Cuando piensas en separar proteínas, ¿piensas en separarlas usando un gel? ¿Específicamente usando SDS-PAGE? Si respondiste «sí», es por una buena razón. SDS-PAGE es ubicuo en los laboratorios de biología molecular porque es bueno para separar proteínas. Sin embargo, SDS-PAGE lleva mucho tiempo y requiere mucha mano de obra. Así que ampliemos su caja de herramientas y veamos otra forma de separar las proteínas: la electroforesis en gel capilar.
Electroforesis en gel capilar (CGE), también denominada electroforesis de tamizado capilar, también denominadaa. La electroforesis en gel capilar SDS separa las proteínas en un gel a través de columnas rellenas con un medio de separación.
Requisitos del equipo
En la electroforesis en gel capilar, sus analitos (las proteínas que desea estudiar) migran a través de una solución electrolítica a través de los capilares mediante la fuerza de tracción de un campo eléctrico, no muy diferente de la PÁGINA SDS más familiar. Para realizar CGE necesita: un vial de muestra, viales de origen y destino, matriz de tamizado, columna capilar, un detector en columna, un dispositivo de salida y manejo de datos y una fuente de alimentación de alto voltaje.
Protocolo en breve
En un experimento CGE, la muestra comienza en el vial de origen y se dirige hacia el vial de destino. Aquí está el protocolo en resumen:
Paso 1: Los viales de origen y destino, así como el capilar que los conecta, se llenan con una solución electrolítica y la muestra se introduce en el capilar.
Paso 2: Una vez aplicado el campo eléctrico, los analitos migran del lado del vial de origen al lado del vial de destino.
Paso 3: El detector en columna (no es sorprendente) permite la detección en columna. El detector envía datos a un dispositivo de salida y manejo de datos, como una computadora.
Paso 4: Estos datos se muestran como un electropherograma. Los analitos se leen como picos de varios tiempos de retención.
Para encontrar más detalles sobre cómo funciona esto, visite el útil material de UC Davis.
Más información sobre la matriz
Su matriz de tamizado puede estar compuesta de una serie de materiales polimerizados, incluidos poliacrilamida reticulada, dextrano y poli(etilenglicol u óxido de etileno). Sus columnas generalmente están hechas de polímeros de tamizado reemplazables. Depende de usted si hace sus propias columnas o las compra. Beckman Coulter, Agilent Tech y Bio-Rad Laboratories venden kits de tamizado, pero sepan que estos también requieren el uso de sus instrumentos CGE.
Por qué Debería Usar CGE
Ahora que ha oído hablar de lo que es CGE, ¿por qué debería usarlo?
- Tiene tiempos de operación más cortos. El funcionamiento de un CGE tarda de 10 a 100 veces menos en completarse que la electroforesis en gel de losa.
- Hay menos pasos en un experimento CGE que en un experimento SDS-PAGE. Esto se debe a que los resultados finales del experimento CGE son dados por una computadora conectada al aparato.
- El CGE también es más adecuado para proteínas pequeñas que el SDS-PAGE tradicional.
- Puede analizar sus proteínas en tiempo real con CGE.
- El equipo CGE se puede usar repetidamente, sin necesidad de hacer geles interminables.
- Por último, gran parte del proceso es automático. Una vez que haya agregado su muestra, ¡habrá terminado! Esto significa que no tiene que supervisar el proceso como lo hace con un gel o llevarlo a un equipo de detección especial tan pronto como el gel se haya ejecutado.
Por qué NO debe Usar CGE
Bueno, la verdad sea dicha a pesar de que CGE ha existido en su forma actual durante más de una década y se han realizado muchos avances técnicos, CGE todavía sufre de problemas de reproducibilidad. Otro problema es que las separaciones por CGE se realizan en serie. Esto significa que con CGE no puede comparar carriles de manera conveniente. Por último, cuando se trata de geles 2D, CGE no puede competir con la separación 2D tradicional.
En resumen, si bien algunos investigadores están exclamando con orgullo los usos de la tecnología CGE, todavía hay una serie de problemas con ella. ¡Pero no descartes a CGE todavía! El último impulso en esta área es el microchip CGE, que muestra mucha promesa para el análisis de proteínas de alta velocidad. Así que la próxima vez que pienses en la separación de proteínas no olvides el CGE.
¿Ha probado CGE? ¿Cómo te gusta en comparación con SDS-PAGE?