Abstract
Wir haben ein zweistufiges klonales Kultursystem verwendet, um eindeutig zu zeigen, dass einzelne primitive lymphohämopoetische Vorläuferzellen die Fähigkeit zur Differenzierung entweder entlang der myeloischen oder der B-lymphoiden Linie haben. Hochangereicherte murine Markzellen wurden einzeln in Kultur durch Mikromanipulation in Gegenwart von Pokeweed mitogen-stimuliertem milzzellkonditioniertem Medium, Erythropoietin, SF-Faktor (SF) und Interleukin (IL) 7 plattiert. Fünfundvierzig Prozent der einzelnen Zellen bildeten primäre Kolonien, die mehrere hämopoetische Linien exprimierten. Wenn Aliquots aus einzelnen Kolonien in sekundärer Methylcellulosekultur repliziert wurden, die SF und IL-7 enthielt, führten 41% der primären Kolonien zu Lymphozytenkolonien. Zellen der Lymphozytenkolonien waren blastenartig und B220+, sIg-, Mac-1-, Gr-1-, Ly-1-, L3T4-, Ly-2- und CD3-. Dreißig bis 70% der Zellen waren Thy-1+. mu-Ketten-mRNA wurde in den meisten Zellen durch In-situ-Hybridisierung mit einer Antisense-RNA-Sonde nachgewiesen. Wenn Lymphozytenkolonien, die von einer einzelnen Zelle abgeleitet wurden, gepoolt und einzeln in Scid-Mäuse injiziert wurden, war IgM vom Spendertyp im Serum von Mäusen messbar und Milzen enthielten B-Zellen vom Spendertyp. Wir führten dann ein erstes Screening von Wachstumsfaktoren durch, um Wachstumsfaktoren zu identifizieren, die Pokeweed mitogenstimuliertes milzzellkonditioniertes Medium in der Primärkultur ersetzen könnten. Kombinationen von zwei Faktoren, die SF plus IL-6, IL-11 oder Granulozyten-Kolonie-stimulierenden Faktor enthielten, waren alle in der Primärkultur bei der Aufrechterhaltung des B-lymphoiden Potentials wirksam. Interessanterweise konnte IL-3 das lymphoide Potential der Primärkulturen weder ersetzen noch synergistisch mit SF wirken. Unsere Beobachtungen zeigen, dass viele primitive Vorläufer, von denen bisher angenommen wurde, dass sie myeloisch sind, auch ein B-lymphoides Potenzial besitzen. Dieses Kultursystem sollte sich als wertvoll für die Aufklärung der Mechanismen erweisen, die die frühen Stadien der Lymphhämopoese regulieren.