Her-2/neu status kan worden gedetecteerd door analyse van het aantal genkopieën door Southern blotting, PCR of FISH, of de hoeveelheid uitgedrukt eiwit kan worden vastgesteld door Western blotting, enzym-linked immunosorbent assay, of IHC. De twee meest gebruikte methoden op dit moment zijn IHC en FISH, omdat ze in staat zijn om Her-2/neu te evalueren in formaline-gefixeerde paraffine-ingebedde archiefweefsels.
de meeste Her-2 / neu-onderzoeken zijn uitgevoerd door IHC, dat overexpressie van het her-2/neu-eiwitproduct op het celmembraan van tumorcellen detecteert. In deze studie werd gebruik gemaakt van het CB11 monoklonale antilichaam, dat, net als de gestandaardiseerde polyklonale HercepTest, gericht is tegen het intracytoplasmatische domein van het HER2/neu molecuul .
IHC is breed toegankelijk en gemakkelijk te presteren tegen een redelijke prijs. Nochtans, wordt deze semi-kwantitatieve procedure belaagd door technische artefacten, gevoeligheidsverschillen tussen verschillende antilichamen, en subjectieve interpretatie, resulterend in interobservervariabiliteit tussen pathologen . Studies onthullen de overgevoeligheid van de Amerikaanse Food and Drug Administration-goedgekeurde HercepTest, met een vals positief percentage zo hoog als 50% . Thomson en collega ‘ s concludeerden dat in gevallen met een IHC-vlekintensiteit van 1 + of 2+, de interobserver-overeenkomst slecht is en de voorspellende waarde onbevredigend is voor klinisch gebruik; zij hebben aanbevolen aanvullende tests uit te voeren, bij voorkeur met vissen .FISH is een tamelijk objectieve en kwantitatieve procedure voor het opsporen van Her-2 / neu-genamplificatie op de kernen van tumorcellen. De nadelen van deze procedure zijn zijn steile kosten (10 keer dat van IHC), verfijning, de behoefte aan een fluorescentiemicroscoop, het tijdelijke signaal (het vereist een speciale camera), en zijn onvermogen om tumorhistomorfologie te ontdekken en te beoordelen.
Her-2 / neu-overexpressie gedetecteerd door IHC is sterk gecorreleerd met genamplificatie gedetecteerd door FISH (tot 98% concordantie) . Echter, 3-15% van borstcarcinomen vertonen matige Her-2 / neu membraankleuring zonder bewijs van amplificatie. Zij vertegenwoordigen het vaakst hoogst gevoelig niet-specifiek bevlekken (vals-positief) en, zelden, of verbeterde mRNA-transcriptie in afwezigheid van versterking of genamplificatie die onder het opsporingsniveau van hybridisatiemethodes in situ is .Kakar en collega ‘ s concludeerden dat IHC geschikt is voor de initiële Her-2/neu-beoordeling, maar patiënten bij wie de tumoren minder dan 3+ scoorden (in het bijzonder patiënten die worden geïnterpreteerd als 2+) zouden baat hebben bij FISH om de Her-2/neu-status nauwkeuriger te beoordelen en om onjuiste prognose en ongepaste behandeling te voorkomen .
CISH is een recente vooruitgang in Her-2/neu detectie. Het maakt gebruik van een robuuste unieke sequentie sonde ontwikkeld voor in situ hybridisatie en is een veelbelovend praktisch alternatief voor vissen. Na de eerste cish studie door Tanner en collega ‘ s , zeven andere rapporten gunstig gevalideerd cish resultaten . De concordantie tussen CISH en vis varieerde van 85% tot wel 100% . Al deze rapporten merkten de voordelen op van CISH boven FISH: het vereist een gewone microscoop; de methode is minder omslachtig en zuiniger; de signaalintensiteit is permanent; en pathologen zijn vertrouwd met IHC-signalen en zijn in staat om bevindingen te correleren met de onderliggende tumor histomorfologie. Met CISH kunnen waarnemers velden van invasief ductaal carcinoom selecteren, waarbij foci van intraductaal carcinoom worden vermeden waarvoor Her-2 / neu een andere klinische betekenis heeft. CISH is een specifieke, gevoelige, en gemakkelijk toepasbare methode voor de opsporing van Her-2/neu genamplificatie, en het kan samen met IHC voor de evaluatie van patiënten met borstcarcinoom worden gebruikt . Ross en collega ’s bespraken onlangs de huidige status van Her-2/neu-testen, en ze concludeerden dat CISH een handigere gengebaseerde techniek is die’ in de coulissen wacht’.
in deze studie was de concordantie tussen 3+ IHC en CISH-amplified cases 100% (40 van 40), wat aangeeft dat alle genamplified cases het Her-2/neu-eiwit overexpresteren. Daarentegen bedroeg de Overeenkomst voor 2 + IHC en cish-amplified gevallen slechts 45%, wat lager is dan eerder gemeld (93%) . De 13,75% (22 van de 160) IHC-positieve/CISH niet-versterkte tumoren in deze studie, die allemaal 2+ IHC scores hadden, is hoger dan het 6% vals positieve resultaat van Zhao en collega ’s , hoewel vergelijkbaar met het 17% resultaat (IHC CB11 versus FISH) verkregen door Tubbs en collega’ s . Blijkbaar vinden we dat de 2+ IHC score dubbelzinnig is in vergelijking met CISH. Deze subgroep zou baat kunnen hebben bij verdere cish-reflextesten. Alle negatieve IHC-gevallen waren niet-versterkt, waaruit bleek dat alle negatieve resultaten volledig overeenkwamen. De 86,25% algemene concordantie tussen IHC (gebruik makend van CB11 antilichaam) en CISH in deze studie is lager dan de vorige rapporten (94-96%) . We zijn het eens met Sapino en collega ‘ s dat genamplificatie analyse kan worden vermeden in alle 0, 1+, en 3+ IHC gevallen omdat de resultaten voorspelbaar zijn van IHC en volledig in overeenstemming zijn met CISH . Het nut van CISH is daarom in het verder testen van HER-2/neu verandering op twijfelachtige gevallen in IHC, die de primaire screening methode blijft. Het gecombineerde IHC-CISH-algoritme biedt een economische en uitgebreide Her-2 / neu-gegevens om clinici te begeleiden bij het in kaart brengen van behandelingsopties.
de CISH-categorie met lage amplificatie (6-10 signalen) was het moeilijkst te interpreteren, wat een nauwkeurige telling van genkopieën vereiste. Signaalclustering, meer waarschijnlijk een gevolg van intrachromosomale versterking van homogeen kleurende gebieden, was onmiddellijk zichtbaar in sterk versterkte gevallen en werd gemakkelijk geëvalueerd .
een test voor chromosoom 17 aneuploïdie werd niet uitgevoerd op niet-versterkte en laag-versterkte cish-assays, omdat recente studies hebben aangetoond dat het de analyse duurder en tijdrover maakt zonder relevante gegevens toe te voegen, afgezien van het rapporteren van het aanbevolen aantal nucleaire amplicons en het fungeren als een andere vorm van interne controle voor de hybridisatiereactie . Bovendien, hoewel de fabrikant (Zymed) suggereerde dat chromosoom 17 aneuploïdie worden getest op alle gen-amplified gevallen , we het eens met Vera-Roman en collega ‘ s, die er terecht op gewezen dat omdat de meeste polysomie resultaten vallen binnen het grijze gebied van drie tot vijf signalen, het instellen van de drempel van cutoff signaal punten tot een hoogtepunt van zes of meer (zoals in deze studie) vrijwel elimineert de polysomie variabele.
in dit onderzoek werden geen IHC-negatieve cish-versterkte tumoren waargenomen. Dit kan waarschijnlijk worden verklaard door het feit dat dit een single-institution studie was waarschijnlijk uniform vaste en verwerkte de paraffineblokken van het tumorweefsel evenals een eenvormige techniek van de antigeenherwinning te hebben, die beide van hoge kwaliteit IHC gemakkelijker maken. Zhao en collega ‘ s meldden af en toe IHC-negatieve cish-versterkte gevallen, en zij waren van mening dat deze een klein onbepaald percentage vertegenwoordigen dat Her-2/neu zonder overexpressie versterkte . Dezelfde studie en andere FISH studies noteerden ook zeldzame 3 + IHC tumoren die niet-versterkt waren (vals-positief) . De redenen voor de discrepanties tussen IHC en FISH zijn vergelijkbaar met die tussen IHC en FISH, zoals eerder vermeld in dit verslag.
de oorzaken van het falen van de test en de valse negativiteit die door eerdere CISH-studies werd geboden, waren een afwezigheid van tumor op de sectie, een onvermogen om te scoren vanwege een hoge achtergrond, een lage signaalintensiteit ondanks herhaalde proeven, een afwezigheid van signalen uit de interne controle en het gebruik van alcohol–formaline–azijnzuur fixeermiddel . Verder werd opgemerkt dat warmtevoorbehandeling en spijsvertering met pepsine de meest kritische procedures voor geoptimaliseerde cish-prestaties zijn, en dat de succesvolle tarieven van CISH laag waren toen 20-jaar-oude weefselblokken werden gebruikt .
Sauer en collega ‘ s correleerden IHC-en FISH-resultaten met klinische prognose. Zij merkten op dat zowel IHC/FISH-positive gevallen als FISH-positive-only gevallen dezelfde prognose hadden met betrekking tot overleving, terwijl IHC-positive-only gevallen een prognose hadden die vergelijkbaar was met die van IHC/FISH-negative tumoren. IHC-negatieve / FISH-positieve gevallen daarentegen hadden een overlevingskans die vergelijkbaar was met die van IHC/FISH-positieve gevallen. Dezelfde auteurs concludeerden dat als alleen IHC als primair instrument zou worden gebruikt, IHC-negatieve/FISH-positieve gevallen zouden worden gemist; deze vrouwen zouden niet het voordeel van trastuzumab hebben en hun overleving negatief zou worden beïnvloed. In tegenstelling, IHC-positief-slechts tumors schijnen om tot een betere prognostische groep te behoren, en het nalaten om hen te ontdekken zou waarschijnlijk geen negatief effect op overleving hebben .
omdat klinische uitkomststudies nog geen aandacht hebben voor het nut van de resultaten van CISH met een lage en een hoge versterking, in het bijzonder de onzekere significantie van de groep met een lage versterking, zijn deze categorieën nog steeds in beweging. Ondanks deze beperking is er nog steeds waarde in het afzonderlijk rapporteren van dergelijke versterkte groepen op dit moment, in afwachting van welke klinische associaties in de toekomst zullen worden verkregen. Intraobserver en interobserver variabiliteit bij het rapporteren van laag-versterkte en hoog-versterkte cish resultaten werden niet opgenomen in deze studie, hoewel de patholoog die de cish assays interpreteerde consequent de criteria van de fabrikanten toepaste.Borstkanker bij premenopauzale vrouwen heeft een ander biopathologisch profiel dan dat bij oudere patiënten, met een overwicht van ongunstige prognostische parameters, waaronder een hogere frequentie van graad 3 tumoren en frequentere Her2/neu overexpressie . Jonge leeftijd dient als surrogaatmaat voor ongunstige prognostische profielen . Deze studie slaagde er niet in het verband vast te stellen tussen de menopauzale status, die willekeurig werd vastgesteld op 50 jaar en ouder, en HER2/neu-wijziging.
HER2 / neu amplificatie was direct gecorreleerd met graad en histologisch type borstkanker . Sapino en collega ‘ s stelden voor dat, op basis van tumorgraad en histologisch type, de patholoog aan de oncoloog moet kunnen aangeven welke borstkanker Her2/neu-analyses vereist . Nochtans, terwijl geen van de vier goed-gedifferentieerde tumors HER2/neu-versterking of overexpressie vertoonden, werd geen significante correlatie in deze studie in termen van HER2/neu-status en histologische rang verzameld; wij abonneren daarom nog aan het testen van Her2/neu op alle nieuw gediagnosticeerde borstkanker. Over het algemeen voorspelde de leeftijdsverdeling van borstkankerpatiënten en tumor histologische graad de IHC en Cish Her2/neu status niet significant.