Resumen
La prueba del virus del papiloma humano de alto riesgo (HR-HPV) combinada con citología mejora la detección de lesiones cervicales y aumenta la duración de los intervalos de detección. Para una encuesta de HR-VPH basada en la población, la automatización de las pruebas es muy necesaria. El sistema de prueba de VPH Cobas 4800 es un ensayo completamente automatizado que puede detectar simultáneamente el VPH16, el VPH18 y otros 12 genotipos de HR-VPH agrupados. Este sistema se ha empleado para la detección de HR-VPH en varios países; sin embargo, no se ha documentado tal aplicación en una gran población de China. En este estudio, empleamos el Sistema de Prueba de VPH Cobas 4800 para detectar HR-VPH en muestras citológicas cervicales recolectadas de un total de 5650 mujeres asintomáticas de una región del sur de China. Reportamos lo siguiente: (1) la prevalencia de los 14 genotipos de HR-VPH fue de 12,96%; (2) para aquellos con infección por HR-VPH, 2,25% fueron positivos para VPH16, 0,50% para VPH18, 9,15% para 12 tipos de VPH agrupados y 1,06% para infección múltiple por VPH; y (3) no hubo diferencia significativa en la prevalencia de HR-VPH entre los diferentes grupos de edad. Se ha demostrado que el VPH16 y el VPH18 son los tipos predominantes de VPH encontrados en pacientes con cáncer de cuello uterino en algunas regiones de China, lo que indica que un ensayo totalmente automatizado como el Sistema de prueba de VPH Cobas 4800 es especialmente valioso para el cribado de HR-VPH basado en la población en estas regiones, ya que este ensayo puede detectar simultáneamente el VPH16 y el VPH18.
1. Introducción
El virus del papiloma humano (VPH) es un virus ADN de doble cadena de la familia Papillomaviridae . Se han identificado más de 200 genotipos de VPH, entre los cuales 15 (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68, 73, y 82) están altamente asociados con el cáncer de cuello uterino . El cáncer de cuello uterino es el cuarto cáncer más común en mujeres en todo el mundo y el sexto cáncer más común en mujeres en China . Para reducir la carga del cáncer de cuello uterino, la identificación temprana de las lesiones cervicales que probablemente evolucionen a cáncer invasivo es de suma importancia. La citología cervical desempeña un papel importante en la prevención del cáncer cervical . La adición de la prueba del VPH a la citología da lugar a un aumento de la detección de lesiones cervicales de alto grado y, por lo tanto, se recomienda incorporar la detección del VPH de alto riesgo (HR-VPH) a la citología para mejorar la detección de la enfermedad y aumentar la duración de los intervalos de detección .
Hasta la fecha, se han notificado varios métodos para el genotipado y la detección del VPH . Para el cribado basado en la población, la automatización de pruebas es especialmente útil, ya que posee la capacidad de procesar una gran cantidad de muestras en poco tiempo y reducir los errores humanos que pueden ocurrir en las operaciones manuales. El Sistema de Prueba de VPH Cobas 4800 (Roche Molecular Systems Inc., Rotkreuz, Suiza), totalmente automatizado, está diseñado para detectar simultáneamente un total de 14 tipos de HR-HPV: HPV16 individualmente, HPV18 individualmente y 12 genotipos de HR-HPV agrupados (31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, y 68). Este sistema ha sido aprobado por la Administración de Alimentos y Medicamentos de los Estados Unidos para la detección de HR-VPH. El Cobas 4800 HPV Sistema de Prueba consta de 2 partes, es decir,, un instrumento Cobas x 480 que se utiliza para la automatización de la purificación de ácidos nucleicos y el pipeteo de muestras de PCR y un analizador Cobas z 480 que es para la amplificación automática de PCR en tiempo real y la posterior hibridación específica de tipo. Aunque se ha notificado el uso del Sistema Cobas 4800 para la prueba de HR-VPH en varios países , no se ha documentado dicha aplicación en una gran población de China. En este estudio, empleamos el Sistema de Prueba de VPH Cobas 4800 para detectar HR-VPH en muestras citológicas cervicales recolectadas de un total de 5650 mujeres asintomáticas.
2. Métodos
Este estudio fue aprobado por el Comité de Revisión de Investigaciones Médicas del Hospital Zhongshan de Medicina Tradicional China. Se obtuvo el consentimiento informado de todos los participantes.
2.1. Recolección de muestras cervicales
Las mujeres asintomáticas de 20 a 65 años se inscribieron de enero de 2018 a diciembre de 2018 para este estudio con el costo de las pruebas cubierto por los sujetos del estudio o sus empleadores o en combinación. Los criterios de inclusión incluyen tener 20 años o más, no estar embarazada, tener el útero intacto, ser sexualmente activo o tener antecedentes de actividad sexual. Todos los sujetos fueron informados de no usar medicamentos vaginales, anticonceptivos vaginales o lubricantes durante 48 horas antes de la toma de muestras cervicales. Las muestras de citología cervical se recolectaron utilizando el dispositivo combinado Cervex-Brush (Dispositivos Médicos Rovers) de la siguiente manera: la parte de muestreo endocervical del dispositivo se insertó en el canal endocervical para permitir que las cerdas laterales entren en contacto completo con el ectocérvix, y luego el dispositivo se giró dos vueltas completas en el sentido de las agujas del reloj. Después de la extracción, el dispositivo con las células recolectadas se insertó inmediatamente en un vial que contenía solución PreservCyt (Hologic Inc., Bedford, MA, USA) y vigorosamente en espiral. Se utilizaron muestras para la detección de ADN del VPH como se describe a continuación.
2.2. La detección de HR-VPH Utilizando el Sistema de Prueba de VPH Cobas 4800
Tampón de Lisis, Tampón de Lavado, Tampón de Elución, Kits de Control Positivo y Negativo para VPH y todos los demás reactivos se compraron a Roche Molecular Systems Inc. Cada muestra tenía un control interno, β-globina, para monitorear la adecuación celular, y cada corrida incluyó un conjunto de Controles Positivos y Negativos para el VPH. La extracción y purificación de ADN se realizaron con el instrumento Cobas x 480 de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Brevemente, las muestras de la Solución PreservCyt se agitaron en vórtice y se colocaron en el portador de la muestra, y los reactivos, por ejemplo, Tampón de Lisis, Tampón de Lavado y Tampón de Elución, se cargaron en los respectivos portadores del depósito de reactivo. Después de la carga de la muestra y el reactivo, la preparación de ADN se completó automáticamente y los productos finales de ADN se recogieron en una placa de microondas. Posteriormente, la placa de microondas que contenía ADN se selló manualmente y se cargó en el analizador Cobas z 480, y la amplificación y la hibridación se completaron automáticamente.
2.3. Análisis estadístico
El análisis estadístico se realizó con el programa SPSS 13.0 (IBM Corp., Armonk, NY, EE. UU.). Se utilizó el test de la χ2 para evaluar variables categóricas. Todas las pruebas estadísticas fueron de 2 lados, y los valores menores de 0,05 se consideraron estadísticamente significativos.
3. Resultados
Un total de 5650 mujeres asintomáticas de 20 a 65 años con una edad media de años cumplieron los requisitos del estudio y fueron incluidas en este estudio. De estos participantes, 732 (12,96%) se detectaron como HR-HPV positivo, incluidos 127 (2,25%) con infección por HPV16, 28 (0,50%) con HPV18, 517 (9,15%) con grupos de 12 tipos de HPV y 60 (1,06%) con infección múltiple por HPV (VPV16 mezclado con HPV18, VPV16 mezclado con 12 tipos agrupados, VPV18 mezclado con 12 tipos agrupados, o HPV16 mezclado con HPV18 y 12 tipos agrupados) (Tabla 1).
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Las infecciones múltiples por VPH incluyen VPH16 mezclado con VPH18, VPH16 mezclado con 12 tipos agrupados, VPH18 mezclado con 12 tipos agrupados, o VPH16 mezclado con VPH18 y 12 tipos agrupados.
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De acuerdo con la edad, los participantes se dividieron en 4 grupos: 20-30, 31-40, 41-50 y >51 años. Como se muestra en la Tabla 2, el grupo de 31-40 años tuvo la tasa de infección por HR-VPH más alta de 15,32%, seguido de los grupos de >50 años, 41-50 años y 20-30 años, aunque no se observó significación estadística entre las tasas de infección de estos grupos.
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4. Discusión
En este estudio, utilizamos el Sistema Cobas 4800 para detectar HR-HPV en 5650 mujeres asintomáticas y encontramos lo siguiente: (1) la prevalencia de los 14 genotipos de HR-HPV fue del 12,96%; (2) de las 732 mujeres HR-HPV positivas, el 2,25% fueron positivas para el VPH16, el 0,50% para el VPH18, el 9,15% para los 12 tipos de VPH agrupados y el 1,06% de infección múltiple por VPH; y (3) no hubo diferencia significativa en la prevalencia de HR-VPH entre los diferentes grupos de edad.
Tanto la Prueba de VPH de Alto Riesgo en Tiempo Real de Abbott Molecular Inc. (Des Plaines, IL, EE. UU.) y el Sistema de pruebas de VPH Cobas 4800 son ensayos basados en PCR completamente automatizados y validados clínicamente para la detección de HR-VPH. Una ventaja de estos 2 ensayos es que pueden detectar y distinguir simultáneamente el VPH16 y el VPH18, lo que es importante para la detección del cáncer de cuello uterino, ya que el VPH16 y el VPH18 representan aproximadamente el 70% de los cánceres de cuello uterino en todo el mundo . Pocos estudios han comparado estos 2 ensayos para detectar HR-HPV en muestras clínicas. Park et al. se analizaron 365 muestras de hisopo cervical y se informó que la Prueba de VPH de Alto Riesgo en Tiempo Real presentó una sensibilidad de 78,3% con una especificidad de 99,2%, mientras que la sensibilidad y especificidad del Sistema Cobas 4800 fueron de 91,7% y 97,0%, respectivamente . Cuzick et al. se sometió a exámenes de detección a 6.000 mujeres y se reveló que el Sistema Cobas 4800 detectó un 16,0% de ser HR-HPV positivo, mientras que el 13,4% se detectó ser HR-HPV positivo mediante la Prueba de VPH de Alto Riesgo en Tiempo Real . Estos datos indican que el sistema Cobas 4800 posee una mayor sensibilidad de detección.
La Organización Mundial de la Salud incluyó en 2016 varios sistemas moleculares validados clínicamente para la detección de ADN HR-VPH en el manual Integrating HPV Testing in Cervical Cancer Screening Programs-a Manual for Program Managers (https://www.paho.org/hq/dmdocuments/2016/manual-VPH-English—FINAL-version.pdf). Estas pruebas consisten en ensayos basados en hibridación, es decir, la técnica de Captura Híbrida 2 y la prueba de careHPV, y ensayos basados en PCR, p. ej., la prueba de VPH Cobas, la prueba de VPH de alto Riesgo en tiempo real de Abbott, la prueba de HR de VPH Cervista y la prueba de VPH BD. Todos los ensayos basados en PCR requieren aislamiento de ADN, mientras que los ensayos basados en hibridación no lo hacen. De todos los métodos, la Prueba de HPV HR de Cervista tarda de 6 a 7 horas y la prueba de HPV de Alto Riesgo en Tiempo Real de Abbott tarda de 6 a 8 horas en ejecutarse, lo que puede no cumplir con el objetivo de «ver y tratar» el mismo día. Por el contrario, todos los métodos de reposo, incluido el Sistema Cobas 4800, requieren un tiempo de ejecución máximo de aproximadamente 5 horas, adecuado para que los pacientes completen «consulta y tratamiento» en una sola visita.
A nivel mundial, la prevalencia de HR-VPH varía de un continente a otro . En China, para la encuesta de prevalencia de HR-VPH, se han utilizado diferentes métodos . Wu et al. se empleó el ensayo Hybrid Capture 2 (Qiagen, Hilden, Alemania) para la detección de HR-HPV de 13 tipos agrupados (HPV16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, y 68) en un total de 4215 mujeres de 17 a 54 años de 5 áreas geográficas diferentes de China y descubrieron que la prevalencia de HR-VPH era del 12,4% . Usando el mismo método que Wu et al. , Zhao et al. encontré ese 15.el 2% de 1.274 mujeres de una región del norte de China fueron positivas para HR-VPH . Chen et al. Se empleó un Kit de genotipado de VPH (Yaneng Biotechnology Limited Corp., Shenzhen, China) para un total de 961,029 pruebas de VPH para mujeres de 16 a 83 años del sudeste de China y se reveló una tasa de infección por HR-VPH de 16.61% . Jing et al. se aplicó un ensayo espectrométrico de masas para la prueba de ADN del VPH en 78.355 mujeres de 18 a 75 años del sur de China y se notificó una tasa de prevalencia de HR-VPH <7,3%. Estos estudios demuestran una tasa de infección por HR-VPH de aproximadamente 10-15% en mujeres chinas, lo que está de acuerdo con nuestro hallazgo. Sin embargo, el método utilizado en el presente estudio es más simple y menos laborioso en comparación con los utilizados en investigaciones anteriores .
Dos estudios con el mayor tamaño de muestra realizados en China compararon las tasas de prevalencia de HR-VPH entre grupos de edad. Zeng et al. se analizaron retrospectivamente 671.163 pruebas de VPH realizadas utilizando el método de Captura Híbrida 2 de 2007 a 2014 y se demostró la prevalencia más alta de HR-VPH de 36.el 9% en el grupo de edad de <20 años, mientras que las tasas de HR-VPH positivas para los grupos de edad de 20-30, 30-40 y 40-50 años fueron del 24,4%, 19,7% y 19,9%, respectivamente . Pruebas de HR-VPH con el mayor tamaño de muestra (961.029 muestras) realizadas por Chen et al. nuevamente muestra la tasa de prevalencia más alta de HR-HPV en el grupo de edad de <20 años (22,3%), mientras que las tasas de prevalencia para los grupos de edad de 20-30, 30-40 y 40-50 años son del 16,8%, 15,2% y 15,9%, respectivamente . Estos estudios revelan una tasa de prevalencia ligeramente superior en el grupo de 20-30 años que en los grupos de 30-40 y 40-50 años, lo que contrasta con nuestros resultados, ya que observamos la menor prevalencia de HR-VPH en el grupo de 20-30 años. Esta discrepancia puede ocurrir debido a los siguientes factores: (1) las mujeres más jóvenes hoy en día tienen más acceso a los programas de educación para la salud, especialmente los programas en línea que utilizan dispositivos electrónicos, y (2) las mujeres más jóvenes están más ansiosas por aprender y aceptar nuevos conocimientos sobre saneamiento y salud sexual.
El VPH16 es el tipo más común de HR-HPV encontrado en muestras cervicales de mujeres de las regiones del Norte (provincias de Beijing y Henan, Shanxi y Xinjiang), Sudeste (Provincias de Shanghai y Zhejiang) y Sur de China (Provincia de Guangdong), con una tasa positiva que varía de 1,5 a 3,6%, lo que coincide con una tasa de infección por VPH16 del 2,25% observada en los sujetos de nuestro estudio que son del sur de China. El VPH16 es responsable de aproximadamente el 50% del cáncer de cuello uterino en todo el mundo . Si bien la información sobre la distribución del genotipo HR-HPV en pacientes chinas con cáncer de cuello uterino es todavía limitada, Li et al. se informó de que 1.818 de 2.309 pacientes de cáncer de cuello uterino (78,7%) de China occidental dieron positivo para VPH16, y aproximadamente 90% de estos pacientes dieron positivo para VPH16 y VPH18 . También se observó una tasa de infección del 53,2% por VPH16 y VPH18 en 326 pacientes con cáncer de cuello uterino de la provincia de Fujian, en el sudeste de China . Estos datos indican que el VPH16 y el VPH18 son los tipos predominantes de VPH encontrados en pacientes con cáncer de cuello uterino en estas regiones. Un ensayo completamente automatizado, como el Sistema de prueba de VPH Cobas 4800, que puede detectar y diferenciar simultáneamente el VPH16 y el VPH18, será especialmente valioso para la detección de HR-VPH basada en la población en regiones que tienen una dominancia de infección por VPH16 y VPH18.
Disponibilidad de los datos
Los datos utilizados para respaldar los hallazgos de este estudio están disponibles a solicitud del autor correspondiente.
Conflictos de intereses
Los autores declaran no tener conflictos de intereses.
Contribuciones de los autores
SW, XH, QP y LZ reclutaron a los participantes, recolectaron muestras y realizaron pruebas. SW y JZ escribieron el artículo. La FM revisó la literatura y realizó análisis estadísticos. JZ diseñó el estudio, analizó los datos y finalmente aprobó el manuscrito.