El laboratorio de diagnóstico veterinario estatal, el Laboratorio de Diagnóstico Médico Veterinario de Texas A&M, TVMDL, prueba cientos de miles de muestras anualmente. Sin embargo, al borde de la temporada de caza de ciervos de cada año, el número de pruebas comienza a aumentar a medida que aumenta la demanda de pruebas para enfermedades de desgaste crónico, CWD.
¿Qué es la Caquexia Crónica?
La ERC es una enfermedad neurológica progresiva que afecta a varias especies de cérvidos. Las especies susceptibles a la enfermedad son el venado de cola blanca, el venado de cola negra, el venado mula, el alce, el venado rojo, el reno, el sika y el alce. Desde que se reportó por primera vez en 1967, se ha documentado en especies de cérvidos en cautividad y en libertad en 25 estados y tres provincias canadienses.
La enfermedad de los ciervos zombis ha ganado cierta atención en los últimos años a medida que surgieron informes de una «enfermedad de ciervos zombis» y se extendió a varios medios de comunicación. Aunque pegadizo ,la «enfermedad del ciervo zombi» es en realidad un nombre inapropiado, ya que los animales afectados con CWD no están muertos. Una vez afectado, el animal infectado puede tardar de dos a cuatro años en comenzar a mostrar signos clínicos, que pueden imitar un comportamiento «similar a un zombi» a medida que avanza la enfermedad. Los animales afectados exhiben signos como pérdida de peso, babeo, tropiezos y estupor. Esta combinación de signos clínicos culmina en un animal que parece «consumirse», acuñando el nombre real de la enfermedad.
Similar a la encefalopatía espongiforme bovina, EEB, en bovinos y tembladera en ovinos y caprinos, la EET es una encefalopatía espongiforme transmisible natural, EET o enfermedad priónica. Los priones son proteínas anormales y extremadamente difíciles de destruir. Una vez infectados, los priones afectan inicialmente los ganglios linfáticos del animal y, después de diseminarse por el cuerpo, eventualmente infectan el cerebro.
En 2012, el CWD se descubrió por primera vez en Texas en ciervos mulos de cría libre en las montañas Hueco. Desde entonces, la enfermedad se ha seguido detectando en las regiones del oeste de Texas y Panhandle en ciervos mulos, ciervos de cola blanca y alces.
Aunque el historial de EQT en Texas ha sido corto en comparación con otros estados, las pruebas de diagnóstico continúan aumentando a medida que las agencias estatales intentan controlar la enfermedad. En Texas, TVMDL es el único laboratorio aprobado para realizar pruebas de la enfermedad de Crohn.
Remitentes De CWD: ¿Quiénes Son?
El año pasado, TVMDL realizó aproximadamente 26,500 pruebas de CWD. Del número total de pruebas, casi la mitad se realizaron de octubre a diciembre. Este aumento en las solicitudes de CWD coincide con la temporada de caza de ciervos en Texas.
Los cazadores deben cumplir con ciertas pautas durante la temporada de ciervos debido a los programas del Departamento de Parques y Vida Silvestre de Texas, TPWD, destinados a mitigar la propagación de la CWD. Por ejemplo, si un ciervo es asesinado en un CWD-puesto en cuarentena la zona, las muestras deben ser recolectadas y enviadas para CWD pruebas. La recolección de muestras se lleva a cabo en estaciones de control de cazadores, instalaciones de procesamiento de ciervos y, a veces, taxidermistas.
Las solicitudes de pruebas de CWD son enviadas por agencias estatales, como TPWD y la Comisión de Salud Animal de Texas, TAHC y criadores de ciervos. TVMDL brinda servicio a estas agencias y a la industria de los ciervos para ayudar con los esfuerzos continuos para rastrear la propagación de enfermedades como la CWD.
Detección de la enfermedad
Una vez en el laboratorio, TVMDL analiza las muestras a través de uno de dos métodos: ensayo de inmunoabsorción enzimática, ELISA o inmunohistoquímica, IHQ. Ambos métodos de prueba requieren que se recuperen tejidos de los ganglios linfáticos u obex de un ciervo.
Prueba ELISA
El método más solicitado es la prueba ELISA. Este método es la opción más sensible porque utiliza tejidos frescos en lugar de tejidos fijos en un agente conservante. Todo el proceso, excluyendo el tiempo de preparación de la muestra, generalmente toma alrededor de tres horas. Una vez que una muestra llega a la sección de serología de TVMDL, comenzará la primera de tres fases: preparación de la muestra.
Durante la preparación de la muestra, se cortan volúmenes precisos y ubicaciones anatómicas de tejidos de ganglios linfáticos u obex y se colocan en tubos de molienda únicos. Los tubos se colocan en un instrumento homogeneizador que licua los tejidos y los prepara para la segunda fase de prueba, la purificación.
La fase de purificación está semiautomatizada. Un instrumento de manejo de líquidos comienza con el procesamiento de la muestra. Este proceso digiere priones normales usando proteinasa K y deja priones causantes de enfermedades, si hay alguno presente. Después, el producto final líquido del proceso de purificación se centrifuga para formar un pellet. El pellet se trata una segunda vez y luego se diluye. El pellet pasará entonces a la fase final de prueba y determinará si hay priones de CWD presentes.
La detección es la fase final del proceso de prueba ELISA. En esta fase, el pellet de muestra diluido se prueba utilizando un ELISA sándwich. Un ELISA sándwich utiliza dos capas de anticuerpos para determinar la concentración de un antígeno en particular, en este caso el prión CWD. Durante el proceso, se agrega un sustrato que cambia de color como indicador visual de la presencia de priones de ERC en la muestra. Si una muestra desarrolla un cambio de color significativo, se considera un «reactor inicial», IR, y se vuelve a probar. Las muestras de IR que aún indican la presencia de priones con EQC después de la repetición de las pruebas se envían al Servicio de Inspección de Sanidad Animal y Vegetal del Departamento de Agricultura de los Estados Unidos, al USDA – APHIS, al Laboratorio Nacional de Servicios Veterinarios.
Prueba IHQ
La segunda opción de prueba de CWD de TVMDL, IHQ, utiliza tejidos fijos o conservados. Si los tejidos llegan a TVMDL frescos o no bien fijos, se agrega un día al proceso para dar tiempo a que los tejidos se fijen en formalina hasta que estén listos para la prueba.
Una vez bien fijados, los tejidos se colocan en casetes de plástico etiquetados individualmente. Los casetes son necesarios para el siguiente paso en el que los tejidos se procesan durante aproximadamente 13 horas. Durante este tiempo, los tejidos se deshidratan y toda el agua se reemplaza con cera de parafina para preservar la estructura celular del tejido.
Después del procesamiento, los tejidos se incrustan en un molde de cera de parafina para prepararlos para seccionar utilizando un microtomo. Este instrumento corta el bloque de tejido de cera en secciones de 5 micras de espesor, más finas que una hebra de cabello humano.
La sección delgada de tejido se monta en un portaobjetos de vidrio. Después de secarse durante la noche, los portaobjetos de vidrio se preparan para la tinción. Los portaobjetos se tratan para eliminar la parafina y garantizar que los sitios de unión a antígenos estén disponibles durante el proceso de tinción. Este proceso identifica los antígenos de la ERC en el tejido mediante la unión de una molécula antiprión al antígeno de la ERC en el tejido positivo y, a continuación, la unión de un cromógeno rojo a esa molécula.
Este proceso de tinción semiautomático toma aproximadamente seis horas en total; dos horas de trabajo manual y cuatro horas automatizadas. Durante este período, los tres instrumentos de tinción pueden teñir 90 portaobjetos de vidrio. Cuando se completa la tinción, todos los portaobjetos se cubren y se entregan a patólogos de TVMDL que inspeccionan microscópicamente cada portaobjeto para detectar la presencia de CWD.
De forma similar al método de prueba ELISA, si se sospecha que una muestra tiene ERC, se envía al Laboratorio del Servicio Veterinario Nacional en Ames, Iowa, para realizar pruebas confirmatorias y un diagnóstico final.
La diferencia de TVMDL
Aunque otros laboratorios en los Estados Unidos ofrecen pruebas de CWD, TVMDL se distingue por su dedicación a las personas en la industria de los ciervos de Texas. La agencia trabaja en estrecha colaboración con otras agencias estatales y criadores de ciervos para establecer relaciones de trabajo y conexiones personales.
Para obtener más información sobre las pruebas de CWD en TVMDL, visite tvmdl.tamu.edu o llame al laboratorio de College Station al 1-888-646-5623.