Comparación de los métodos SEC y CE-SDS para monitorear la fragmentación de bisagras en anticuerpos monoclonales IgG1

La fragmentación de anticuerpos monoclonales es un atributo de calidad crítico que se supervisa rutinariamente para evaluar la pureza e integridad del producto desde el desarrollo hasta la comercialización. La hendidura en la región de la bisagra superior de los anticuerpos monoclonales IgG1 es un patrón de fragmentación común ampliamente estudiado por cromatografía de exclusión de tamaño (SEC). La electroforesis capilar con dodecilsulfato de sodio (CE-SDS) es una técnica bien establecida que se usa comúnmente para monitorear fragmentos de anticuerpos, pero su comparabilidad con la SEC en el monitoreo de fragmentos de bisagras no se ha establecido hasta ahora. Presentamos una estrategia de caracterización que establece la correlación entre los fragmentos de la región de la bisagra analizados por SEC y CE-SDS. Se generaron anticuerpos monoclonales con fragmentos de bisagra elevados en condiciones de bajo esfuerzo de pH y se analizaron mediante SEC y CE-SDS. Las masas de los fragmentos generados fueron determinadas por LC-MS. La migración electroforética de los productos de fragmentación de bisagras en CE-SDS se determinó en función de sus valores de masa. La evaluación comparativa de fragmentos por SEC y CE-SDS mostró una correlación similar con el tiempo de incubación. Este estudio demuestra que el CE-SDS puede ser empleado como técnica sustituta de SEC para el monitoreo de fragmentos de la región de la bisagra. Lo que es más importante, la combinación de estas técnicas se puede utilizar para obtener una comprensión completa de las características relacionadas con fragmentos de productos proteicos terapéuticos.

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