Achtergrond: chronische lymfatische leukemie (CLL) heeft een klassiek immunofenotype, bestaande uit lichte ketenbeperking, CD5+, CD19+, dim CD20, CD23+, CD43+, CD200+, CD10 – en CD79b-. Dit onderscheidt het van normale B-cellen en andere lymfoproliferatieve aandoeningen (LPDs). De antilichamen die deze antigenen richten zijn inbegrepen in twee cytometry Comités van de 8 kleurenstroom die door het euroflowconsortium voor het werk omhoog van cel LPDs van B worden ontwikkeld. Het combineren van deze antilichamen in één 10-kleurenpaneel zou rendabeler zijn. Bovendien kunnen nieuwe CLL-therapieën diepe remissies veroorzaken, waardoor een toenemende vraag ontstaat om minimale resterende ziekte (MRD) te meten, gedefinieerd als het hebben van meer dan 1 resterende leukemische cel per 10.000 leukocyten (10-4). De huidige internationale gestandaardiseerde aanpak voor het meten van MRD, die is vastgesteld door het Europees onderzoeksinitiatief voor CLL (ERIC), maakt gebruik van een panel van antilichamen gericht op CD3, CD5, CD19, CD20, CD22, CD43, CD79b en CD81. Deze antilichaam-fluorochrome combinaties zijn echter verschillend van die welke door de euroflow diagnostische panelen worden gebruikt. Zo zouden laboratoria die de uitvoering van MRD-tests overwegen antilichamen moeten kopen voor 3 verschillende panelen (2 diagnostische en 1 MRD). We hebben de euroflow 8-color lymphocyt screening tube (LST) uitgebreid met CD200 en CD23, zodat CLL kan worden gedetecteerd in één 10-color tube, op niveaus van slechts 0,01%. Het doel van deze studie was om de potentiële kostenbesparingen bij de implementatie van dit nieuwe panel te bepalen en om te bepalen of het gevoelig genoeg is om MRD te detecteren.
methoden: we berekenden het aantal monsters geanalyseerd met onze gemodificeerde 10-kleur LST tube (mLST1, verkregen gevriesdroogd) van April 2018 tot maart 2019 om een LPD uit te sluiten en het aantal antilichaam aliquots opgeslagen met behulp van deze aanpak in vergelijking met de standaard 2-tube Euroflow methode. We hebben ook een versie van het bovengenoemde Paneel (mLST2) gemaakt met behulp van vloeibare antilichamen om de generaliseerbaarheid van onze resultaten te vergroten, door CD38 te vervangen door CD43 om te zien of deze MRD detectie verbeterde (zie onderstaande panelen). Voor MRD-testen gebruikten we CLL-monsters van 24 verschillende patiënten om 60 MRD-monsters te produceren bij verschillende concentraties van leukemische cellen. De monsters werden bereid door CLL-cellen te verrijken tot suspensies van normale leukocyten bij ongeveer concentraties van 0,1%, 0,01% en 0,001%. Elk monster werd aliquoteerd en gekleurd met de drie panelen: ERIC, mLST1 en mLST2. Gegevens werden verkregen met behulp van een BD FACSCanto II of een BD FACSAria fusie en geanalyseerd met behulp van BD FACSDiva software. CLL-cellen werden geïdentificeerd op basis van differentiële expressie van belangrijke markers en MRD werd berekend als het aantal CLL-cellen/totaal aantal leukocyten. MRD-positiviteit werd gedefinieerd als ≥ 0,01%. De overeenkomst tussen de panels werd beoordeeld aan de hand van de Plotmethode Bland-Altman. We berekenden ook de procentuele overeenkomst tussen de panelen bij het identificeren van MRD-positiviteit.
resultaten: in 1 jaar werd mLST1 uitgevoerd op 474 monsters, waarvan 220 een LPD hadden en 123 (56%) een klassiek CLL-fenotype, waardoor verdere tests overbodig waren. Dit resulteerde in de netto besparing van 476 antilichaamaliquots. Voor MRD-beoordeling waren differentiële expressie van CD5 en CD20 de belangrijkste bijdragers bij het onderscheiden van CLL van normale B-cellen met behulp van mLST1 en mLST2. We identificeerden een CLL-geval met een atypisch immunofenotype (dim CD5, bright CD20) dat moeilijk te poorteren bleek met behulp van een mLST-Paneel. Er was overeenstemming over de MRD-resultaten die met de mLST-panels en het ERIC-panel werden verkregen. Voor waarden boven de bepaalbaarheidsgrens bedroeg de overeengekomen grenswaarde van 95% ±0,3369 log voor de vergelijking van ERIC vs mLST1 en ±0,3485 log voor de vergelijking van ERIC vs mLST2. De variabiliteit in MRD-niveaus tussen de panelen was dus minder dan 2 maal de meerderheid van de tijd, wat we klinisch aanvaardbaar achtten omdat MRD op een exponentiële schaal wordt gemeten. Het ERIC-panel en het mLST1 waren het voor 88,3% eens over het onderscheid tussen MRD-positieve en MRD-negatieve monsters. Het ERIC-panel en het mLST2 waren voor 93,3% akkoord.
conclusies: het gebruik van een gewijzigd 10-kleuren lst-paneel voor zowel diagnose als MRD-meting van CLL is haalbaar. De voordelen zijn verhoogde vertrouwdheid met de antilichamen en potentiële kostenbesparingen, die MRD toegankelijk maken voor meer cytometrylaboratoria. Atypische CLL gevallen zonder de gebruikelijke CD5 positiviteit en dim CD20 zijn zeer moeilijk te poorteren met behulp van een lst Paneel. In deze gevallen is het ERIC-panel duidelijk superieur omdat CD22, CD79b, CD81 en CD43 nog steeds een scheiding tussen de kwaadaardige en normale lymfocyten kunnen bieden.
Bazinet: Bd Biowetenschappen: Overige: verschafte een aanzienlijke hoeveelheid antilichamen die in dit project vrij van kosten werden gebruikt.. Wever: Teva Canada Innovatie: Werkgelegenheid. Gimmig: Bd Biowetenschappen: werkgelegenheid. Johnson: Lundbeck: werkgelegenheid, Honoraria, lidmaatschap in de Raad van bestuur of adviescommissie van een entiteit, Overige: reiskosten, geschenken, en anderen, onderzoeksfinanciering; Merck: Consultancy, Honoraria; Roche: Consultancy, werkgelegenheid, Honoraria, lidmaatschap in de Raad van bestuur of adviescommissie van een entiteit, Overige: reiskosten, geschenken, en anderen, onderzoeksfinanciering; Abbvie: Consultancy, werkgelegenheid, Honoraria, lidmaatschap in de Raad van bestuur of adviescommissie van een entiteit, onderzoeksfinanciering; Bd Biowetenschappen: Overige: Een aanzienlijk deel van de in dit project gebruikte antilichamen kosteloos verstrekt.; BMS: Consultancy, Honoraria; Seattle Genetics: Honoraria.