Umwandlung von Cholesterin in Pregnenolon wird durch das Cholesterin-Seitenkettenspaltungsenzym (SCC) P450scc vermittelt. Eine mangelhafte SCC-Aktivität verursacht eine angeborene lipoide Nebennierenhyperplasie (auch als 20,22-Desmolase-Mangel bekannt), einen potenziell tödlichen Defekt in der Synthese aller Steroidhormone. Um nach möglichen genetischen Defekten zu suchen, die diese Krankheit verursachen, synthetisierten wir vier Oligodesoxyribonukleotide mit 63 bis 72 Basen, die Teilen der cDNA-Sequenz (Bovine Complementary DNA) für P450scc entsprechen. Die bovinen Oligonukleotide wurden markiert und direkt verwendet, um Southern Blots normaler humaner genomischer DNA zu untersuchen, wobei ein Muster aufgedeckt wurde, das darauf hinweist, dass es ein einzelnes P450scc-Gen im menschlichen Genom gibt. Die Hybridisierung mit Northern Blots von normaler humaner und boviner Nebennieren-Boten-RNA zeigt, dass die P450scc-Boten-RNA bei beiden Arten etwa 2,0 Kilobasen lang ist. Hybridisierungen der Oligonukleotide an genomische DNA von drei nicht verwandten Patienten mit SCC-Mangel zeigten keine Deletion im humanen P450scc-Gen. Die Rinder-Sequenz-Oligonukleotide wurden dann verwendet, um einen humanen P450scc-cDNA-Klon zu isolieren. Das isolierte P450scc-cDNA-Fragment enthält 818 Basen, die für 239 Aminosäuren des Proteins, das Translationsabbruchsignal, und 98 Basen der nicht translatierten 3′-Region kodieren. Die Sequenz dieser carboxyterminalen Hälfte des humanen P450scc-Proteins ist zu 72% homolog zur Rindersequenz und enthält eine zusätzliche Aminosäure, die in boviner P450scc nicht vorkommt; Die humanen und bovinen Nukleotidsequenzen sind zu 81% homolog. Die Wiederholung der genomischen DNA-Blotting-Studien mit der cDNA-Sonde ergab die gleichen Ergebnisse, die mit den Oligonukleotidsonden mit Rindersequenz erhalten wurden, was bestätigt, dass der SCC-Mangel nicht auf eine Deletion in den mit den Sonden hybridisierenden Regionen des P450scc zurückzuführen ist. Lange, chemisch synthetisierte heterologe Sequenz-Oligonukleotide, die unbekannte Zahlen von Base-Mismatches mit humanen Sequenzen enthalten, können somit verwendet werden, um humane Gene zu untersuchen, so dass der Zugang zu einer cDNA für solche Studien nicht notwendig ist.