Dieser vorschlag addrsses die struktur-funktion beziehung der vitamin k-abhängig blut gerinnung proteine, mit besonderer aufmerksamkeit auf gamma carboxyglutaminsäure. Dieses Programm, das vier separate, aber verwandte Projekte umfasst, hat sich aus früheren Arbeiten entwickelt, die in der vorherigen Periode entwickelt wurden. In Projekt #1 wird die Struktur-Funktions-Beziehung von Faktor IX und Prothrombin untersucht. Mutierte Formen dieser Proteine, die von Patienten mit erblichen strukturellen und funktionellen Anomalien dieser Proteine erhalten wurden, werden unter Verwendung von konformationsspezifischen Antikörpern gereinigt, durch Proteolyse fragmentiert und die mutierten Peptide sequenziert. Der molekulare Defekt in jedem mutierten Protein wird festgestellt und mit funktionellen Defekten korreliert. In Projekt # 2 wird das neu entdeckte KC4-Plättchenmembranprotein vollständig charakterisiert und auf spezifische subzelluläre Organellen lokalisiert. Die Funktion und Bindungseigenschaften dieses Proteins, das nur auf aktivierten Thrombozyten exprimiert wird, werden bestimmt. Projekt #3 wird die Rolle von Gla in Prothrombin definieren. Ein neues Modell der Gla-, Metall- und Membraninteraktion in Prothrombin unter Verwendung immunchemischer und spektroskopischer Ansätze wird evaluiert. Die Membranbindungseigenschaften und die Gla-Verteilung einer Reihe von partiell carboxylierten Prothrombinen sollten Aufschluss über dieses Problem geben. Projekt #4 ist eine direkte klinische Anwendung unserer immunchemischen Studien. Unter Verwendung von Antikörpern, die spezifisch für das vollständig carboxylierte Prothrombin (NPT) und des-Gamma-Carboxyprothrombin (APT) sind, werden wir eine klinische Studie fortsetzen, um diese Assays als verbesserte Methode zur Überwachung der oralen Antikoagulanzientherapie zu bewerten. Vitamin-K-Mangel bei Neugeborenen und ihren Müttern wird untersucht, mit der Hoffnung, einfache rationale Ansätze zur Beseitigung der hämorrhagischen Erkrankung des Neugeborenen zu entwickeln. Darüber hinaus wird der Assay des KC4-Antigens, spezifisch für aktivierte Thrombozyten, als Methode zum Nachweis des präthrombotischen Zustands untersucht. Diese grundlegenden und klinischen Projekte sollen zum Verständnis dieser Proteingruppe beitragen, neue Modalitäten für die Diagnose des präthrombotischen Zustands und der Vitamin-K-Difizienz bereitstellen und weitere Daten entwickeln, um die Verwendung des NPT-Assays über die Prothrombinzeit zu rechtfertigen Reduzieren Sie die mit der oralen Antikoagulationstherapie verbundene Morbidität / Mortalität signifikant.