Resumen
Hemos utilizado un sistema de cultivo clonal de dos pasos para demostrar inequívocamente que las células progenitoras linfohemopoyéticas primitivas individuales tienen la capacidad de diferenciación a lo largo del linaje mieloide o linfoide B. Las células de médula murina altamente enriquecidas se platearon individualmente en cultivo por micromanipulación en presencia de medio condicionado de células de bazo estimulado por mitógenos, eritropoyetina, factor de acero (SF) e interleucina (IL) 7. El cuarenta y cinco por ciento de las células individuales formaron colonias primarias que expresaban múltiples linajes hemopoyéticos. Cuando las alícuotas de colonias individuales se repusieron en cultivos secundarios de metilcelulosa que contenían SF e IL-7, el 41% de las colonias primarias dieron lugar a colonias de linfocitos. Las células de los linfocitos, las colonias fueron explosión y B220+, sIg-, Mac-1-Gr-1-, Ly-1-, L3T4-, Ly-2-, y CD3-. Del treinta al 70% de las células eran Thy-1+. el ARNm de cadena mu se detectó en la mayoría de las células mediante hibridación in situ con una sonda de ARN antisentido. Cuando las colonias de linfocitos derivadas de una sola célula se agruparon e inyectaron individualmente en ratones scid, la IgM de tipo donante se pudo medir en el suero de ratones y los bazos contenían células de tipo B de donante. A continuación, realizamos un examen inicial de los factores de crecimiento para identificar los factores de crecimiento que podrían reemplazar el medio condicionado de células del bazo estimulado por mitógenos de la escarcha en el cultivo primario. Las combinaciones de dos factores que incluían SF más IL-6, IL-11 o factor estimulante de colonias de granulocitos fueron eficaces en el cultivo primario para mantener el potencial linfoide B. Curiosamente, la IL-3 no podía reemplazar ni actuar sinérgicamente con la FS para apoyar el potencial linfoide de los cultivos primarios. Nuestras observaciones demuestran que muchos progenitores primitivos que antes se creía que estaban comprometidos con mieloides también poseen potencial linfoide B. Este sistema de cultivo debería ser valioso para elucidar los mecanismos que regulan las primeras etapas de la linfohemopoyesis.