What Is Extrachromosomal Circular DNA and What Does It Do?

sabe-se que o ADN no núcleo celular é embalado na forma de cromossomas lineares. Por muitos anos, pesquisadores observaram comprimentos menores de DNA ao lado dos cromossomos que são organizados em formas circulares. Algumas destas partículas, que têm sido referidas como DNA circular extra-cromossômico (eccDNAs) ou microDNAs, são tipicamente pequenas (<1 kb), espessa de genes e não-amplificadas. A abundância total de eccDNA em células pode chegar a algumas centenas por célula. as moléculas de eccDNA também estão presentes na circulação em forma livre de células e oferecem a possibilidade de servir como biomarcadores baseados no sangue. Em tumores, outro tipo de DNA circular extra-cromossômico pode ser detectado, que parece ser exclusivo para células cancerosas. Anteriormente referidos como minutos duplos, mas agora referidos como DNA extra-cromossômico (ecDNA) porque eles geralmente não são duplos, estas partículas de ecDNA são muitas vezes muito grandes (tamanho médio 1.3 Mb), altamente amplificado com muitas cópias por célula, e contém muitos genes e regiões regulatórias, com um enriquecimento marcado para oncogenes. O que é importante é que, nas células cancerígenas, as ecDNAs parecem ser mais transcritivamente activas do que as suas homólogas cromossómicas e têm sido suspeitas de conferir vantagens em termos de crescimento e sobrevivência às células cancerígenas. Actualmente, a relação entre o eccDNA nas células normais e o ecDNA no cancro, caso exista, não é compreendida. Sendo uma enigmática forma de material genético, nós colocadas perguntas sobre eccDNAs e ecDNAs para um painel de especialistas na área que estudaram aspectos da eccDNAs e ecDNAs, variando de suas propriedades biofísicas, mecanismos de produção, funções fisiológicas, papéis de biologia do cancro, e potencial de diagnóstico.

O que fazem as eccDNAs? Qual foi a maior surpresa para você sobre a eccDNA até agora?

Anton Hensson: ecDNA é um veículo para amplificações de proto-oncogeno em câncer. Isto já é conhecido há algum tempo. O que foi surpreendente foi a frequência do ecDNA no câncer e a capacidade do ecDNA para formar estruturas muito complexas, incluindo partes de diferentes cromossomos, bem como sua capacidade de re-inserir no genoma.Paul Mischel: vou focar meus comentários na minha área de pesquisa, ecDNA no câncer. A maior surpresa, para mim, é o papel crítico da ecDNA no câncer humano. Os nossos dados sugerem que a ecDNA desempenha um papel crucial na condução do comportamento agressivo de algumas das formas mais malignas de cancros através de pelo menos três mecanismos de entrelaçamento: 1) porque ecDNAs falta centromeres, eles estão sujeitos a não-Mendeliana (i.é., nonchromosomal) de herança, o que permite que os tumores de alcançar altos oncogene do número de cópias, mantendo intratumoral a heterogeneidade genética; 2) o intratumoral a heterogeneidade genética é gerada pelo mecanismo de herança permite tumores evoluem rapidamente em resposta a mudanças nas condições, incluindo tratamentos, representando a habilidade notável para alguns tipos de câncer para alterar seus genomas taxas que não pode ser explicado por cromossômica de herança; 3) o alto nível de template de DNA alcançado pela herança e seleção não-Mendeliana, juntamente com a organização cromatina alterada gerada pela arquitetura circular que demonstramos (identificado em trabalho feito de perto com o Dr. Howard Chang), resulta em transcrição massiva de oncogenes. Tomadas em conjunto, estas características começam a explicar por que alguns tipos de câncer parecem genomically explodir e mudar, por que eles não passam de pura seletiva varre, e por isso que qualquer célula do tumor parece ser capaz de recapitular todo o tumor, com o seu espectro completo de heterogeneidade, em alguns tipos de câncer. Fornece também algumas informações sobre a razão pela qual as terapias orientadas contra oncogenes amplificadas no ecDNA não foram tão bem sucedidas como previsto.

Anindya Dutta: sabe-se que as eccDNAs longas visíveis em cancros por cariotipagem, também denominadas de dois minutos ou ecDNAs, transportam oncogenes que são amplificados para promover cancros. Resultados recentes sugerem que há uma grande população de menores eccDNAs, <1000 bp de comprimento que constituem 90% do eccDNA em células normais e linhas celulares de câncer. As células cancerosas também contêm ecDNAs mais longas, nem sempre visíveis pela cariotipagem, que variam em tamanho de 1 kb a de dois minutos. Os círculos que são longos o suficiente para conter genes completos podem sobreexpressar os genes e amplificá-los. Isto é muito importante para os cancros que contêm as ecDNAs longas. A função dos pequenos círculos não é clara, mas temos mostrado que eles podem expressar RNAs de uma forma desregulada, e que as RNAs são processadas em microRNAs e pequenas RNAs interferentes para reprimir genes celulares.

para mim, A maior surpresa permanece a nossa descoberta original de como as eccDNAs são onipresentes, mesmo nos tecidos normais e o fato de que a maioria delas são somaticamente mosaicos (diferentes entre diferentes células) mesmo em cancros. Só quando dão uma vantagem selectiva às células, como acontece com os oncogenes Portadores de eccDNAs em cancros, é que o mesmo eccDNA é visto em muitas células de um cancro.

Birgitte Regenberg: to find that: 1) eccDNA é comum um elemento genético nas células eucarióticas, 2) eccDNA pode surgir de todas as partes do genomas eucarióticos, 3) seleção pode levar a co-amplificação de enhancers e oncogenes no complexo eccDNA em tumores, 4) certos loci parecem formar eccDNA recorrentemente e a alta taxa de levedura (CUP1 e HXT6 HXT7). Este último resultado é realmente interessante, porque sugere que a eccDNA pode desempenhar um papel importante na evolução, proporcionando uma adaptação rápida às mudanças no ambiente (alta colher, CUP1, e baixa glicose, HXT6 HXT7).

Dennis: O meu grupo interessou-se pela eccDNA quando começámos a procurar moléculas circulares de ADN no plasma humano. Nossa jornada começou com a investigação do DNA mitocondrial (mtDNA), que existe dentro de uma mitocôndria como uma peça circular de molécula de DNA de aproximadamente 16 kb. Os nossos resultados demonstraram que as moléculas de mtDNA circulares e lineares existem no plasma humano. Uma surpresa deste trabalho é a nossa demonstração de que as moléculas circulares mtDNA e as moléculas lineares mtDNA têm diferentes tecidos de origem. Assim, as moléculas circulares de mtDNA são predominantemente do sistema hematopoiético, enquanto as moléculas lineares de mtDNA são predominantemente do fígado.

desde então estendemos o nosso trabalho para procurar o eccDNA no plasma. Em particular, demonstrámos que as moléculas de eccDNA fetal são detectáveis no plasma de mulheres grávidas. Há muitos anos que o nosso grupo se interessa pela distribuição do tamanho do ADN em circulação. É interessante notar que as moléculas de eccDNA no plasma materno (com picos de tamanho proeminentes a 202 bp e 338 bp) têm uma distribuição de tamanho mais longo do que as moléculas lineares de ADN (tamanho modal a 166 bp). Nosso trabalho anterior sobre moléculas lineares de DNA no plasma demonstrou que moléculas lineares de DNA fetal no plasma materno têm uma distribuição de tamanho ligeiramente menor do que as moléculas lineares de DNA de origem materna. Outra surpresa do nosso trabalho é que temos observado uma falta semelhante de moléculas eccdna fetal circulando quando comparadas com as de origem materna.Qual é a sua hipótese preferida em relação ao mecanismo de produção de eccDNAs dentro das células? Que provas existem para apoiar esta hipótese?

Anindya Dutta: penso que as eccDNAs são produzidas como um subproduto da reparação do ADN. A principal evidência para isso é que eles são aumentados por agentes que aumentam os danos do DNA, e temos relatado que certos genes de reparação do DNA, como o MSH3 (envolvido na reparação de erros) são necessários para produzir eccDNAs.

Birgitte Regenberg: Sou a favor de um modelo no qual qualquer forma de dano ao ADN pode potencialmente levar à circularização do ADN através dos mecanismos conhecidos de reparação do ADN. Isto envolve a sua formação através de recombinação homóloga, microhomologia e extremidade não-homóloga, juntando-se a outras vias de reparação do ADN. A maioria de nossas evidências é baseada na homologia em torno do ponto de ruptura cromossômico que levou à eccDNA, e eu acho que estudos mutantes ainda são necessários para estabelecer a causalidade. A re-replicação também pode produzir DNA circular, como explicado no modelo de amplificação invertida (do Maitreya Dunham) dependente da origem, mas ainda precisamos explorar a importância deste mecanismo. Além dos processos aleatórios, alguns círculos se formam através da recombinação direcionada (os círculos de excisão do receptor das células T) e retro-transposição quando o eccDNA repetitivo terminal longo surge da circularização do DNA linear extracromossômico durante o ciclo de vida Transposicional dos retrotransposons.

Anton Henssen: Com base na literatura publicada e nas nossas próprias observações, acredito que possam existir muitos mecanismos diferentes que contribuam para a geração da eccDNA. A EccDNA pode ser criada através de processos catastróficos de rearranjo do genoma, como a cromotripsis, mas também existem outros processos de instabilidade genômica que podem contribuir para a sua formação.Paul Mischel: mais uma vez, vou focar minhas respostas no ecDNA no câncer. Há uma visão histórica da formação de ecDNA, ou naquela época chamada formação de dois minutos, na qual algo acontece que resulta na remoção de um trecho de DNA de sua localização cromossômica nativa, seguido de replicação e amplificação como ecDNA. Pesquisadores, incluindo Robert Schimke, Geoff Wahl, Nicholas Vogt, e Bernard Malfoy, entre outros, contribuíram para este conhecimento. Os mecanismos moleculares precisos, a sua relação com possíveis anomalias no sistema de dano e resposta do ADN, continuam a ser incompreendidos. É uma área de pesquisa ativa, inclusive em nosso laboratório. Além disso, David Pellman e outros sugeriram que a cromotripsis, que ocorre quando um cromossomo retardado fica “preso”, colocado em um micronúcleo, e efetivamente cortado, poderia potencialmente formar ecDNA. O recente trabalho experimental de Peter Ly e Don Cleveland, no qual eles projetaram um cromossomo cromotrítico Y, sugere que a cromotripsis pode resultar na formação de ecDNA como um mecanismo de amplificação genética. Portanto, é bem possível que múltiplos mecanismos possam levar à formação de ecDNA, que é então realizada por seleção. Será importante desenvolver uma compreensão mecanicista mais profunda dos processos que contribuem para a formação da ecDNA.

Dennis Lo: In our size distribution analysis work involving eccDNA molecules in maternal plasma, we have observed a number of telltale evidence of nucleosomal signatures. Por exemplo, observamos uma periodicidade de 10 bp na distribuição de tamanho na vizinhança dos picos de tamanho proeminentes de 202 bp e 338 bp. Nossa conjectura é que o tamanho de 202 bp é aproximadamente o de um núcleo nucleossomo mais dois linkers, enquanto o tamanho de 338 bp é aproximadamente o de dois núcleos nucleossomos mais dois linkers. Outra observação notável é que entre as moléculas de eccDNA mais frequentemente observadas no plasma materno, temos observado quatro conjuntos de motivos trinucleotídicos no local juncional de uma molécula de eccDNA. Em tal local, o primeiro e o terceiro motivos são repetições diretas, enquanto o segundo e o quarto são outro conjunto de repetições diretas. Esperamos que estas observações contribuam para uma melhor compreensão do mecanismo de produção da eccDNA. Compreendemos perfeitamente que não dispomos de toda a informação necessária para construir um modelo completo, mas acreditamos que o campo no seu conjunto está a avançar nesse sentido.

o que se sabe sobre eccDNAs e cancro? De que forma a eccDNAs contribui para as propriedades malignas das células cancerígenas?

Paul Mischel: aprendemos o seguinte: 1) ecDNAs parecem ser exclusivos para o câncer, ou pelo menos, ainda temos de vê-lo em células normais, 2) ecDNAs unidade de alta oncogene número de cópia e manter intratumoral heterogeneidade genética através de seu mecanismo de não-Mendeliana, nonchromosomal herança; 3) ecDNAs, devido a este mecanismo de herança, pode alterar seus genomas rapidamente, inclusive para fugir terapias; 4) a alta molde de DNA nível de ecDNA, juntamente com a alteração da cromatina arquitetura, unidades enorme oncogene de transcrição, e pode remodelar o epigenome em maneiras que contribuir para a tumorigênese.

Anton Henssen: a ecDNA não é apenas um veículo para a amplificação do oncogeno, mas também pode contribuir para a remodelação do genoma através da sua re-integração no genoma linear. Temos mostrado que a re-integração do DNA circular leva à ruptura de regiões genômicas funcionalmente importantes e que essa ruptura pode contribuir para muitas características malignas das células cancerosas.

Birgitte Regenberg: sabemos que a amplificação de uma série de oncogenes na eccDNA está correlacionada com o cancro, e pacientes com cancro com certas amplificações da eccDNA têm um prognóstico fraco. É provável que a sobreexpressão de oncogenes como o MYC e o EGFR no eccDNA reprograme as células e induza o estado tumorigénico.

Anindya Dutta: os círculos em cancros são mais longos do que os das células normais, e tem sido sugerido que eles recebem um nome diferente: ecDNAs. Sabemos agora que eles estão presentes em quase todos os cancros, mas não são grandes o suficiente para serem detectáveis como dois minutos pela citogenética. As longas ecDNAs possuem genes completos, e quando esses genes são oncogenes ou genes causadores de câncer, as ecDNAs permitem sua sobreexpressão e amplificação. Por exemplo, ecDNAs transportam os seguintes oncogenes: o ONCOGENO MDM2 (originalmente descoberto em um minuto duplo) inactiva o supressor do tumor p53, enquanto o oncogeno EGFR torna glioma e células do glioblastoma hiper-sensíveis ao FEG. Porque ecDNAs não são segregados de forma igual entre células filhas, a distribuição aleatória dos círculos entre as células filhas, torna mais fácil para algumas das filhas para obter mais cópias dos círculos e, assim, ter um crescimento de vantagem por expressar mais de um codificados oncogene. Assim, a herança não-Mendeliana dos círculos de DNA torna mais fácil para a célula cancerosa amplificar círculos que dão ao câncer uma vantagem de crescimento.Acha que o eccDNAs pode servir como biomarcadores para a avaliação de doenças, de que forma e como?

Dennis Lo: eu acho que as moléculas de eccDNA no plasma seria uma direção interessante para a pesquisa de biomarcadores. Um dos desafios é que a sua concentração global parece ser substancialmente inferior à das moléculas lineares de ADN no plasma. A grande distribuição de moléculas de eccDNA no plasma tem uma vantagem de que moléculas mais longas carregariam potencialmente mais informação genética e epigenética do tecido de origem.

Anindya Dutta: já demonstrámos que as eccDNAs são 1) libertadas no sangue de tumores e do feto e 2) podem ser detectadas e quantificadas no conjunto de ADN circulante sem células. Porque são mais longos (média: 250 bases) do que o ADN circular livre de células lineares (média: 150 bases) e eccDNAs mais estáveis e livres de células circulantes poderiam ser úteis para detectar mutações em oncogenes (em cancros) ou para detectar mutações em genes importantes para o desenvolvimento (para testes pré-natais não invasivos). O tamanho mais longo dos círculos observados em cancros em relação ao tecido normal também pode ser útil como uma ferramenta de triagem na biópsia líquida de cancros.

Birgitte Regenberg: Sim, eu acho que eccDNA pode potencialmente servir como um biomarcador para uma série de doenças que estão ligadas a mutação e genômica reorganizar. O EccDNA do gene receptor das células-T já é utilizado para a detecção da doença da imunodeficiência combinada grave e dados recentes mostraram que o eccDNA de um feto pode ser detectado no plasma da mãe. Parece provável que outros eccDNA no plasma possam servir como marcadores para a monitorização de cancros, embora a concentração de eccDNA no plasma seja provavelmente limitada.

Anton Henssen: na Oncologia Pediátrica, o ecDNA sob a forma de cromossomas de dois minutos contendo MICN é já um biomarcador estabelecido para a avaliação do risco clínico em doentes que sofrem de neuroblastoma. Acredito que, da mesma forma, outras ecDNAs poderiam servir como biomarcadores para várias propriedades da doença em muitas entidades tumorais.

Paul Mischel: Sim, existem dados consideráveis que sugerem que o ecDNA pode ser um biomarcador de tipos de cancro mais agressivos e pode proporcionar uma nova visão sobre a capacidade de alguns cancros evoluírem tão rapidamente, incluindo em resposta a terapias. Existem também razões imperiosas para pensar que os doentes cujos cancros são induzidos pelo ecDNA podem ter de ser tratados de uma forma diferente.

Qual é a sua abordagem favorita para analisar o eccDNA e quais são as vantagens?

Birgitte Regenberg: a maioria da eccDNA existe em poucos números de cópias e não é capturada pela sequenciação completa do genoma. Para medir tanto eccDNA de alta e baixa cópia, meu laboratório desenvolveu métodos para isolar, sequenciar e montar eccDNA (Circle-Seq e Circle-Map, em colaboração com L. Maretty, D. Botstein, e M. Mohiyuddin). Estes métodos permitem-nos traçar o perfil eccDNA através de genomas em qualquer célula e condição. Podemos, assim, ter uma ideia de como a eccDNA se relaciona com a idade e a doença (colaborações com J. S. Johansen e Y. Lou), e no nível básico entender como eles se formam, evoluem e perecem em uma população de células.

Anindya Dutta: Meu laboratório tem usado principalmente rolando círculo de amplificação de exonuclease-resistente círculos aleatórios hexamers seguido por emparelhado fim de seqüenciamento (Círculo-Finder) para identificar as junções que são característicos de círculos. Uma vez que a maioria dos experimentos genômicos não incluem a amplificação do círculo rolante, não podemos re-analisar os dados genômicos gerados por outros grupos para identificar círculos. No entanto, recentemente temos mostrado que o doseamento para cromatina acessível à Transposase usando sequenciação (mais barata) ou sequenciamento do genoma inteiro (muito mais caro) pode detectar círculos de DNA. Esperamos que estas técnicas mais amplamente utilizadas permitam a identificação de círculos em conjuntos de dados já existentes. Além disso, um artigo recente de Dennis Lo e colegas de trabalho, mostra que os círculos podem ser detectados por digestão com enzimas comuns de restrição de corte e sequenciando os fragmentos para junções.

Dennis: Primeiro trataríamos o DNA de plasma com uma exonuclease que removeria grande parte das moléculas lineares de DNA na amostra. Então, nós cortaríamos os círculos, usando enzimas de restrição ou uma transposase, para formar moléculas lineares de DNA para análise posterior (por exemplo, sequenciação de DNA). Pensamos que o método baseado na transposase tem uma vantagem de que, ao contrário da abordagem baseada em enzimas de restrição que requer a existência de um local de reconhecimento enzimático de restrição dentro da molécula eccDNA, o método transposase pode potencialmente agir em qualquer molécula eccDNA.

Paul Mischel: O meu colega Vineet Bafna desenvolveu um poderoso kit de ferramentas, incluindo o arquitecto Amplicon e o reconstruidor Amplicon para analisar a estrutura da ecDNA. De facto, o trabalho em curso com o Dr. Bafna e o Dr. Verhaak está a ser conduzido para analisar melhor a ecDNA em bases de dados de sequenciamento de genomas disponíveis publicamente. Além disso, trabalhando em estreita colaboração com os colegas Dr. Howard Chang e Bing Ren, estamos usando aspectos do kit de ferramentas “epigenético” para caracterizar a ecDNA no câncer.

Anton Henssen: Nós gostamos de isolar e sequenciar especificamente ecDNA com sequenciação de leitura longa, que oferece a oportunidade de mapear com precisão a estrutura da ecDNA.Quais são as questões de investigação relacionadas com a eccDNA que está mais ansioso por explorar?

Paul Mischel: estamos muito interessados em compreender uma série de questões críticas relacionadas com a ecDNA, não listadas por ordem de importância. Em primeiro lugar, como se forma o ecDNA e quais são os principais “jogadores” moleculares envolvidos na sua formação? Em segundo lugar, quais são os mecanismos moleculares envolvidos na manutenção e função da ecDNA? São utilizados diferentes componentes? Os mesmos componentes são utilizados de forma diferente? Em terceiro lugar, quais são as implicações clínicas para os pacientes? O ecDNA pode ser usado para nos dizer algo importante sobre o curso clínico? Em quarto lugar, podemos encontrar pontos de intervenção que possam ser utilizados para desenvolver novos tratamentos que ajudem os doentes cujos cancros são conduzidos pelo ecDNA?Anton Henssen: como cientista médico, estou ansioso para explorar as possibilidades de usar o nosso entendimento sobre a ecDNA para encontrar novas abordagens diagnósticas e terapêuticas para pacientes que sofrem de câncer de ecDNA.

Dennis: Gostaria de explorar a capacidade da eccDNA no plasma materno para detectar ou monitorizar doenças associadas à gravidez (por exemplo, pré-eclampsia). Estou também interessado em desenvolver abordagens mais recentes e potencialmente mais abrangentes para a análise da eccDNA. Estou ciente de que as metodologias actualmente disponíveis podem ter um certo viés em subconjuntos seleccionados de moléculas eccdna circulantes.

Anindya Dutta: quero encontrar as funções do eccDNAs presentes nas células normais. Por serem tão omnipresentes e somaticamente mosaicos, será muito emocionante se contribuírem para a heterogeneidade inter-celular nos tecidos normais ou contribuírem para alguma forma de patologia. Quero também delinear quais as vias envolvidas na formação dos círculos nas células normais e cancerosas, na esperança de que a interferência com estas vias em cancros nos permita ajudar cancros claros de loci potencial de amplificação genética e, assim, ajudar na terapia. Por último, quero ver a adopção da sequenciação da eccDNA nas biópsias líquidas de cancros e nos testes pré-natais não invasivos de doenças genéticas no feto.Birgitte Regenberg: além de entender como a eccDNA pode contribuir para a variação genética e evolução dos genomas eucarióticos, estou ansioso para entender como a eccDNA é formada e mantida em um genoma. Quatro factores são susceptíveis de determinar o volume de negócios de um ADN circular numa linhagem celular: a taxa pela qual ele é formado a partir de seu locus cromossômico, sua capacidade de replicar, seu modo de segregação, bem como a vantagem de crescimento ou desvantagem que ele fornece para sua célula hospedeira. Além disso, as células eucarióticas podem potencialmente ter mecanismos para degradar ou segregar eccDNA. Isto é particularmente importante para as células meióticas em organismos multicelulares, uma vez que o eccDNA na linha germinal pode ter grandes efeitos negativos na próxima geração. Dados recentes da levedura sugerem que as células meióticas realmente evoluíram mecanismos para sequestrar um subconjunto de eccDNA (do Laboratório de Ünal em Berkley), e parece provável que o mesmo seja verdade para as células germinais em organismos multicelulares como humanos.

Autor Contribuições

Todos os autores constataram que contribuíram para o conteúdo intelectual deste artigo e tenham cumprido os 4 seguintes requisitos: (a) contribuições significativas para a concepção e o design, aquisição de dados, ou análise e interpretação dos dados; B) redigir ou rever o artigo em matéria de conteúdo intelectual; C) Aprovação final do artigo publicado; e d) acordo para prestar contas de todos os aspectos do artigo, assegurando assim que as questões relacionadas com a exactidão ou integridade de qualquer parte do artigo sejam devidamente investigadas e resolvidas.

divulgações de autores ou potenciais conflitos de interesses

após a submissão do manuscrito, todos os autores completaram o formulário de divulgação do autor. Divulgações e / ou potenciais conflitos de interesses:

emprego ou liderança

R. W. K. Chiu, Clinical Chemistry, AACC; Y. M. D. Lo, Clinical Chemistry, AACC, DRA Limited, Take2 Holdings.

Consultor ou Papel Consultivo

R. W. K. Chiu, Graal; Y. M. D. Lo, Graal, Decheng Capital; P. Mischel, sem limites Bio, Inc.

Stock Ownership

R. W. K. Chiu, Graal, DRA Limited, Take2 Holdings; Y. M. D. Lo, Graal, DRA Limited, Take2 Holdings; P. Mischel, Boundless Bio, Inc.

Honorária

nenhuma declarada.

financiamento da investigação

R. W. K. Chiu, Graal; A. Dutta, National Institutes of Health; Y. M. D. Lo, Graal, Hong Kong Research Grants Council Theme-Based Research Scheme T12-403 / 15N and T12-401 / 16W.

Expert Testimony

None declared.

Patentes

R. W. K. Chiu, PCT/CN2020/081066; A. Dutta, EUA PPA 62832443; Y. M. D. Lo, Várias patentes e aplicações de patentes em aplicativos de diagnóstico de célula livre de DNA; P. Mischel, SD-2019-149-1, SD-2019-149-2, SD-2019-149-3.

outra remuneração

A. Dutta, Gordon Research Conference, Cold Spring Harbor Lab, BIH Academy, Shenzhen Medical School.

Não-padrão de abreviaturas

• eccDNA

  extrachromosomal DNA circular

• ecDNA

  extrachromosomal DNA

• o dnamt

  DNA mitocondrial