Óvulos de Capillaria y Diagnóstico de Infección por Trichuris trichiura en Humanos por Frotis de Kato-Katz, Liberia | Anne Marie

El Estudio

Para evaluar el efecto de la administración masiva de medicamentos utilizandovermectina y albendazol para la eliminación de la filariasis linfática en la prevalencia e intensidad de la HST, recolectamos muestras de heces durante un período de 3 años en 2 áreas diferentes en el distrito de Foya (Condado de Lofa) en el noroeste de Liberia y en el distrito de Harper (Maryland Condado) en el sureste de Liberia (10). Se examinó una sola muestra de heces por sujeto mediante microscopía (aumento ×100) con frotis de Kato-Katz duplicados (plantilla de 41 mg). Preservamos alícuotas de especímenes seleccionados al azar en tarjetas de TLC (GE Healthcare, Little Chalfont, Reino Unido) o en RNAlater (ThermoFisher, Waltham, MA, EE.UU.) y las enviamos a la Escuela de Medicina de la Universidad de Washington (St. Louis, MO, EE. UU.) para su análisis por qPCR. Dos microscopistas experimentados (L. G., A. T. Momolu) examinaron las muestras mediante frotis de Kato-Katz en ambas áreas de estudio. Para la detección de HST por qPCR, se extrajo ADN de ≈100 mg de materia fecal y se probó según lo descrito por Pilotte et al. (5) con un Termociclador Quantstudio 6 Flex (Applied Biosystems, Carlsbad, CA, EE.UU.) y una mezcla Maestra Avanzada TaqMan Fast (Applied Biosystems). Utilizamos los siguientes cebadores y sondas para detectar ADN de Schistosoma mansoni: cebador delantero 5′-TGTGGGAGTCTTTGGTTGTT-3′, cebador inverso 5′-CAACATGACTGGAACAGGA-3′, sonda 5′-AGGTTCAGGTGG/ZEN/GTGTGTTACGAA-31ABkFQ-3′.

Se analizaron 353 muestras de heces del distrito de Foya mediante frotis de Kato-Katz; 31 (8,8%) dieron positivo para A. huevos de lumbricoides, 231 (65,4%) para huevos de anquilostoma, 27 (7,6%) para huevos similares a T. trichiura, y 276 (78,2%) para huevos de S. mansoni. Se analizaron 225 muestras del distrito de Harper mediante frotis de Kato-Katz; 163 (72,4%) dieron positivo para huevos de A. lumbricoides, 65 (28,9%) para huevos de anquilostoma y 51 (22,7%) para huevos de T. trichiura (Tabla 1). Hubo una buena concordancia entre los resultados de las pruebas de Kato-Katz y qPCR para las muestras de Harper (80,5% -91,6%), pero en general el qPCR tuvo una mayor sensibilidad. Nuestros resultados fueron consistentes con los resultados reportados previamente con muestras de otras áreas (3,11). La concordancia entre las 2 pruebas diagnósticas para muestras de Foya osciló entre el 77,3% y el 92,9%, pero la sensibilidad del qPCR fue inesperadamente baja, un hallazgo que fue especialmente cierto para la infección por Ascaris y Trichuris (Tabla 1). Mientras que las muestras positivas para Ascaris por Kato-Katz pero negativas por qPCR tenían recuentos bajos de huevos, las muestras positivas para Trichuris por Kato-Katz pero negativas por qPCR tenían recuentos más altos; 7 muestras contenían > 1,000 huevos en forma de barril / g de heces (Tabla 2). Repetimos extracción de ADN y qPCR y también usamos un qPCR alternativo para T. trichiura (3), pero estas pruebas no mejoraron la concordancia entre la microscopía y los resultados de qPCR.

Para verificar más a fondo si las muestras de heces positivas a Kato-Katz y negativas a qPCR contenían huevos de T. trichiura, examinamos frotis directos de muestras de heces conservadas en RNAlater por microscopía (aumento ×100 y ×400) (Figura). Las muestras positivas por qPCR contenían huevos (6 medidos) con la morfología típica de T. trichiura; estos huevos tenían una longitud media (±DE) de 52 µm (±2,4 µm) y una anchura de 25,5 µm (±1,3 µm). En cambio, las muestras qPCR negativas contenían huevos (31 medidos) con una longitud media (±DE) de 51,8 µm (±1,5 µm) y una anchura de 32,7 µm (±2,1 µm). Las muestras negativas para qPCR también tenían tapones menos pronunciados y una cáscara gruesa y estriada, características que son consistentes con los huevos de Capillaria hepatica (sin. Calodium hepaticum) y algunas otras especies de Capillaria (Trichuridae). Huevos de C. philippinensis o C. las aerófilas que se han observado en muestras de heces humanas anteriormente eran más pequeñas o más grandes que los huevos de Capillaria encontrados en Lofa (12,13). Debido a que los tapones polares de estos huevos son menos prominentes que los de T. trichiura, y debido a que sus formas a veces son más ovaladas o redondas, también se pueden confundir con los huevos de A. lumbricoides mediante microscopía de baja potencia, especialmente si solo se detectaron unos pocos huevos (Figura).

Huevos de helmintos encontrados en muestras de heces de personas en el condado de Lofa, Liberia. A, B) Huevos de Trichuris trichiura en muestras positivas para T. trichiura por frotis de Kato-Katz y por qPCR. C-F) Huevos de Capillaria spp. en muestras positivas para T. trichiura por frotis de Kato-Katz, pero negativas para T. trichiura por qPCR. G) Huevo de Capillaria spp. en la muestra, positivo para Ascari lumbricoides por frotis de Kato-Katz, pero negativo para A. lumbricoides por qPCR. H) Huevo de A. lumbricoides en muestra positiva para A. lumbricoides por frotis de Kato-Katz y qPCR. Las barras de escala indican 20 µm. qPCR, PCR cuantitativa.

Los miembros de la subfamilia Capillaridae son parásitos animales con ciclos de vida algo divergentes, y la mayoría no infectan a los humanos. Se producen pseudoinfecciones con C. hepatica; los huevos encontrados en las heces están presentes porque se consumieron en el hígado de animales infectados. Sin embargo, las infecciones reales con C. hepatica no conducen al paso de óvulos en las heces (9). Otras especies como C. philippinensis causan infecciones verdaderas (y autoinfección) con huevos encontrados en las heces; la infección está relacionada con el consumo de pescado crudo. No se ha notificado capilariasis humana en Liberia, y solo se han publicado informes de casos aislados de África subsahariana (7-9). Realizamos secuenciación de ADN para caracterizar mejor las especies de Capillaria que se encuentran en Foya. Utilizando los cebadores Kt875351.1 (5′-CCCTAGTTGCGACTTTAACGA – 3′) y Capillaria 18S1R (5′-TCCACCAACTAAGAACGGCC-3′), pudimos amplificar y secuenciar una porción de 288 bp del ADNr 18S de muestras qPCR negativas de T. trichiura que contenían solo huevos morfológicamente identificados como Capillaria spp. (GenBank accession no. MG859285). El fragmento de ADN era 100% idéntico a los ortólogos de C. hepatica(número de adhesión. MF287972. 1), Aonchotheca putorii (C. putorii) (número de adhesión. LC052356. 2), y Pearsonema plica (C. plica) (adhesión no. MF621034. 1), especies de gusanos Capillaria que tienen ciclos de vida y especies hospedadoras variables, pero que son solo 95% idénticas al ortólogo de T. trichiura.

El ciclo de vida y la importancia médica de las especies de Capillaria que se encuentran en los seres humanos en el noroeste de Liberia están por dilucidar. En nuestro estudio, algunos sujetos mostraron altas cargas de huevos de Capilaria que pueden indicar una infección verdadera en lugar de una pseudoinfección. Sin embargo, se han notificado recuentos altos de óvulos transitorios en personas con pseudoinfecciones (7). Mientras que el consumo de carne de monte en la foya es común, el consumo de pescado crudo o poco cocido, que es necesario para la transmisión de C. philippinesis, es raro.