wanneer u denkt aan het scheiden van eiwitten, denkt u er dan aan om ze te scheiden met een gel? Specifiek met behulp van SDS-PAGE? Als je “ja” antwoordde, is dat Voor een goede reden. SDS-PAGE is alomtegenwoordig in moleculaire biologie laboratoria omdat het goed is in het scheiden van eiwitten. SDS-PAGE neemt echter veel tijd in beslag en is arbeidsintensief. Dus laten we je gereedschapskist uitbreiden en kijken naar een andere manier om eiwitten te scheiden: capillaire gelelektroforese.
capillaire gelelektroforese (CGE), ook bekend onder de naam capillaire zeefelektroforese, ook bekend onder de naam capillaire zeefelektroforesea. SDS-capillaire gelelektroforese scheidt eiwitten in een gel via kolommen gevuld met een scheidend medium.
Equipment Requirements
in capillaire gelelektroforese migreren uw analyten (de eiwitten die u wilt bestuderen) door een elektrolytische oplossing via haarvaten door de trekkracht van een elektrisch veld – zoals de meer bekende SDS-pagina. Om CGE uit te voeren heb je nodig: een monsterflacon, bron-en bestemmings flacons, zeefmatrix, capillaire kolom, een on-column detector, een data output en handling apparaat en een hoogspanningsvoeding.
Protocol in het kort
bij een CGE-experiment begint het monster bij de bronflacon en gaat het richting de doelflacon. Hier is het protocol in het kort:
Stap 1: de flacons van de bron en bestemming en de capillaire verbindingen worden gevuld met een elektrolytische oplossing en het monster wordt in het capillaire gebracht.
Stap 2: zodra het elektrische veld is aangebracht, migreren de analyten van de zijde van de bronflacon naar de zijde van de doelflacon.
Stap 3: de on-column detector (niet verrassend) maakt on-column detectie mogelijk. De detector verzendt gegevens naar een data output en handling apparaat, zoals een computer.
Stap 4: deze gegevens worden vervolgens weergegeven als een elektroferogram. Uw analyten worden gelezen als pieken van verschillende retentietijden.
voor meer informatie over hoe dit werkt, bezoek het nuttige materiaal van UC Davis.
meer over de Matrix
uw zeefmatrix kan bestaan uit een aantal gepolymeriseerde materialen, waaronder Vernet polyacrylamide, dextraan en poly(ethyleenglycol of ethyleenoxide). Uw kolommen zijn meestal gemaakt van vervangbare zeefpolymeren. Het is dan aan jou of je je eigen kolommen maakt of ze koopt. Beckman Coulter, Agilent Tech en Bio-Rad laboratoria verkopen zeefkits, maar weet dat deze vereisen dat u hun CGE instrumenten te gebruiken.
waarom zou u CGE
moeten gebruiken Nu u weet wat CGE is, waarom zou u het moeten gebruiken?
- het heeft een kortere bedrijfstijden. Het uitvoeren van een CGE kost 10-100 keer minder tijd om te voltooien dan plaatgelelektroforese.
- er zijn minder stappen in een CGE-experiment dan in een SDS-PAGE-experiment. Dit komt omdat de eindresultaten van het CGE-experiment worden gegeven door een computer die op het apparaat is aangesloten.
- CGE is ook beter geschikt voor kleine eiwitten dan traditionele SDS-PAGE.
- u kunt uw eiwitten in real-time analyseren met CGE.
- CGE-apparatuur kan herhaaldelijk worden gebruikt, zonder dat eindeloze gels hoeven te worden gemaakt.
- ten slotte verloopt een groot deel van het proces automatisch. Nadat je je monster hebt toegevoegd, ben je klaar! Dit betekent dat u het proces niet hoeft te begeleiden zoals u een gel doet of deze naar speciale detectieapparatuur brengt zodra de gel is uitgevoerd.
waarom u CGE
niet zou moeten gebruiken hoewel CGE in zijn huidige vorm al meer dan tien jaar bestaat en er veel technische vooruitgang is geboekt, lijdt CGE nog steeds aan reproduceerbaarheidsproblemen. Een ander probleem is dat CGE-scheidingen in serie worden uitgevoerd. Dit betekent dat u met CGE rijstroken niet gemakkelijk kunt vergelijken. Ten slotte, als het gaat om 2D gels, CGE kan gewoon niet concurreren met de traditionele 2D scheiding.
samengevat: hoewel sommige onderzoekers trots het gebruik van CGE-technologie uitroepen, zijn er nog een aantal problemen mee. Maar stuur CGE nog niet weg! De recentste duw op dit gebied is microchip CGE, die veel belofte voor snelle eiwitanalyse toont. Dus de volgende keer dat je aan eiwitscheiding denkt, vergeet CGE niet.
hebt u CGE geprobeerd? Hoe vind je het in vergelijking met SDS-PAGE?