Clazakizumab bei später antikörpervermittelter Abstoßung: Studienprotokoll einer randomisierten kontrollierten Pilotstudie

Studiendesign und Studienfluss

Bei dieser prospektiven bizentrischen Studie (Medizinische Universität Wien und Charité Universitätsmedizin Berlin) handelt es sich um eine vom Prüfarzt initiierte Phase-2-Pilotstudie zur Beurteilung der Sicherheit, Verträglichkeit und Wirksamkeit (Preliminary Assessment) der humanisierte monoklonale Anti-IL-6-Antikörper Clazakizumab in der späten ABMR. Sponsor dieser nichtkommerziellen Studie ist die Medizinische Universität Wien. Neben dem Studiendesign führt der Sponsor die Studie (in Zusammenarbeit mit Forschungspartnern) durch und ist für alle wissenschaftlichen, ethischen, regulatorischen und rechtlichen Aspekte verantwortlich. Der Geldgeber (Vitaeris Inc., Vancouver, Kanada) hat Finanzierungsbedingungen festgelegt und wird externe Mittel bereitstellen.

Wir nehmen an, dass die Verabreichung von Clazakizumab bei Nierentransplantatempfängern zusätzlich zur Baseline-Immunsuppression ein akzeptables Sicherheitsprofil aufweisen wird, wie bereits berichtet für Patienten mit Autoimmunerkrankungen. Darüber hinaus nehmen wir an, dass wiederholte Verabreichung von Clazakizumab wirkt Gewebeentzündungen und -verletzungen bei laufender ABMR entgegen, insbesondere Entzündungen in der Mikrozirkulation, humanes Leukozytenantigen (HLA) -spezifische B-Zell-Alloresponse und Alloantikörper-ausgelöste chronische Transplantatverletzung.

Ein Flussdiagramm des Versuchs ist in Abb. 1. Ein Zeitplan der Ereignisse ist in Fig. 2, und eine unterschriebene SPIRIT 2013 Checkliste wird als Zusatzdatei angehängt (Zusatzdatei 1). Die Studie besteht aus zwei aufeinander folgenden Unterteilen. In einem ersten Teil (Teil A) werden die Teilnehmer randomisiert und erhalten entweder Clazakizumab (25 mg subkutane Injektion) oder Placebo für einen Zeitraum von 12 Wochen (Verabreichung von Clazakizumab / Placebo an Tag 0 und nach vier und acht Wochen). Nach 11 Wochen werden die Patienten einer ersten Follow-up-Transplantationsbiopsie unterzogen. In Woche 12 wird Teil A abgeschlossen und die Randomisierungssequenz wird für eine erste Analyse der Daten unblindet sein. Hauptziele dieses Teils der Studie sind die Beurteilung der Sicherheit und Verträglichkeit eines kurzen Behandlungsverlaufs. Darüber hinaus wird Teil A eine erste vorläufige Bewertung der Auswirkungen von Clazakizumab auf ABMR-assoziierte Entzündungen ermöglichen, die im peripheren Blut und im abstoßenden Organ-Allotransplantat nachgewiesen werden. Nach Woche 12 treten alle Studienpatienten in einen offenen Teil der Studie ein (Teil B) und erhalten 25 mg Clazakizumab in vierwöchentlichen Intervallen bis zum Ende des Studienbesuchs nach 52 Wochen. Nach 51 Wochen werden die Patienten einer zweiten Protokollbiopsie unterzogen. Hauptziele von Teil B sind die Bewertung der Sicherheit und Verträglichkeit einer längeren Behandlung mit Clazakizumab und der langfristigen Auswirkungen dieses Antikörpers auf die Entwicklung von ABMR, abstoßungsassoziierten Biomarkern und Nieren-Allotransplantat-Funktion und Überleben über einen Zeitraum von 12 Monaten.

Obwohl die Studie nicht darauf ausgelegt war, einen Rebound-Effekt nach Absetzen der Behandlung mit Clazakizumab zu untersuchen, werden nach dem letzten Studienbesuch alle Studienteilnehmer auf Anzeichen einer Verschlechterung der Nierentransplantationsfunktion überwacht in regelmäßigen Nachuntersuchungen alle vier Wochen für fünf Monate nach der letzten Dosis (5 × Halbwertszeit) in ambulanten Kliniken.

Wir erwarten den Abschluss der Patientenrekrutierung nach 18 Monaten und den Abschluss der Studie nach 30 Monaten.

Teilnehmer

Wir werden Nierentransplantatempfänger mit zirkulierender Anti-HLA-DSA und Biopsiemerkmalen von ABMR in eine Indikationsbiopsie einbeziehen durchgeführt für ein positives DSA-Ergebnis nach Transplantation und / oder langsame Verschlechterung der Allograftfunktion und / oder Proteinurie. Weitere wichtige Einschlusskriterien sind ein funktionierendes Transplantat ≥ 365 Tage nach der Transplantation und eine geschätzte glomeruläre Filtrationsrate (eGFR) > 30 ml / min / 1.73 m2. Diese eGFR-Schwelle wurde gewählt, um die Aufnahme von Transplantaten mit einem hohen Grad an irreversiblen chronischen Schäden zu vermeiden (bei Patienten mit sehr fortgeschrittener Transplantatverletzung ist kein nachhaltiger Behandlungsnutzen mehr zu erwarten). Einschluss- und Ausschlusskriterien sind in Tabelle 1 aufgeführt.

Randomisierungsverfahren

Für Teil A werden die Patienten 1:1 in einen der beiden Studienarme randomisiert (Clazakizumab versus Placebo) unter Verwendung einer webbasierten Randomisierungsplattform (https://www.meduniwien.ac.at/randomizer). Die Randomisierung wird stratifiziert nach Studienort und nach ABMR-Kategorien (aktive ABMR versus chronische / aktive ABMR), um ein Gleichgewicht der Patienten mit diesen beiden histologischen Typen zwischen den beiden Armen sicherzustellen.

Berechnung der Stichprobengröße

Für diese Pilotstudie wurde keine genaue Schätzung der Stichprobengröße durchgeführt, da die Effektgröße unbekannt ist (es gibt keine vorherigen Informationen, auf denen eine Stichprobengröße basieren könnte). Der primäre Endpunkt wird Sicherheit und Verträglichkeit sein. Eine vorläufige Bewertung der Wirksamkeitsergebnisse bei 20 Nierentransplantatempfängern mit später ABMR liefert erste Daten zur Wirkung von Clazakizumab auf klinische, morphologische, immunologische und molekulare Endpunkte. Die jeweiligen Ergebnisse (z. B. Vergleich zwischen Clazakizumab und Placebo in Bezug auf Mikrozirkulationsentzündung und molekulare Abstoßungswerte), einschließlich einer Bewertung der Variabilität, können voraussichtlich eine wertvolle Grundlage für das Design zukünftiger Studien bilden.

Interventionen

Clazakizumab oder Placebo werden als einzelne subkutane Injektion von jeweils 1 ml durch blindes qualifiziertes Studienpersonal verabreicht. Clazakizumab wird in Einzeldosis-Durchstechflaschen (25 mg / ml) zur Injektion geliefert und von Vitaeris Inc. bereitgestellt. Das Placebo-Medikament wird mit normaler Kochsalzlösung zur Injektion verabreicht und vom Prüfer bereitgestellt. In Teil A der Studie wird Clazakizumab oder Placebo in vierwöchentlichen Dosen als einzelne SC-Injektion am Tag 0 und in den Wochen 4 und 8 verabreicht. Während Teil B erhalten alle Patienten vierwöchentliche Dosen von Clazakizumab ab Woche 12, dann nach Wochen 16, 20, 24, 28, 32, 36, 40, 44, und 48 (Ende des Studienbesuchs in Woche 52).

Die folgenden Medikamente sind während der Studie verboten: Rituximab; Eculizumab; Proteasom-Inhibitoren; intravenöses Immunglobulin; Plasmaaustausch oder Immunadsorption; und andere Prüfpräparate / -behandlungen einschließlich kommerziell erhältlicher monoklonaler Anti-IL-6 / IL-6R-Antikörper wie Tocilizumab. Die folgenden Begleitmedikamente sind während der Studie zulässig: Calcineurin-Inhibitoren (Tacrolimus oder Cyclosporin A); Säugetierziel von Rapamycin (mTOR) -Inhibitor (Everolimus oder Rapamycin); Mycophenolatmofetil (MMF) / Mycophenolatnatrium; und niedrig dosierte Kortikosteroide (Prednisolon ≤ 5 mg / Tag).

Baseline-Immunsuppression

Bei Diagnose einer späten ABMR Alle Empfänger (beide Arme in Teil A) unter Therapie mit einem Calcineurin-Inhibitor oder einem mTOR-Inhibitor ohne Azathioprin oder MMF / Mycophenolsäure erhalten MMF (anfänglich 2 × 500 mg pro Tag; schrittweise Erhöhung auf 2 × 1000 mg pro Tag, wenn toleriert), um eine Unterimmunsuppression zu vermeiden. Unser Protokoll erlaubt keine MMF-Dosen > 2000 mg pro Tag. Es fehlen solide Daten zur optimalen Dosierung von MMF bei ABMR; In dieser Hinsicht besteht möglicherweise die Sorge, dass höhere MMF-Dosen die hämatologische Toxizität der IL-6-Blockade (z. B. Leukopenie) deutlich erhöhen könnten. Tacrolimus wird angepasst, um Ziel-Talspiegel im Bereich von 5-10 ng / ml, CyA bis 80-120 ng / ml, zu erreichen. Empfänger, die zuvor von Steroiden entwöhnt worden waren, erhalten niedrig dosiertes Prednisolon (5 mg / Tag). Für jeden Teilnehmer die Art der Immunsuppression und ihre Veränderungen während des Studienzeitraums werden dokumentiert.

Blendend und unblind

Die Randomisierung (Teil A) wird an den beiden Studienzentren von nicht verblindeten Apothekern durchgeführt, die auch für die Herstellung von Clazakizumab und Placebo verantwortlich sind (0, 9% ige Kochsalzlösung). Um die Verblindung aufrechtzuerhalten und zu gewährleisten und eine mögliche Entblendung der Gruppenzuteilung zu vermeiden, sind Zubereitungen aus echtem Arzneimittel und Placebo in Farbe, Aussehen und Geruch identisch. Das klinische Team kann nicht auf die sichere Zuteilungsliste zugreifen (eingeschränkter passwortgeschützter Zugriff), bis der letzte Patient Teil A abgeschlossen hat. Vorzeitige Entblendung kann in medizinischen Notfällen, schwerwiegenden Erkrankungen, bei denen die Teilnehmer nicht angemessen behandelt werden können, erforderlich sein, es sei denn, das medizinische Personal kennt die zugewiesenen Behandlungsbedingungen oder Berichte über vermutete unerwartete schwerwiegende unerwünschte Ereignisse (SAEs). Die Entblendung kann bei Bedarf vom Data and Safety Monitoring Board (DSMB) beantragt werden.

Ergebnisparameter

Primäre und sekundäre Ergebnismaße sind in Tabelle 2 aufgeführt. Ein Zeitplan der Ereignisse ist in Fig. 2. Primäre Endpunktmaße sind die Sicherheit und Verträglichkeit von Clazakizumab, bewertet während des gesamten Studienzeitraums (19 Besuche bis 1 Besuch nach 52 Wochen, Tag 0, Wochen 1, 2, 3, 4, 8, 11, 12, 16, 20, 24, 28, 32, 36, 40, 44, 48, 51, und 52). Nach den statistischen Grundsätzen der International Conference on Harmonization (ICH) betrifft die Sicherheit das medizinische Risiko für die Teilnehmer, das durch Labortests, Vitalfunktionen und AEs bewertet wird, während die Verträglichkeit den Grad beschreibt, in dem offene AEs vom Individuum toleriert werden können (was sich in der Rate der Abbrüche aufgrund mangelnder Verträglichkeit widerspiegelt). Sekundäre Endpunkte sind die Pharmakokinetik (PK; Clazakizumab-Konzentration) und die Pharmakodynamik (PD) von Clazakizumab, die durch serielle Messungen des C-reaktiven Proteins (CRP) bewertet wurden. Die Unterdrückung dieses von Hepatozyten abgeleiteten Akutphasenproteins erwies sich früher als wertvoller Ersatzmarker für die Wirksamkeit von Anti-IL-6 . Zur vorläufigen Wirksamkeitsbewertung aus Blut gewonnene Biomarker von ABMR (DSA-Eigenschaften, Zytokine und Marker für Endothelaktivierung / -verletzung, Muster von periphere Blutleukozyten-Subpopulationen) werden am Tag 0 und nach 12 und 52 Wochen bewertet. Darüber hinaus werden wir IL-6 / IL-6R-Transkripte untersuchen (vor Studienbeginn und in Woche 12 und 52), um zu klären, ob und inwieweit Neutralisation von IL-6 moduliert die Genexpression. Die gesamte immunsuppressive Wirkung von Clazakizumab wird durch Überwachung der TTV-Belastung im Plasma bewertet.

Die Studie umfasst zwei Protokollbiopsien, eine frühe Biopsie nach 11 Wochen (vor dem Ende von Teil A), um in erster Linie die Wirkung der IL-6-Blockade auf die Mikrozirkulation zu untersuchen Entzündung im direkten Vergleich zu Placebo und eine späte Biopsie nach 51 Wochen (vor dem Ende von Teil B) zur Beurteilung der Wirkung von Clazakizumab auf das Fortschreiten chronischer Verletzungen (Ausmaß der Transplantatglomerulopathie, interstitielle fibrose und tubuläre Atrophie). Die beiden Biopsien werden jeweils kurz (eine Woche) vor dem Ende der jeweiligen Studie durchgeführt Teile, um Interferenzen mit detaillierten pharmakokinetischen Analysen zu vermeiden, die für die Wochen 12 bzw. 52 geplant sind. Alle Biopsien werden auf ABMR-typische Genexpressionsmuster untersucht (ATAGC, Alberta University, Edmonton; Hauptauslesung: molekularer ABMR-Score). Darüber hinaus werden Nierenfunktion, Proteinausscheidung, Transplantatversagen und Tod bewertet über den gesamten Studienzeitraum. Schließlich werden wir die Auswirkungen der IL-6-Blockade (im Vergleich zu Placebo) auf die PK von Pantoprazol als Sondenmedikament des Cytochrom (CYP) -abhängigen Leberstoffwechsels. Pantoprazol wurde gewählt, da Einzeldosen gut vertragen werden und die CYP2C19-Aktivität während der Entzündung empfindlich auf Phenokonversion reagiert . An Tag 0 und in den Wochen 12 und 52 wird Pantoprazol in einer Dosierung von 20 mg intravenös verabreicht und die Arzneimittelspiegel werden stündlich über einen Zeitraum von 6 h bestimmt. Bei Patienten unter kontinuierlicher Protonenpumpenhemmertherapie wird die orale Behandlung für drei Tage vor dem PK-Test unterbrochen und einen Tag danach neu gestartet.

Sicherheitsbewertung und Meldung unerwünschter Ereignisse

In jeder klinischen Situation, einschließlich Notfällen, wird eine angemessene medizinische Versorgung bereitgestellt. Die Sicherheitsbewertung umfasst eine sorgfältige Überwachung aller unerwünschten Ereignisse (UE), einschließlich SAEs. Es liegen keine Daten zur Sicherheit und Verträglichkeit von Clazakizumab bei Transplantationspopulationen vor. Aus früheren Studien liegen jedoch Ergebnisse bei > 1000 mit Clazakizumab behandelten Patienten / Teilnehmern zur Beurteilung der Sicherheitsmuster vor. Tabelle 3 enthält eine Zusammenfassung der Nebenwirkungen, die für Clazakizumab in einer Dosis von 25 mg/ Monat in zwei repräsentativen Phase-2-Studien bei Patienten mit Arthritis berichtet wurden.

Zwischenanalysen

Diese Studie wird von einem unabhängigen DSMB überwacht, um die Sicherheit und Datenqualität zu bewerten. Um große Unterschiede zwischen den Gruppen in Bezug auf Sicherheitsaspekte rechtzeitig zu erkennen, werden die Boardmitglieder angewiesen, Zwischenanalysen durchzuführen, nachdem 10 und 20 Patienten Teil A der Studie abgeschlossen haben. Das DSMB analysiert aufgezeichnete AEs- und Sicherheitslaborergebnisse in Bezug auf die Randomisierungssequenz.

Das DSMB kann erwägen, die Studie abzubrechen, wenn das Gesamtmuster verwandter SAEs oder Änderungen der Ergebnisse des Sicherheitslabors ein wichtiges Sicherheitssignal stark unterstützen. Teil A: wenn bei sechs Teilnehmern verwandte (definitiv und möglicherweise) SAEs (Common Toxicity Criteria > Grad 3 oder schwer / medizinisch signifikant) und / oder signifikant erhöhte Leberwerte auftreten Parameter (Alaninaminotransferase, Aspartataminotransferase und / oder Bilirubin > 3 × obere Grenze des Normalwerts) oder Neutropenie (< 0,5 g / l), wird der DSMB die Sicherheitsergebnisse aufheben. Wenn fünf oder alle Teilnehmer in der Clazakizumab-Gruppe sind, wird die Studie abgebrochen. In ähnlicher Weise, wenn sechs verwandte SAEs und / oder wesentliche Anomalien in Leberenzymen oder Neutrophilenzahlen auftreten In der gleichen Systemorganklasse wird der DSMB diese SAES freigeben und wenn fünf oder alle SAEs in der Clazakizumab-Gruppe sind, dann wird die Studie abgebrochen. Teil B (alle Teilnehmer unter Clazakizumab-Behandlung): Wenn bei ≥ 10 Personen arzneimittelbedingte SAEs auftreten oder ≥ 10 verwandte SAEs in derselben Systemorganklasse auftreten, wird die Studie abgebrochen (die Gesamtzahl der verwandten SAEs sollte auch die verwandten SAEs umfassen, die bei den mit Clazakizumab behandelten Personen während Teil A auftreten).

Für diesen Pilotversuch sind keine genauen statistischen Definitionen der Kriterien für einen vorzeitigen Studienabbruch definiert.

Qualitätskontrolle und Qualitätssicherung

Die Überwachungsverfahren umfassen vordefinierte regelmäßige Besuche an den beiden Studienzentren. Die Ermittler gewähren Zugriff auf alle Quelldokumente, einschließlich Fallberichtsformulare und andere protokollbezogene Dokumente. Die Vertraulichkeit der Teilnehmer wird in Übereinstimmung mit den örtlichen Vorschriften gewahrt. Der benannte Monitor wird den Prüfer regelmäßig kontaktieren und besuchen und Zugang zu allen Quelldokumenten haben, die zur Überprüfung der Einträge in den Fallberichtsformularen und anderen protokollbezogenen Dokumenten erforderlich sind, sofern die Vertraulichkeit der Teilnehmer gewahrt wird in Übereinstimmung mit den örtlichen Vorschriften. Es liegt in der Verantwortung des Monitors, das Fallberichtsformular in regelmäßigen Abständen gemäß dem zu überprüfen Überwachungsplan während der gesamten Studie, um die Einhaltung des Protokolls und die Vollständigkeit, Konsistenz und Genauigkeit der eingegebenen Daten zu überprüfen. Die Überwachungsstandards erfordern eine vollständige Überprüfung auf das Vorliegen einer Einwilligung nach Aufklärung, die Einhaltung der Einschluss- / Ausschlusskriterien, die Dokumentation der AE und die Aufzeichnung der wichtigsten Wirksamkeits-, Sicherheits- und Verträglichkeitsendpunkte.

Methodik

Nierenfunktion

Die eGFR wird anhand der Epidemiologie chronischer Nierenerkrankungen bewertet Zusammenarbeit (CKD-EPI) Gleichung (ml / min / 1,73 m2). Die Proteinausscheidung wird als Protein / Kreatinin-Verhältnis im Urin dokumentiert (mg / g).

Transplantationsbiopsien

Index- und Follow-up-Biopsien werden mit ultraschallgeführten perkutanen Techniken durchgeführt (1-2 Kerne pro Biopsie, 16-Gauge-Nadel). Nach der Biopsie werden die Patienten 5-8 Stunden lang engmaschig auf Komplikationen überwacht (serielle Blutdruckmessungen, Überwachung auf Hämaturie, Hämoglobinkontrolle 4 Stunden nach der Biopsie). Die Histomorphologie wird an Paraffin-eingebetteten Abschnitten unter Anwendung der Standardmethodik bewertet. Für die immunhistochemische C4d-Färbung verwenden wir einen polyklonalen Anti-C4d-Antikörper (BI-RC4D, Biomedica, Wien, Österreich) und minimale immunhistochemische Färbung (C4d Banff Score ≥ 1) entlang peritubulärer Kapillaren wird als positiv angesehen. Biopsien werden auch durch Elektronenmikroskopie zum Nachweis von Mikrozirkulationsverletzungen ausgewertet. Morphologische Ergebnisse werden von erfahrenen Nierentransplantationspathologen ausgewertet, die für die Behandlung verblindet sind Zuordnung. Darüber hinaus werden Biopsien mit einer gründlich validierten molekularen Methode (MMDx ™) analysiert, wie vom Banff-Schema vorgeschlagen . Für jede Biopsie wird ein 3-mm-Teil eines Kerns platziert sofort in RNAlater, bei – 20 ° C gelagert und bei Umgebungstemperatur oder Trockeneis an das Alberta Transplant Applied Genomics Centre (ATAGC, Universität von Alberta, Edmonton, AB, Kanada) zur Gen-Array-Analyse. Molekulare Scores basierend auf vom maschinellen Lernen abgeleiteten läsionsbasierten Klassifikatoren im Zusammenhang mit Abstoßung (ABMRpm, TCMRt, alle Abstoßung) wird unter Verwendung des Edmonton-Referenzsatzes von > 1200 Biopsien generiert. Darüber hinaus werden Genexpressionsmuster mit bewertet unvoreingenommene Archetypanalyse . Zur Klassifizierung der ABMR werden alle Biopsieergebnisse im Kontext der molekularen Ergebnisse analysiert. ABMR-Kategorien und morphologische Einzelläsionen werden definiert und bewertet nach den jüngsten Aktualisierungen der Banff-Klassifikation .

HLA-Antikörpernachweis

Seren werden hitzeinaktiviert, um komplementabhängige In-vitro-Artefakte auszuschließen (Prozonenphänomen) und Single-Antigen-Flow-Bead-Tests unterzogen (LABscreen Single Antigen Assays; One Lambda, Canoga Park, CA, USA). Die Testergebnisse werden als mittlere Fluoreszenzintensitäten dokumentiert; eine mittlere Fluoreszenzintensität (MFI) > 1000 wird als positiv angesehen. Die Spenderspezifität wird anhand von HLA-Typisierungsergebnissen für Spender und Empfänger mit niedriger oder hoher Auflösung definiert. Virtuelle panel-reaktive Antikörperspiegel werden mit spezifischen Softwaretools berechnet (http://www.eurotransplant.org/cms/).

Zytokine und Marker für Endothelaktivierung / -verletzung

Seren, die in den Wochen 0, 12 und 52 gesammelt wurden, werden auf IL-6, lösliches IL-6R und Marker analysiert, die Entzündungen oder Endothelaktivierung und -verletzung widerspiegeln Bead-Arrays auf einer Luminex-Plattform oder enzymgebundene Immunosorbens-Assay-Technologie. Parallel dazu werden Urinproben mit der gleichen Methode getestet. Für die Luminex-basierte Analyse von Serum- und Urinbiomarkern verwenden wir humane ProcartaPlex Simplex Immunoassays nach dem Herstellerprotokoll (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA). Die Tests werden an einem Luminex 200-Instrument durchgeführt. Die Panels umfassen Kombinationen verschiedener Marker, die möglicherweise das Ausmaß der Entzündung und Verletzung widerspiegeln, einschließlich Chemokine (z. B. CXCL9 und CXCL10) und Endothelmarker (z. B. VCAM-1 und E-Selectin). Die Harnergebnisse werden auf die Kreatinin-Konzentrationen im Urin normalisiert.

Leukozyten-Subpopulationen

Die zugrundeliegenden Mechanismen der ABMR, insbesondere die Rolle peripherer T- und B-Zell-Untergruppen, sind nicht vollständig geklärt. Daher ist die prospektive Immunphänotypisierung ein vielversprechender Ansatz, um die Auswirkungen der IL-6-Blockade auf immunregulatorische Wege weiter aufzuklären. Zur Überwachung von Leukozyten (Sub-) Populationen werden reproduzierbare Immunmonitoring-Panels für die Phänotypisierung verwendet. Kürzlich hat das internationale Konsortium „The ONE study“ ein standardisiertes Panel (DuraClone®, Beckman Coulter, Marseille, Frankreich) für die durchflusszytometrische Immunphänotypisierung entwickelt, das robuste Ergebnisse zeigte . In den DuraClone Immune Monitoring Kits enthalten vordefinierte Teströhrchen eine gebrauchsfertige Schicht mit dem getrockneten Antikörper-Panel. Bis zu 10 verschiedene monoklonale Antikörper pro Röhrchen ermöglichen die Identifizierung von Leukozyten-Subpopulationen (z. B. T-Zellen, B-Zellen, natürliche Killerzellen), die in Vollblutproben vorhanden sind.

Genexpressionsanalyse

Für die Genexpressionsanalyse werden 5 ml Blut in PAXgene–Blut-RNA-Röhrchen gesammelt und bis zur Analyse bei – 80 ° C gelagert. Nach dem Auftauen wird die RNA isoliert und in komplementäre DNA (cDNA) transkribiert. Die Menge an RNA / cDNA von IL-6 oder IL-6R wird bestimmt durch quantitative Echtzeit-Polymerase-Kettenreaktion (PCR) unter Verwendung des TaqMan-Assays.

Torque Teno Virus (TTV) Quantifizierung

TTV-DNA wird in gespeicherten Plasmaproben unter Verwendung von Echtzeit-PCR quantifiziert, wie zuvor beschrieben .

Pantoprazol PK

Flüssigkeitschromatographie Tandem-Massenspektrometrie wird angewendet, um Pantoprazolspiegel und Kinetik zu bewerten .

Statistische Methoden

Analysen werden nach dem Intention-to-Treat-Prinzip durchgeführt. Kontinuierliche Daten werden als Mittelwert und Standard dargestellt Abweichung (SD) oder Median und Interquartilbereich (IQR) und kategoriale Variablen als absolute und relative Häufigkeiten. Gruppenvergleiche (zu Studienbeginn und nach drei Monaten) für kontinuierliche Daten (CRP-Spiegel, eGFR, Protein / Kreatinin-Verhältnis, Spiegel von Abstoßungsbiomarkern in Serum und Urin, IL-6 / IL–6R-Expressionsniveaus, HLA-Antikörpereigenschaften , morphologisch oder molekular (z. B. ABMR-Score) Biopsie-Scores) werden gegebenenfalls unter Verwendung parametrischer (t-Test) oder nicht parametrischer (Mann-Whitney U-Test) Tests analysiert. Der genaue Test von Fisher wird verwendet, um kategoriale Daten zwischen Gruppen zu vergleichen (Auftreten von Nebenwirkungen, morphologische / molekulare ABMR-Kategorien und Biopsie-nachgewiesene akute Abstoßung zu Studienbeginn und nach drei Monaten). Transplantation und Patientenüberleben oder AE-freies Überleben werden mit bewertet Kaplan–Meier-Analyse und der Mantel-Cox-Log-Rank-Test werden für Gruppenvergleiche angewendet. Für gepaarte Daten (z. B. morphologische und molekulare Biopsie-Scores nach 3 vs. 12 Monaten in der Gesamtkohorte), gepaarter t-Test oder Wilcoxon-Test wird verwendet. Ein zweiseitiger P-Wert < 0.05 wird als statistisch signifikant angesehen. Die Analyse der PK von Clazakizumab und Pantoprazol umfasst eine Beschreibung der zeitlichen Entwicklung der Antikörper / Arzneimittelkonzentration. Eliminationshalbwertszeit, Tmax, Cmax, Clearance und Verteilungsvolumen werden mit Standardsoftware berechnet. Für statistische Analysen werden IBM SPSS Statistics 24 (IBM Corporation, Armonk, NY, USA) und SAS für Windows (The SAS Institute Inc., Cary, NC, USA) verwendet werden.

Studienregistrierung

Die Studie wurde von den österreichischen (Bundesamt für Sicherheit im Gesundheitswesen, Bundesamt für Gesundheit und Lebensmittelsicherheit) und deutschen Zulassungsbehörden (Bundesinstitut für Impfstoffe und Biomedizin, Paul-Ehrlich-Institut) genehmigt. Die Studie wurde in der Europäischen Datenbank für klinische Studien (EudraCT-Nummer: 2017-001604-30; prospektive Registrierung) und in einer öffentlichen Datenbank für klinische Studien (ClinicalTrials.gov NCT03444103; rückwirkende Registrierung).