the state veterinary diagnostic laboratory, The Texas A&M Veterinary Medical Diagnostic Laboratory, TVMDL, test honderdduizenden monsters per jaar. Echter, op de rand van elk jaar herten jachtseizoen, test nummers beginnen te spike als de vraag naar chronische verspillende ziekte, CWD, testen toeneemt.
Wat is Chronic Wasting Disease?
CWD is een progressieve neurologische ziekte die verschillende hertachtigen treft. De CWD gevoelige soorten zijn witstaarthert, zwartstaarthert, muilezelhert, eland, Edelhert, rendier, Sika en eland. Sinds het voor het eerst werd gemeld in 1967, is het gedocumenteerd in zowel gevangen als vrijlopende hertachtigen in 25 staten en drie Canadese provincies.
CWD heeft de afgelopen jaren enige aandacht gekregen toen meldingen van een” zombie-hertenziekte ” opdoken en zich over verschillende media verspreidden. Hoewel pakkend, “zombie herten ziekte” is eigenlijk een verkeerde benaming, omdat dieren getroffen met CWD zijn niet dood. Eenmaal getroffen, kan het twee tot vier jaar duren voor het besmette dier om te beginnen met het vertonen van klinische symptomen, die kunnen nabootsen “zombie-achtige” gedrag als de ziekte vordert. Aangetaste dieren vertonen tekenen zoals gewichtsverlies, kwijlen, struikelen en stupor. Deze combinatie van klinische symptomen culmineert in een dier dat lijkt te “afval weg,” coining de werkelijke naam van de ziekte.
net als bij boviene spongiforme encefalopathie, BSE bij runderen en scrapie bij schapen en geiten is CWD een van nature voorkomende overdraagbare spongiforme encefalopathie, TSE of prionziekte. Prionen zijn abnormale eiwitten en extreem moeilijk te vernietigen. Eenmaal geïnfecteerd, de prionen in eerste instantie invloed op de lymfeklieren van het dier en na het verspreiden door het lichaam, uiteindelijk infecteren de hersenen.In 2012 werd CWD voor het eerst ontdekt in Texas bij muilezelherten in de Hueco Mountains. Sindsdien is de ziekte nog steeds ontdekt in de West-Texas en Panhandle regio ‘ s bij muilezel herten, witstaarthert en elanden.
hoewel de geschiedenis van CWD in Texas kort is in vergelijking met andere staten, neemt het aantal diagnostische tests nog steeds toe naarmate overheidsinstellingen de ziekte proberen onder controle te houden. In Texas is TVMDL het enige laboratorium dat is goedgekeurd om op CWD te testen.
CWD-indieners: Wie zijn zij?
vorig jaar voerde TVMDL ongeveer 26.500 CWD-tests uit. Van het totale aantal tests werd bijna de helft uitgevoerd van oktober tot December. Deze toename van CWD inzendingen valt samen met de herten jachtseizoen in Texas.
jagers moeten zich tijdens het hertenseizoen aan bepaalde richtlijnen houden vanwege programma ‘ s van de Texas Parks and Wildlife Department, TPWD, gericht op het verminderen van de verspreiding van CWD. Als bijvoorbeeld een hert wordt gedood in een zone in CWD-quarantaine, moeten monsters worden verzameld en voor CWD-tests worden ingediend. Monsterverzameling vindt plaats bij controlestations voor jagers, hertenverwerkingsinstallaties en soms bij taxidermisten.
CWD-testaanvragen worden ingediend door overheidsinstanties, zoals TPWD en de Texas Animal Health Commission, TAHC en hertenkwekers. TVMDL biedt service aan deze agentschappen en de hertenindustrie om te helpen bij de voortdurende inspanningen om de verspreiding van ziekten zoals CWD te volgen.
het opsporen van de ziekte
eenmaal in het laboratorium test TVMDL monsters met behulp van een van de twee methoden: enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA, of immunohistochemie, IHC. Beide testmethoden vereisen weefsels uit de lymfeklieren van een hert of obex.
ELISA-test
de meest gevraagde methode is de ELISA-test. Deze methode is de gevoeligere optie omdat het verse weefsels gebruikt in tegenstelling tot weefsels die in een conserveermiddel worden bevestigd. Het gehele proces, met uitzondering van de voorbereidingstijd van het monster, duurt meestal ongeveer drie uur. Zodra een monster aankomt in de serologie sectie bij TVMDL, zal het beginnen met de eerste van drie fasen: monstervoorbereiding.
tijdens de monstervoorbereiding worden precieze volumes en anatomische locaties van lymfeklier-en/of OBEX-weefsels gesneden en in unieke slijpbuizen geplaatst. De buizen worden geplaatst op een homogenisator instrument dat de weefsels vloeibaar maakt en bereidt ze voor op de tweede fase van het testen, zuivering.
de zuiveringsfase is semi-geautomatiseerd. Een vloeistof handling instrument begint met het verwerken van het monster. Dit proces verteert normale prionen met proteïnase K en laat eventuele ziekteverwekkende prionen achter. Daarna wordt het vloeibare eindproduct van het zuiveringsproces gecentrifugeerd om een pellet te vormen. De pellet wordt een tweede keer behandeld en vervolgens verdund. De pellet zal dan overgaan tot de laatste testfase en bepalen of er CWD prionen aanwezig zijn.
detectie is de laatste fase van het ELISA-testproces. In deze fase wordt de verdunde monsterpellet Getest met behulp van een sandwich-ELISA. Een sandwich ELISA gebruikt twee lagen antilichamen om de concentratie van een bepaald antigeen te bepalen, in dit geval de CWD prion. Een Kleurveranderend substraat wordt toegevoegd tijdens het proces als visuele indicator van de aanwezigheid van CWD prionen in het monster. Als een monster een significante kleurverandering ontwikkelt, wordt het beschouwd als een” initiële reactor, ” IR, en wordt opnieuw getest. IR-monsters die nog steeds wijzen op de aanwezigheid van CWD – prionen na hertesten worden doorgestuurd naar de U. S. Department of Agriculture-Animal and Plant Health Inspection Service, USDA-APHIS, National Veterinary Services Laboratory.
IHC-Test
TVMDL ‘ s tweede CWD-testoptie, IHC, maakt gebruik van vast of geconserveerd Weefsel. Als de weefsels bij TVMDL vers of niet goed vast komen, wordt een dag aan het proces toegevoegd om tijd toe te staan dat de weefsels in formaline worden gefixeerd totdat ze klaar zijn voor het testen.
eenmaal goed gefixeerd, worden weefsels in individueel geëtiketteerde plastic cassettes geplaatst. De cassettes zijn nodig voor de volgende stap waarbij weefsels ongeveer 13 uur worden verwerkt. Gedurende deze tijd worden weefsels uitgedroogd en wordt al het water vervangen door paraffinewas om de celstructuur van het weefsel te behouden.
na verwerking worden weefsels ingebed in een paraffinewasvorm om ze met behulp van een microtoom voor te bereiden op het scheiden. Dit instrument snijdt het wasweefsel blok in 5-micron dikke secties, dunner dan een streng van menselijk haar.
het dunne deel van het weefsel wordt op een glasplaatje gemonteerd. Na een nacht drogen worden de glasplaatjes klaargemaakt voor kleuring. De dia ‘ s worden behandeld om de paraffine te verwijderen en ervoor te zorgen dat de plaatsen van de antigeenband beschikbaar zijn tijdens het het bevlekken proces. Dit proces identificeert CWD-antigenen in het weefsel door een anti-prionmolecuul aan het CWD-antigeen in positief weefsel te binden en dan een rood chromogeen aan dat molecuul te binden.
dit semi-geautomatiseerde kleuringsproces duurt in totaal ongeveer zes uur; twee uur handarbeid en vier automatische uren. Gedurende deze periode kunnen de drie kleuring-instrumenten 90 glasplaatjes bevlekken. Wanneer het bevlekken is voltooid, worden alle dia ‘ s coverslipped en gegeven aan TVMDL pathologen die microscopisch elke dia voor de aanwezigheid van CWD inspecteren.
net als bij de ELISA-testmethode wordt een monster waarvan wordt vermoed dat het CWD heeft, naar het National Veterinary Service Laboratory in Ames, Iowa gestuurd voor bevestigende tests en een definitieve diagnose.
het TVMDL-verschil
hoewel andere laboratoria in de VS CWD-tests aanbieden, onderscheidt TVMDL zich door zijn toewijding aan de individuen in de Texaanse hertenindustrie. Het agentschap werkt nauw samen met andere overheidsinstellingen en hertenfokkers om werkrelaties en persoonlijke verbindingen tot stand te brengen.
voor meer informatie over CWD-testen bij TVMDL, bezoek tvmdl.tamu.edu of bel het College Station laboratorium op 1-888-646-5623.