatják, hogy ezekben a régiókban a HPV16 és a HPV18 a méhnyakrákos betegek körében uralkodó HPV típusok. Egy teljesen automatizált vizsgálat, mint a COBAS 4800 HPV tesztrendszer, amely egyszerre képes kimutatni és megkülönböztetni a HPV16-ot és a HPV18-at, különösen értékes lesz a populáción alapuló HR-HPV szűrés szempontjából azokban a régiókban, ahol a HPV16 és a HPV18 fertőzés dominál.
adatok rendelkezésre állása
a tanulmány megállapításainak alátámasztására használt adatok kérésre rendelkezésre állnak a megfelelő szerzőtől.
összeférhetetlenség
a szerzők kijelentik, hogy nincs összeférhetetlenségük.
szerzői hozzájárulások
SW, XH, QP és LZ toborozta a résztvevőket, mintákat gyűjtött és teszteket végzett. SW és JZ írta a cikket. Az FM áttekintette az irodalmat és statisztikai elemzést végzett. JZ megtervezte a tanulmányt, elemezte az adatokat, végül jóváhagyta a kéziratot.