Aunque la mayor parte del trabajo sobre infecciones por clamidia de pequeños rumiantes se refiere a ovejas, la clamidiosis tiene un impacto económico y de salud pública en numerosas granjas caprinas de todo el mundo. Los abortos por clamidia se reportaron por primera vez en Alemania en 1959.Después se diagnosticó la enfermedad en Bulgaria, España, Estados Unidos, Francia, India, Japón, Reino Unido, Chad, Grecia y Túnez. En muchas áreas, el aborto por clamidia es la segunda causa de abortos infecciosos después de la brucelosis, y la causa principal en la mayoría de los países donde la brucelosis está controlada
Etiología
La enfermedad se debe a una pequeña bacteria Gram negativa, Chlamydia psittaci, que crece en el citoplasma de las células eucariotas en un ciclo único de desarrollo en el que una forma infecciosa resistente, los cuerpos elementales (EB) se alternan con una forma no infecciosa metabólicamente activa, los cuerpos reticulados Presupuesto ordinario). El EB se une a la membrana de la célula huésped y promueve su propia endocitosis en una vacuola limitada a membrana llamada inclusión, que no se fusiona con los lisosomas. Luego el EB se transforma en RB, que se replica por fisión binaria. Después de varias divisiones, los RBs, que llenan toda la inclusión, se transforman de nuevo en EBs infecciosos. Estos EBs se liberan a través de la lisis de la célula huésped o la extrusión de la inclusión fuera de la célula huésped .
Taxonomía
Chlamydia psittaci es una de las cuatro especies del género Chlamydia, que también incluye a Chlamydia trachomatis, Chlamydia pneumoniae y Chlamydia pecorum.
Chlamydia trachomatis y Chlamydia pneumoniae son patógenos humanos. C. psittaci infecta a una amplia variedad de aves, mamíferos y, ocasionalmente, seres humanos, y C. pecorum contamina rumiantes, cerdos y koalas. En ovejas y cabras, C. pecorum causa neumonía, conjuntivitis y artritis, pero muy a menudo se aísla de infecciones intestinales asintomáticas .
Excepto en casos muy raros, las cepas que inducen el aborto en cabras pertenecen al serotipo 1 de C. psittaci, que también es responsable de neumonía, conjuntivitis y artritis y, a veces, infecciones intestinales sin ningún signo clínico. La especie de C. psittaci es muy heterogénea y antes de la cuarta especie apareció C. pecorum .
Los análisis filogenéticos de genes ARNr 16S y 23S sugieren la existencia de nueve especies diferenciadas en Chlamydiaceae, y lead Everett et al., para proponer la creación de dos nuevos géneros Chlamydia y Chlamydophila. El género Chlamydia, que corresponde a la antigua denominación Chlamydia trachomatis, incluye 3 especies: C. trachomatis( cepas humanas), C suis (cepas porcinas relacionadas con C. trachomatis aisladas de abortos espontáneos, infecciones vaginales y pneumoniae) y C. muridarum (cepas de ratón y hámster).
El género Chlamydophila agrupa 6 especies: C. pneumoniae, C. pecorum, C. psittaci (cepas de aves anteriores de Chlamydia psittaci), C. caviae, agente de la conjuntivitis por inclusión de cobayas (GPIC), C. felis (cepas de C. psittaci que infectan a los gatos) y C. abortus (cepas de Chlamydia psittaci del serotipo clásico-1). Los resultados están de acuerdo con los obtenidos a través de análisis filogenéticos de otros cinco genes codificadores (GroEL, KDO-transferasa, MOMP, proteína rica en cisteína de 60 kDa y lipoproteína rica en cisteína) y las propiedades biológicas de las cepas . El análisis de polimorfismo de longitud de restricción (RFLP) del dominio espaciador intergenico ribosómico de los genes 16S-23S del ARNr proporciona un método rápido y reproducible para identificar y clasificar las cepas de clamidia en la nueva especie . Sin embargo, algunos miembros de la comunidad científica no están de acuerdo con la propuesta de una nueva taxonomía de clamidia, ya que no tiene en cuenta todo el genoma de la bacteria.
Signos clínicos
La clamidiosis se caracteriza clínicamente por abortos durante los últimos meses de embarazo, mortinatos o nacimientos prematuros de niños débiles con bajo peso al nacer. Los abortos se producen sin signos clínicos específicos previos, incluso si algunas cabras pueden desarrollar tos persistente sin dificultad para respirar, o artritis y queratoconjuntivitis. En infecciones experimentales, se observó un ligero flujo vaginal el día antes del aborto en algunas cabras . Las placentas retenidas y la metritis no son habituales, incluso si son más frecuentes que en las ovejas . Después del aborto, las cabras pueden recuperarse rápidamente o presentar secreción marrón de la vagina. En infecciones experimentales o en algunas infecciones naturales con una alta tasa de abortos, solo el 50% o menos de las cabras que abortaron se recuperaron rápidamente, mientras que la enfermedad postabortiva en ovejas es inusual. Esto podría deberse a diferencias de virulencia entre cepas, ya que se sabe muy poco sobre los mecanismos de virulencia de las cepas. No se pudo mostrar diferencia en la virulencia en modelos de ratón entre cepas ovinas y caprinas , pero el polimorfismo de longitud de fragmento amplificado (AFLP) reveló diferencias genómicas entre la cepa caprina AC1 y las cepas ovinas del serotipo 1 C. psittaci .
Aunque hemos demostrado que el mantenimiento de cabras infectadas podría dar lugar a sementales infectados , hasta ahora no se ha descrito epiddimitis por C. psittaci en sementales. Esto se debe probablemente al número muy reducido de estudios sobre la clamidiosis caprina, en lugar de a una mayor susceptibilidad de carneros y toros a las infecciones por clamidia.
En una bandada recién infectada, la tasa de abortos es grave. Con frecuencia, el 30% o más, a veces el 90% de las DO embarazadas pueden abortar y la producción de leche puede disminuir. La alta tasa de abortos se observa durante 2 o 3 años, después de los cuales la enfermedad adquiere un carácter cíclico: el 10% de las hembras embarazadas abortarán cada año durante varios años hasta que se produzca un nuevo brote y luego todos los niños de un año abortarán. El alto nivel de inmunidad producido después del aborto es responsable de la evolución cíclica de la enfermedad en el rebaño: es excepcional que una cabra aborte dos veces. Papp y Shewen han demostrado que algunas de las ovejas que abortaron pueden infectarse crónicamente. Los antígenos clamidiales y el ADN se pueden detectar en la vagina, el útero y los tubos uterinos durante el período periovulatorio de las ovejas que abortaron. No se ha realizado ninguna investigación para determinar la incidencia de infecciones crónicas en rebaños de cabras.
El feto no presenta una lesión macroscópica específica. Los niños que nacen cerca de término pueden estar cubiertos por material marrón. A menudo se observan edema difuso transparente o manchado de sangre , líquidos manchados de sangre en cavidades abdominales y pleurales y petequias en la lengua, en la cavidad bucal y en las pezuñas.
Transmisión de la Enfermedad
El infectado excreta grandes cantidades de clamidia en la placenta y los fluidos fetales en el momento de bromear y en el momento del aborto. Algunas cabras pueden arrojar clamidia en los fluidos vaginales desde más de dos semanas antes del aborto hasta más de dos semanas después del aborto. Esto puede explicar la mayor incidencia de abortos en rebaños de cabras recién infectados, ya que la susceptibilidad a la infección varía en relación con el estado fisiológico del animal. Las cabras que tienen menos de 100 días de gestación son más susceptibles que las que están al final de la gestación o las que son estériles. Cantidades más pequeñas de clamidia también se pueden eliminar en la orina, la leche y las heces durante varios días después del aborto.
Los cabritos nacidos de madres infectadas pueden retener la infección en el rebaño o transmitirla a otros rebaños. La encuesta de un grupo de 27 crías de un rebaño infectado durante su primer año de vida demostró cómo podían propagar la enfermedad al no ser detectados por su respuesta serológica. Estas cabras jóvenes podrían dividirse en 3 grupos de acuerdo con la gestación/parto. El primer grupo tenía un cabrito normalmente vivo, el segundo grupo era estéril o había abortado demasiado temprano en el embarazo para ser detectado y en el tercer grupo las cabras habían abortado. Los anticuerpos de fijación del complemento (CF) de los dos primeros grupos aumentaron hasta alcanzar un máximo (1/80 – 1/160) en el momento de la reproducción, luego los niveles de anticuerpos disminuyeron hasta el momento de bromear . El tercer grupo tenía un título de anticuerpos de FQ El papel de la transmisión venérea de la clamidiosis por hombres aún necesita ser investigado. Sin embargo, las infecciones genitales en carneros y toros resultan en infertilidad y esterilidad masculina en lugar de aborto en mujeres. Es necesario explorar el papel que desempeña la enfermedad en la infección intestinal no aparente y su influencia en la epidemiología del aborto por clamidia. La reciente identificación de marcadores moleculares de cepas intestinales caprinas permitiría realizar estos estudios.
Diagnóstico
El diagnóstico se realiza generalmente mediante la detección de bacterias en frotis o impresión de la placenta combinada con el análisis serológico de al menos diez muestras de sueros.
La tinción de Clamidia por los métodos de Sello, Giménez o Maquiavelo es rápida y se puede realizar fácilmente en la mayoría de los laboratorios, pero su interpretación a menudo es complicada, ya que requiere una persona experimentada para diferenciar la clamidia de Brucella y Coxiella. La inmunofluorescencia mediante conjugados de inmunoglobulina marcados con isotiocianato marcado con fluorescentes aumenta la sensibilidad y especificidad de la detección de clamidia en frotis o impresiones de placenta.
La presencia de antígenos clamidiales en la placenta molida o en hisopos vaginales muestreados justo después del aborto puede detectarse mediante ELISA con kits de diagnóstico desarrollados para infecciones humanas por C. trachomatis .
En medicina humana, la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) o su variación, la reacción en cadena de la ligasa (LCR) se consideran los métodos de diagnóstico más sensibles disponibles para el diagnóstico de clamidia. Se han desarrollado varios cebadores comunes a todo tipo de clamidia, como Omp1, el gen que codifica la proteína principal de la membrana externa , o específicos de C. psittaci o C. pecorum o del serotipo-1 de las cepas de C. psittaci para aplicación veterinaria. Pero esta técnica sigue siendo cara.
La prueba de fijación del complemento (CFT) es la más utilizada y considerada como el estándar de oro para el diagnóstico serológico. Sin embargo, la CFT no es muy sensible y no es específica porque la prueba utiliza un antígeno i común con C. pecorum, que la mayoría de las cabras albergan en su intestino. Por lo tanto, las reacciones positivas con títulos entre 1:10 y 1:40 no son específicas para el aborto, pero pueden estar relacionadas con una infección intestinal con C. pecorum. La prueba de CFT debe realizarse preferiblemente de 3 a 6 semanas después del aborto o parto, cuando la respuesta de anticuerpos esté en su nivel máximo. La prueba de CFT no se puede usar para el diagnóstico individual o para detectar infecciones en jóvenes o en hombres .
Se realizaron varios intentos para desarrollar técnicas más específicas, que distinguieran entre infecciones por C. psittaci y C. pecorum. Sin embargo, ninguna de estas pruebas fue suficientemente sensible y específica. Recientemente, se ha desarrollado un nuevo ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas indirectas (ELISA) basado en un antígeno recombinante que expresa una parte de una proteína de 80 a 90 kDa . La prueba reacciona con anticuerpos séricos inducidos tempranamente contra estas proteínas familiares multigénicas altamente inmunogénicas . Esta prueba tiene alta sensibilidad y alta especificidad .
Tratamiento
Las tetraciclinas afectan la replicación de la clamidia y pueden ser eficaces para prevenir abortos. La inyección de 20 mg/kg de oxitetraciclina administrada por vía intramuscular a los 105 y 120 días de embarazo puede prevenir el aborto, pero no puede prevenir la secreción de clamidia en broma.
Vacunación
Las vacunas muertas podrían reducir la incidencia de abortos, pero no la excreción de clamidia en broma. El aborto induce una inmunidad lo suficientemente fuerte como para resistir desafíos posteriores , se desarrolló una vacuna viva constituida con un mutante sensible a la temperatura de cepas de C. psittaci . Las cabras susceptibles se vacunaron antes del apareamiento y no se observó ninguna interferencia con la gestación posterior. Las cabras estaban protegidas contra el aborto por clamidia y se evitó el derramamiento de clamidia al bromear. Sin embargo, cuando todas las cabras de un rebaño infectado se vacunan el primer año y todos los animales de reemplazo se vacunan en los años siguientes, podrían pasar unos 3 años antes de que se interrumpan los abortos. Esto se debe a una infección latente en cabras, cabras que se infectaron antes de la vacunación pero que no habían abortado. La vacunación no cambiará el curso de una infección latente. Estas cabras pueden abortar o puede kid sanos o infectados niño a término y puede o puede no arrojar las Clamidias. Mientras las cabras con una infección latente estén presentes en un rebaño, no es aconsejable dejar de vacunar (de lo contrario, los abortos comenzarían de nuevo), ni es posible vender animales vacunados, excepto a los criadores que vacunan a su rebaño regularmente.
Perspectivas futuras
El desarrollo de una vacuna, tan eficaz como la vacuna viva mencionada, que proteja y permita la detección serológica de cabras infectadas en manadas vacunadas, sería muy útil para el control de la enfermedad. El agotamiento del» antígeno específico de diagnóstico » de la vacuna viva no es actualmente una opción, ya que aún no se dispone de metodologías genéticas y moleculares adecuadas y parece difícil eliminar esta familia de proteínas. Por estas razones, una vacuna acelular, que proteja contra el aborto y la excreción, sería de interés. Estudios previos han demostrado que los linfocitos T y B están involucrados en la inmunidad protectora . En modelos murinos, las células T CD8+ (Lyt 2 + en ratón) desempeñan un papel importante en la protección después de la transferencia de células de bazo cebadas . Hasta la fecha, C. los antígenos y epítopos de células T de psitaci son desconocidos. Aunque se debe tener precaución al extrapolar los resultados de C. trachomatis a C. psittaci, se han identificado varios epítopos de células T en la proteína principal de membrana externa (MOMP) de C. trachomatis
El papel de los anticuerpos en la prevención de la infección placentaria y fetal por C. psittaci se ha demostrado en ratones. La transferencia pasiva de sueros policlonales específicos induce una inmunidad significativa, aunque inferior a la protección mediada por células T. Anticuerpos monoclonales (Mabs) que neutralizan la C. la infectividad de psittaci in vitro confiere una inmunidad notable a los ratones preñados después del desafío intravenoso, ya que se eliminan el aborto y la colonización fetal . La inmunidad humoral está involucrada en la protección. Su eficacia depende de la concentración de anticuerpos específicos contra el epítopo apropiado. Todos los Mab protectores aislados hasta la fecha reaccionan con epítopos conformacionales termosensibles ubicados en un oligómero MOMP .
Por lo tanto, el oligómero MOMP podría ser un componente potencial de la vacuna . Sin embargo, no es factible producir este antígeno por extracción de clamidiae, ya que el costo de producción sería muy superior al que un agricultor consideraría asequible para una vacuna caprina u ovina. Por lo tanto, deben investigarse métodos alternativos de producción de vacunas.
La generación de oligómeros MOMP recombinantes puede ser difícil. El gen que codifica MOMP, Omp1, está bien caracterizado, pero la expresión de alto nivel del gen de longitud completa de un promotor no regulado es tóxico para E. coli. Por esta razón, se emprendieron diferentes estrategias experimentales para la generación de los epítopos protectores. Intentamos imitar los epítopos protectores con anticuerpos antiidiotípicos monoclonales, o mimótopos péptidos conformacionalmente restringidos, pero ninguno de ellos fue eficiente. Decidimos evaluar la vacunación de ratones con vacuna de ADN como vacunación de ADN con ratones protegidos por el gen MOMP contra C. trachomatis y pavos contra C. psittaci . Hasta ahora solo se ha obtenido una protección parcial, pero se han realizado más investigaciones (sobre el gen diana, la concentración del ADN, la vía de vacunación, etc.).) es necesario saber si los ratones podrían protegerse con una vacuna de ADN tan eficientemente como con una vacuna viva.