Esta propuesta aborda la relación estructura-función de las proteínas de coagulación sanguínea dependientes de vitamina k, con especial atención al ácido gamma carboxiglutámico. Este programa, que incluye cuatro proyectos separados pero relacionados, ha evolucionado a partir del trabajo anterior desarrollado en el período anterior. En el Proyecto #1, se estudiará la relación estructura-función del factor IX y la protrombina. Las formas mutantes de estas proteínas, obtenidas de pacientes con anomalías estructurales y funcionales hereditarias de estas proteínas, se purificarán utilizando anticuerpos específicos de conformación, fragmentados por proteólisis, y los péptidos mutantes se secuenciarán. El defecto molecular en cada proteína mutada será establecido y correlacionado con defectos funcionales. En el Proyecto # 2, la proteína de membrana plaquetaria KC4 recién descubierta será completamente caracterizada y localizada en orgánulos subcelulares específicos. Se determinará la función y las propiedades de unión de esta proteína, expresadas solo en plaquetas activadas. El proyecto # 3 definirá el papel del Gla en la protrombina. Se evaluará un nuevo modelo de interacción de Gla, metal y membrana en protrombina utilizando enfoques inmunoquímicos y espectroscópicos. Las propiedades de unión a la membrana y la distribución de Gla de una serie de protrombinas parcialmente carboxiladas deberían dar una idea de este problema. El proyecto # 4 es una aplicación clínica directa de nuestros estudios inmunoquímicos. Utilizando anticuerpos específicos para la protrombina completamente carboxilada (NPT) y la des-gamma-carboxiprotrombina (APT), continuaremos un ensayo clínico para evaluar estos ensayos como un método mejorado de monitorización de la terapia anticoagulante oral. Se estudiará la deficiencia de vitamina K en recién nacidos y sus madres, con la esperanza de desarrollar enfoques racionales simples para eliminar la enfermedad hemorrágica del recién nacido. Además, se explorará el análisis del antígeno KC4, específico para plaquetas activadas, como método de detección del estado prethrombótico. Estos proyectos básicos y clínicos deben contribuir a la comprensión de este grupo de proteínas, proporcionar nuevas modalidades para el diagnóstico del estado pretrombótico y la deficiencia de vitamina K, y desarrollar más datos para justificar el uso del ensayo NPT durante el tiempo de protrombina, reducir significativamente la morbimortalidad asociada con la terapia anticoagulante oral.