Los productos farmacéuticos de anticuerpos monoclonales (mAb) han atraído un interés significativo debido a su fuerte potencia terapéutica y especificidad para tratar enfermedades inflamatorias, oncológicas y autoinmunes. Debido a su complejidad intrínseca debido a un gran número de microheterogeneidades, existe una necesidad crucial de métodos analíticos para proporcionar una caracterización exhaustiva y en profundidad de las moléculas candidatas.
Creative Biolab proporciona una gran cantidad de técnicas analíticas para la caracterización de anticuerpos y la evaluación de la homogeneidad en todas las etapas del descubrimiento de aBm, el desarrollo preclínico y clínico. Aquí, presentamos la aplicación de enfoque isoeléctrico capilar (cIEF) para el análisis de heterogeneidad de carga de anticuerpos. Es ampliamente utilizado para la caracterización de mAbs terapéuticos. Al determinar el pI de las isoformas de carga de mAb, el cIEF proporciona información crucial para establecer la identidad, la pureza, las modificaciones post-traduccionales y la estabilidad.
Introducción a cIEF
cIEF se basa en el principio de electroforesis en gel capilar. La electroforesis es una técnica de separación basada en la velocidad diferencial de movimiento de especies cargadas en un campo eléctrico, hacia el electrodo de carga opuesta. Para separar moléculas basadas en el punto isoeléctrico (pI), se establece un gradiente de pH dentro del gel mediante el uso de mezclas de anfolitos. Bajo el campo eléctrico, las moléculas migran a lo largo del campo eléctrico hasta alcanzar el pH correspondiente al pI, donde se equilibran las cargas positivas y negativas en las moléculas. La absorción UV en todo el capilar se mide a lo largo de la separación, lo que permite la observación en tiempo real y una cuantificación final.
Fig.1 Principio de enfoque isoeléctrico. (Pergande, 2017)
cIEF para Caracterización de Heterogeneidad de carga
Los mAbs son susceptibles a diversas modificaciones post-traduccionales (p. ej., glicosilación, fosforilación, oxidación y recorte de lisina), dando lugar a variantes de carga. Algunas de estas variantes de carga pueden tener un posible efecto en la actividad biológica y la seguridad de la molécula en diversos grados. Por ejemplo, el perfil de glicosilación de los mAbs influye en gran medida en la actividad biológica de la proteína. En consecuencia, el monitoreo rutinario de la heterogeneidad de la carga de mAb es una parte integral de cualquier plan de gestión de la calidad y el ciclo de vida del producto. También es uno de los aspectos analíticos más importantes de los estudios de desarrollo y comparabilidad biosimilares. Como técnica de separación basada en carga, cIEF es una herramienta poderosa para caracterizar el perfil de carga de los MAB, ya que se pueden distinguir diferentes variantes de carga de acuerdo con su pI mediante calibración interna. Como cIEF proporciona una reproducibilidad y especificidad muy altas, esta es una de las herramientas más populares para el análisis de mAb.
Características de Nuestros Servicios
- Caracterización de variantes de tamaño y carga de mAbs intactos y reducidos con cIEF
- Análisis de las variantes de carga de MABS mediante un enfoque ortogonal
- Separación cIEF seguida de análisis por espectrometría de masas (MS)
- Servicios personalizados de acuerdo con los requisitos específicos
Creative Biolabs también ofrece una amplia gama de ensayos de función de anticuerpos para ayudar a comprender los efectos de las variantes de carga en la actividad y las propiedades de los anticuerpos, como las funciones efectoras, el FcRn y la unión a antígenos afinidad y PK, dilucidando así las relaciones estructura-función. Si está interesado en nuestro servicio, contáctenos para discutir sus requisitos.