monoklonale antilichaamgeneesmiddelen (mAb) hebben aanzienlijke belangstelling gekregen vanwege hun sterke therapeutische potentie en specificiteit voor de behandeling van inflammatoire, oncologische en auto-immuunziekten. Wegens hun intrinsieke ingewikkeldheid toe te schrijven aan een groot aantal micro-heterogeneities, is er een cruciale behoefte van analytische methodes om een uitvoerige diepgaande karakterisering van kandidaat molecules te verstrekken.
Creative Biolabs levert een overvloed aan analytische technieken voor de karakterisering en homogeniteit van antilichamen in alle stadia van de ontdekking van mAb, preklinische en klinische ontwikkeling. Hier, introduceren wij de toepassing van capillaire iso-elektrische het concentreren (cIEF) voor de heterogeniteitsanalyse van de antilichaamlading. Het wordt veel gebruikt voor de karakterisering van therapeutische mAbs. Door de pI van MAB charge isovormen te bepalen, levert cIEF informatie die cruciaal is voor het vaststellen van identiteit, zuiverheid, post-translationele modificaties en stabiliteit.
Inleiding tot cIEF
cIEF is gebaseerd op het principe van capillaire gelelektroforese. De elektroforese is een scheidingstechniek die op de differentiële snelheid van beweging van geladen species in een elektrisch gebied, naar de elektrode van tegenovergestelde Last wordt gebaseerd. Om molecules te scheiden die op iso-elektrisch punt (pI) worden gebaseerd, wordt een pH-gradiënt binnen het gel gevestigd door ampholytemengsels te gebruiken. Onder het elektrische veld migreren de moleculen langs het elektrische veld totdat ze de pH bereiken die overeenkomt met de pI, waar de positieve en negatieve ladingen in de moleculen in evenwicht zijn. De UV-absorptie over het gehele capillaire wordt gemeten gedurende de scheiding, toestaand real-time observatie en een definitieve kwantificering.
Fig.1 principe van iso-elektrische scherpstelling. (Pergande, 2017)
cIEF for Charge Heterogenity Characterization
mAbs zijn vatbaar voor verschillende post-translationele wijzigingen (bijv., glycosylation, phosphorylation, oxidatie, en lysine knipsel), leidend tot ladingsvarianten. Sommige van deze ladingsvarianten kunnen in verschillende mate een mogelijk effect hebben op de biologische activiteit en de veiligheid van het molecuul. Bijvoorbeeld, beïnvloedt het glycosylationprofiel van mAbs hoogst de biologische activiteit van de proteã ne. Daarom is routinematige monitoring van de heterogeniteit van de MAB-lading een integraal onderdeel van elk productkwaliteits-en levenscyclusbeheerplan. Het is ook een van de belangrijkste analytische aspecten van biosimilar ontwikkeling en vergelijkbaarheid studies. Als ladingsgebaseerde scheidingstechniek is cIEF een krachtig hulpmiddel om het laadprofiel van de mAbs te karakteriseren, omdat verschillende ladingsvarianten kunnen worden onderscheiden op basis van hun pI met behulp van interne kalibratie. Aangezien cIEF zeer hoge reproduceerbaarheid en specificiteit biedt, is dit een van de meest populaire hulpmiddelen voor mAb-analyse.
Kenmerken van Onze Diensten
- Karakterisering van de omvang en kosten van varianten van intact en verminderd mAbs met cIEF
- Analyse van de kosten van varianten van mAbs met behulp van een orthogonale aanpak
- cIEF scheiding gevolgd door massaspectrometrie (MS) analyse
- diensten op Maat volgens de specifieke vereisten
Creatieve Biolabs biedt ook een breed scala van antistof-functie tests om inzicht te krijgen in de effecten van de lading varianten op antilichaam-activiteit en eigenschappen, zoals de effector functies, FcRn, en antigen bindende affiniteit, en PK, waardoor de structuur-functie relaties. Als u geïnteresseerd bent in onze service, neem dan contact met ons op om uw eisen te bespreken.