Arzneimittel für monoklonale Antikörper (mAb) haben aufgrund ihrer starken therapeutischen Wirksamkeit und Spezifität zur Behandlung von entzündlichen, onkologischen und Autoimmunerkrankungen ein erhebliches Interesse geweckt. Aufgrund ihrer intrinsischen Komplexität aufgrund einer großen Anzahl von Mikroheterogenitäten besteht ein entscheidender Bedarf an analytischen Methoden, um eine umfassende eingehende Charakterisierung von Kandidatenmolekülen zu ermöglichen.
Creative Biolabs bietet eine Vielzahl von Analysetechniken zur Antikörpercharakterisierung und Homogenitätsbewertung in allen Phasen der mAk-Entdeckung, präklinischen und klinischen Entwicklung. Hier stellen wir die Anwendung der kapillaren isoelektrischen Fokussierung (cIEF) für die Analyse der Heterogenität der Antikörperladung vor. Es wird häufig zur Charakterisierung therapeutischer mAbs verwendet. Durch die Bestimmung des pI von mAb-Ladungsisoformen liefert cIEF Informationen, die für die Feststellung von Identität, Reinheit, posttranslationalen Modifikationen und Stabilität entscheidend sind.
Einführung in cIEF
cIEF basiert auf dem Prinzip der Kapillargelelektrophorese. Die Elektrophorese ist eine Trenntechnik, die auf der Differenzgeschwindigkeit der Bewegung geladener Spezies in einem elektrischen Feld in Richtung der Elektrode entgegengesetzter Ladung basiert. Um Moleküle basierend auf dem isoelektrischen Punkt (pI) zu trennen, wird ein pH-Gradient innerhalb des Gels unter Verwendung von Ampholyt-Mischungen eingestellt. Unter dem elektrischen Feld wandern die Moleküle entlang des elektrischen Feldes, bis sie den dem pI entsprechenden pH-Wert erreichen, wo die positiven und negativen Ladungen in den Molekülen ausgeglichen sind. Die UV-Absorption über die gesamte Kapillare wird während der gesamten Trennung gemessen, was eine Echtzeitbeobachtung und eine endgültige Quantifizierung ermöglicht.
Abb.1 Prinzip der isoelektrischen Fokussierung. (Pergande, 2017)
cIEF zur Charakterisierung der Ladungsheterogenität
mAbs sind anfällig für verschiedene posttranslationale Modifikationen (z., Glykosylierung, Phosphorylierung, Oxidation und Lysin-Clipping), was zu Ladungsvarianten führt. Einige dieser Ladungsvarianten können sich in unterschiedlichem Maße auf die biologische Aktivität und Sicherheit des Moleküls auswirken. Zum Beispiel beeinflusst das Glykosylierungsprofil von mAbs die biologische Aktivität des Proteins stark. Folglich ist die routinemäßige Überwachung der Heterogenität der mAb-Ladung ein wesentlicher Bestandteil jedes Produktqualitäts- und Lebenszyklusmanagementplans. Es ist auch einer der wichtigsten analytischen Aspekte der Biosimilar-Entwicklung und Vergleichbarkeitsstudien. Als ladungsbasierte Trenntechnik ist cIEF ein leistungsfähiges Werkzeug, um das Ladungsprofil der mAbs zu charakterisieren, da verschiedene Ladungsvarianten durch interne Kalibrierung nach ihrem pI unterschieden werden können. Da cIEF eine sehr hohe Reproduzierbarkeit und Spezifität bietet, ist dies eines der beliebtesten Werkzeuge für die mAb-Analyse.
Merkmale unserer Dienstleistungen
- Charakterisierung von Größen- und Ladungsvarianten intakter und reduzierter mAbs mit cIEF
- Analyse der Ladungsvarianten von mAbs mit einem orthogonalen Ansatz
- cIEF-Separation mit anschließender massenspektrometrischer (MS) Analyse
- Maßgeschneiderte Dienstleistungen gemäß den spezifischen Anforderungen
Creative Biolabs bietet auch eine breite Palette von Antikörperfunktionstests an, um die Auswirkungen von Ladungsvarianten auf die Antikörperaktivität und -eigenschaften wie Effektorfunktionen, FcRn und Antigenbindung zu verstehen Affinität und PK, wodurch die Struktur-Funktions-Beziehungen aufgeklärt werden. Wenn Sie an unserem Service interessiert sind, treten Sie mit uns bitte in Verbindung, um Ihre Anforderungen zu besprechen.